8.2.3.13.1 الحد الأدنى لأوزان الخطوط والمحارف وأحجام الخطوط

من حيث المبدأ ، يشبه هذا الإجراء تحديد MIC في "وسط سائل". يتم تحضير العديد من أطباق بتري بتخفيفات تدريجية للمضاد الحيوي المذاب في الوسط المحدد. يضاف الأجار الذائب ، ويتم تبريد الأطباق لتصلب الأجار. تنتشر زراعة بكتريا واحدة أو أكثر على سطح الوسط وبعد الحضانة في منظم الحرارة للوقت المطلوب يحدد الحد الأدنى لتركيز المضاد الحيوي الذي يثبط فيه نمو البكتيريا ، ومن مزايا هذه الطريقة على طريقة المعايرة في الوسط السائل هو ذلك مناطق مختلفةيمكن زرع نفس الكأس أنواع مختلفةأو سلالات بكتيرية. نتيجة لذلك ، يمكن تحديد قيم MIC للعديد من البكتيريا في تجربة واحدة (الشكل 2.2).

1. تحديد نشاط المضادات الحيوية

1. العوامل المؤثرة في التعريف

/

الجدول 2.1. العوامل المؤثرة على تحديد نشاط المضاد الحيوي
كائن الاختبار
تكوين متوسط ​​(الأس الهيدروجيني والأيونات والمصل والمضادات)
حجم وكثافة اللقاح (عدم تجانس السكان ، آليات التعطيل ، دخول المواد المضادة)
ظروف الحضانة (الوقت ، درجة الحرارة ، التهوية)
أ. تكوين البيئة
ضع في اعتبارك ، على سبيل المثال ، مضادًا حيويًا يثبط التخليق الحيوي لأحد الأحماض الأمينية. إذا تم اختبار المضاد الحيوي في وسط بدون هذا الحمض الأميني ، فإنه يبدو أن له نشاطًا عاليًا جدًا ، بمعنى آخر ، انخفاض MIC. عند اختباره في وسط يحتوي على حمض أميني يثبط تركيبه والذي يمكن للبكتيريا الحصول عليه من الوسط ، سيبدو المضاد الحيوي غير نشط.
بالإضافة إلى هذه التأثيرات المحددة ، غالبًا ما تكون هناك تأثيرات بيئية أقل تحديدًا لا ترتبط ارتباطًا مباشرًا بآلية العمل أو بها التركيب الكيميائيمضاد حيوي. إحدى الحالات المثيرة للاهتمام بشكل خاص هي وجود المصل في الوسط. يتم إدخاله في الوسط أثناء تحديد MIC من أجل خلق ظروف فسيولوجية تشبه تلك الموجودة في الدم. ترتبط العديد من المضادات الحيوية ببروتينات المصل (خاصة الألبومين) ، ونتيجة لذلك ، يتم تقليل عدد جزيئات المضادات الحيوية المجانية التي يمكن أن تدخل الخلايا البكتيرية. عادة ما يرتبط ارتباط المضاد الحيوي ببروتينات المصل بإزعاج بدائل معينة في جزيئه.
من الواضح أن شروط تحديد MIC في وسط سائل تختلف عن تلك الموجودة في وسط كثيف ، فقط بسبب وجود أجار في وسط كثيف. يمكن أن يمتص Agar المحتوي على S03-rpyn-py المضاد الحيوي ، ويغير قدرته على الانتشار ، أو يمتص الأكسجين المذاب وبعض مكونات وسط المغذيات. ليس من المستغرب إذن أن تعتمد قيمة MIC لمضاد حيوي لجرثومة معينة على ما إذا كان يتم تحديده في وسط سائل أو صلب ، حتى لو كان الوسطان ، باستثناء وجود أو عدم وجود أجار ، متطابقين في التركيب. يجب أيضًا أن نتذكر أن فسيولوجيا الخلايا قد تختلف اعتمادًا على ما إذا كانت تنمو منفردة في سائل أو كمستعمرات على سطح وسط صلب.
جداً تأثير قوييتأثر نشاط المضادات الحيوية بقيمة الأس الهيدروجيني للوسط. بالإضافة إلى التأثيرات الثانوية ، مثل تأثير الأس الهيدروجيني على معدل نمو الكائنات الحية الدقيقة ، وبالتالي ،
ومع ذلك ، فإن لها تأثيرًا غير مباشر على قابليتها للتأثر ، ولقيمة الأس الهيدروجيني تأثير قوي جدًا ومباشر على قدرة الدواء على اختراق الخلية البكتيرية. على سبيل المثال ، تنتشر المواد في شكل غير مؤين بشكل أفضل من خلال ساق الخلية وغشاء البلازما أكثر من المواد الموجودة في شكل مؤين. وبالتالي ، يمكن أن يؤثر الرقم الهيدروجيني للوسط ، الذي يحدد درجة تأين المضاد الحيوي الأساسي أو الحمضي ، بشكل مباشر على معدل تغلغلها في البكتيريا ، وبالتالي على فعاليتها.
ب- كثافة وحجم البويضات البكتيرية
كثافة اللقاح هي عدد البكتيريا التي يتم تلقيحها بالنسبة للحجم الذي تنمو فيه. عادة ما يتم التعبير عنه بعدد الخلايا في 1 مل من الثقافة. قيمة اللقاح هي العدد الإجمالي للبكتيريا الملقحة. لا تتأثر MICs للعديد من المضادات الحيوية بالاختلافات في كثافة اللقاح الشائع الاستخدام (103-106 بكتيريا / مل). في الواقع ، حتى مع تركيزات منخفضة جدًا من المضادات الحيوية ، على سبيل المثال ، 0.01 ميكروغرام / مل ، تظل نسبة عدد جزيئات المضادات الحيوية إلى عدد الخلايا البكتيرية كبيرة جدًا تحتوي على ~ 1012 جزيء). ومع ذلك هناك بعض الاستثناءات. على سبيل المثال ، غالبًا ما يتم امتصاص الكثير من جزيئات المضادات الحيوية السطح الخارجيخلية بكتيرية. إذا كانت كثافة البكتيريا عالية ، فإن عدد جزيئات المضادات الحيوية المجانية التي يمكن أن تدخل الخلية يقل بشكل كبير. بالإضافة إلى ذلك ، لقمع نمو خلية واحدة ، غالبًا ما يكون ذلك ضروريًا عدد كبير منجزيئات المضادات الحيوية. مع نمو البكتيريا ، تقوم بتجميع وإطلاق الإنزيمات المتوسطة التي يمكن أن تدمر المضاد الحيوي (على سبيل المثال ، p-lactamases التي تعمل على المضادات الحيوية p-lactam ؛ انظر الفصل 4). كمية المضاد الحيوي التي تم تدميرها هي دالة لتركيز الإنزيم في وسط المغذيات وبالتالي تعتمد على حجم اللقاح.
للوهلة الأولى ، يبدو أنه إذا كانت كثافة ثقافة البكتيريا هي نفسها ، فلا يهم ما إذا كان نشاط المضاد الحيوي يُدرس بأحجام صغيرة ، على سبيل المثال ، 0.25 مل أو أقل في الأنظمة المصغرة ، أو في الحجم 10 مل في أنابيب المختبر التقليدية. إذا كانت جميع البكتيريا في مجتمع ما متطابقة ، فلن يكون هناك اختلاف في النتائج.
عندما يكون العدد الإجمالي للبكتيريا في اللقاح مرتفعًا جدًا ، فمن المرجح أن تكون الخلايا الأقل عرضة للمضادات الحيوية موجودة في الوسط. سيتم قمع نمو جميع الخلايا الحساسة ، ومع ذلك ، فإن الخلايا الأقل حساسية (من حيث المبدأ ، قد تكون خلية واحدة) سوف تتكاثر ، وبعد الحضانة لمدة 18 ساعة ،

الجدول 2.2. العوامل المؤثرة على نشاط بعض المضادات الحيوية

سكان البكتيريا كثافة عالية. عادة ما يشير التباين الكبير في قيمة MIC مع التغيير في عدد الخلايا الملقحة إلى تكرار مرتفع للطفرات المقاومة للمضادات الحيوية (الفصل 4). إن تواتر حدوث الطفرات المقاومة يختلف عن المضادات الحيوية المختلفة. أما المضادات الحيوية المستخدمة في العيادة فتتراوح من 10-7 إلى 10-10.
يصف هذا القسم بعيدًا عن جميع العوامل التي يمكن أن تؤثر على نشاط مضاد حيوي ضد بكتيريا معينة (الجدول 2.2). لذلك ، من أجل استخدام قمع نمو البكتيريا ل تحديد الكمياتنشاط المضادات الحيوية والحصول على البيانات التي يمكن استنساخها في مختبرات مختلفة ، من الضروري أن يتم تحديد جميع الشروط بدقة ، وإذا أمكن ، توحيدها.

(هيئة التصنيع العسكري) - أدنى تركيز مثبط (قمعي) - أقل تركيز لمضاد حيوي يثبط النمو المرئي للكائن الحي الدقيق للاختبار في المختبر(في المرق أو وسط المغذيات أجار) في ظل ظروف تجريبية قياسية ويتم التعبير عنها في ميكروغرام / مل (ملغم / لتر) أو وحدات / مل.

الحد الأدنى لتركيز مبيد الجراثيم (MBK) -أقل تركيز لمضاد حيوي عند اختباره في المختبريتسبب في موت 99.9٪ من الكائنات الحية الدقيقة من المستوى الأولي خلال فترة زمنية معينة.

حساسالكائنات الحية الدقيقة - سلالة من الكائنات الحية الدقيقة التي ليس لديها آليات لمقاومة هذا الدواء. يتوقف تناوله على وسط غذائي عند استخدام مضاد حيوي بجرعة علاجية.

مقاومة معتدلةالكائنات الحية الدقيقة - سلالة من الكائنات الحية الدقيقة ، يتوقف نموها على وسط غذائي فقط عند استخدام المضاد الحيوي بأعلى جرعة. يتم علاج الالتهابات التي تسببها الكائنات الحية الدقيقة المقاومة بشكل معتدل في حالة عدم وجود أدوية بديلة، أعلى جرعة (علاجية قصوى) من المضاد الحيوي.

مقاومة الكائنات الحية الدقيقة -سلالة من الكائنات الحية الدقيقة التي لها آليات مقاومة هذا الدواء. لا يتوقف نموه على وسط غذائي إلا عند استخدام تركيزات عالية جدًا من الدواء ، والتي لا يمكن إنشاؤها في الجسم بسبب سميتها العالية. في علاج الالتهابات التي تسببها هذه الكائنات الحية الدقيقة ، لا يوجد تأثير سريري للعلاج حتى عند استخدامه أعلى جرعةمضاد حيوي. في نفس الوقت ، قد يكون هناك آثار جانبيةمضاد حيوي.

مؤشرات لتحديد حساسية الكائنات الدقيقة للمضادات الحيوية:

1) تحديد الحساسية لمضاد حيوي جديد موصى باستخدامه ؛

2) المراقبة الدورية لمقاومة المضادات الحيوية لدى الفرد المراكز الطبيةوفي مناطق جغرافية مختلفة لرصد انتشار مقاومة المضادات الحيوية ؛

3) الأساس المنطقي للعلاج المناسب بالمضادات الحيوية لدى المرضى الأفراد في الحالات التالية:

أ) عزل الكائنات الحية الدقيقة عن السوائل المعقمة والأعضاء والأنسجة البشرية ؛

ب) عند عزل الكائنات الحية الدقيقة من البيئات الحيوية غير المعقمة بشكل أساسي ، يجب أن يسبق تقييم الحساسية تقييم الأهمية السريرية للكائن الدقيق المعزول ؛

ج) الالتهابات المقاومة لأدوية العلاج التجريبي ؛

د) الالتهابات الفريدة وقلة الخبرة في علاجهم ؛

ه) الالتهابات التي تتطلب علاجًا طويل الأمد (كل أسبوع من العلاج ، يتم الكشف عن مقاومة المضادات الحيوية ، حيث من الممكن تغيير مسببات الأمراض).

تحديد حساسية الكائنات الحية الدقيقة للمضادات الحيوية غير عملي:

1) للممثلين البكتيريا العاديةالبشر ، عندما يتم عزلهم عن الموائل الطبيعية ؛

2) لأنواع الكائنات الحية الدقيقة التي لم يتم وصف أشكال مقاومة لبعض المضادات الحيوية. على سبيل المثال ، تعتبر Streptococcus pyogenes حساسة للبنسلين ، لذلك من غير العملي إجراء اختبار حساسية لهذه الأدوية في الممارسة اليومية.

الجدول 2 من ملحق إجراءات إجراء الفحص الطبي للتسمم (كحولي أو مخدر أو غيره من المواد السامة) المصدق عليه بأمر من وزارة الصحة الاتحاد الروسي(مسودة) ، "مستويات القيم الحدية لمحتوى المخدرات ، المؤثرات العقلية، آخر مواد كيميائيةومستقلباتها على النحو الذي تحدده طرق التحليل التأكيدي.

ملحوظة: مستوى العتبة- هذا هو الحد الأدنى لتركيز مادة (مستقلبها) في جسم بيولوجي ، والذي تحدده طرق التحليل الأولي أو التأكيدي ، وعند اكتشافه تعتبر نتيجة الدراسة إيجابية.

في الواقع ، هناك جدول مشابه يسمى " مستويات العتبة للمقايسات التوكيدية في تحليل البول"يُمنح في المختبر المركزي للسموم الكيميائية في قسم علم السموم التحليلي والشرعي بالولاية مؤسسة تعليميةأعلى التعليم المهنيأول جامعة طبية في موسكو سميت باسم I.M. Sechenov (TsKhTL GOU VPO First Moscow State Medical University سميت على اسم I.M. Sechenov) من وزارة الصحة في الاتحاد الروسي بتاريخ 30 أغسطس 2011 رقم 179-25 / 12I ، حيث ، مع ذلك ، من بين أشياء أخرى ، يشار إلى تركيزات الفينوباربيتال (1000 نانوغرام / مل) ، والمواد الأخرى من مجموعة الباربيتورات (100 نانوغرام / مل) والكوتينين (100 نانوغرام / مل). أمر من وزارة الصحة والتنمية الاجتماعية في الاتحاد الروسي مؤرخ 27 يناير 2006 ، العدد 40 "بشأن تنظيم الدراسات الكيميائية والسمية في التشخيص التحليلي لوجود الكحول والمخدرات والمؤثرات العقلية وغيرها من المواد السامة في جسم الإنسان" ، تم تطوير واعتماد متطلبات إجراء المواد الكيميائية والسمية دراسات في التشخيص التحليلي لوجود العقاقير المخدرة والمؤثرات العقلية وغيرها من المواد السامة في جسم الإنسان.

على وجه الخصوص ، وفقًا للفقرة 12 من الرسالة الإعلامية ، عند إجراء الفحص الطبي لسائقي المركبات ، واختبار الطلاب ، وإجراء الدراسات الكيميائية والسمية عندما يتقدم المواطنون ، وفي الحالات الأخرى التي ينص عليها القانون ، دراسة السائل تجويف الفم(اللعاب) غير مقبول ، لأنه لا يسمح بإثبات وجود العقاقير المخدرة والمؤثرات العقلية وغيرها من المواد السامة في جسم الإنسان بشكل موثوق. المواد الخاضعة للرقابةيمكن تحديده في السائل الفموي (اللعاب) في فترة زمنية لا تتجاوز عدة ساعات من لحظة الاستخدام.

متطلبات الوسائل التقنيةتستخدم للكشف عن المخدرات والمؤثرات العقلية وغيرها من المواد السامة (نواتجها) في عينات البول ، أثناء الدراسات الكيميائية والسمية الأولية (الملحق رقم 1 إلى توصيات منهجية: قواعد إجراء الدراسات الكيميائية والسمية لتواجد الطلاب في الجسم المنظمات التعليميةوالمنظمات التعليمية المهنية ، وكذلك المنظمات التعليمية تعليم عالىبغرض الكشف المبكرالاستهلاك غير المشروع للعقاقير المخدرة والمؤثرات العقلية للعقاقير المخدرة والمؤثرات العقلية والمواد السامة الأخرى (نواتجها) / المطور: رابطة المتخصصين ومنظمات خدمات المختبرات "اتحاد طب المختبرات" ، حرره كبير المتخصصين لحسابهم الخاص في علم السموم التحليلي والطب الشرعي في وزارة الصحة الروسية ، الدكتور kh.s. ، البروفيسور B.N. إيزوتوف ورئيس أخصائي مستقل في الطب السريري التشخيص المختبريوزارة الصحة الروسية ، دكتوراه في العلوم الطبية ، الأستاذ أ.ج.كوتشيتوف // موسكو ، 2015)

متطلبات الوسائل التقنية المستخدمة في الكشف عن المخدرات والمؤثرات العقلية والمواد السامة الأخرى (نواتجها الأيضية) في عينات البول ، عند إجراء دراسات السمية الكيميائية التوكيدية (الملحق رقم 2 للمصدر أعلاه)

ومع ذلك ، في سياق الدفاع في قضايا المخالفات الإداريةبموجب المادتين 12.8 و 12.27 الجزء 3 من قانون الجرائم الإدارية للاتحاد الروسي ، وكذلك في القضايا التي تنطوي على مسؤولية جنائية عند القيادة أثناء السكر (المادتان 264 و 264.1 من القانون الجنائي للاتحاد الروسي) ، لا ينبغي لأحد أن ينسى ذلك تقع المسؤولية الإدارية في حالة وجود مواد مخدرة أو مؤثرات عقلية في جسم الإنسان بغض النظر عن تركيزها في جسم الإنسان وفي الدم وفي البول.

في ضوء ما تقدم ، فإن التحديد في إطار فحوصات الأدوية ، والدراسات الكيميائية والسمية ، ودراسات الطب الشرعي الكيميائي للمخدرات. المخدرات والمؤثرات العقلية والمواد السامة والمواد مسكر، حتى على مستوى ، إذا جاز التعبير ، "حد الكشف عن الطريقة المستخدمة" هو الأساس لجذب السائق عربةللمسؤولية الإدارية أو الجنائية بموجب المواد ذات الصلة من قانون الجرائم الإدارية للاتحاد الروسي و / أو القانون الجنائي للاتحاد الروسي.

للحصول على معلومات - " "

7. جوهر مفاهيم الحد الأدنى للتركيز المثبط (القمعي) والحد الأدنى لتركيز مبيد الجراثيم.

الحد الأدنى للتركيز المثبط (MIC)- الحد الأدنى من تركيز مادة العلاج الكيميائي أو المطهرة التي تسببها قمع كاملمرئي للعين المجردة نمومن هذا الكائن الدقيق على الوسائط في ظل ظروف تجريبية قياسية.

يقاس بالميكروجرام / مل أو الوحدات. أجراءات. يتم تأسيسه عن طريق زرع ثقافة الاختبار على وسائط صلبة أو سائلة تحتوي على تركيزات مختلفة من الدواء.

الحد الأدنى لتركيز مبيد الجراثيم (MBC)- الحد الأدنى من تركيز عامل العلاج الكيميائي أو المطهر المسبب تدمير كاملالبكتيريا تحت ظروف تجريبية قياسية.

تقاس بالميكروجرام / مل أو الوحدات. أجراءات. يتم تأسيسه عن طريق زرع ثقافة الاختبار على وسائط مغذية صلبة أو سائلة تحتوي على تركيزات مختلفة من الدواء. للتمييز من MICs عن المناطق المعقمة أو الأنابيب الشفافة ، يتم التلقيح على وسائط بدون الدواء (يشير ظهور النمو إلى تأثير ثابت ، وغيابه يشير إلى تأثير cidal).

يتم استخدام MBC و MIC في العلاج الكيميائي والمطهرات لاختيار الأدوية والجرعات الفعالة لمريض معين.

8. جوهر مفاهيم حساسية ومقاومة العامل الممرض وتأثير ما بعد المضادات الحيوية.

حساسية المثير- عدم وجود آليات مقاومة الكوليسترول. بينما يتم قمع تكاثر العامل الممرض بمتوسط ​​جرعة علاجية تتجاوز الحد الأدنى للتركيز المثبط بمقدار 2-4 مرات.

مقاومة مسببات الأمراض- وجود آليات مقاومة الكوليسترول. لا يتم قمع نمو العامل الممرض بتركيز الدواء الذي يحتوي على تأثير سامفي الجسم الحي.

تأثير ما بعد المضادات الحيوية- تثبيط مستمر للنشاط الحيوي للبكتيريا بعد ملامستها قصيرة الأمد لدواء مضاد للبكتيريا.

9. محددات السمية الانتقائية لعوامل العلاج الكيميائي.

1) يتراكم الكوليسترول في الخلايا الميكروبية بتركيزات أعلى بعدة مرات من خلايا الثدييات

2) يعمل CS على الهياكل الموجودة فقط في الخلية الميكروبية (جدار الخلية ، النوع الثاني DNA gyrase) وغائبة في خلية الثدييات

3) قانون CS على العمليات البيوكيميائية، تحدث حصريًا في الخلايا الميكروبية وغائبة في خلايا الثدييات.

10. جوهر الاختلاف بين الخصائص الدوائية والعلاج الكيميائي.

1. يعمل العلاج الديناميكي الدوائي على مستوى هندسة النظم الوظيفية ، وعادة ما تكون آثاره قابلة للعكس. بالنسبة للعلاج الكيميائي ، فإن العوامل التي لها تأثير لا رجعة فيه هي الأكثر قيمة.

2. تسبب العوامل الديناميكية الدوائية استجابة تدريجية لنظام الجسم ، وبالنسبة لعوامل العلاج الكيميائي فإن أكثر التأثيرات المرغوبة هي "الكل أو لا شيء".

3. العلاج الكيميائي له إستراتيجية موجّهة لسبب المرض تهدف إلى تدمير العامل الممرض أو الخلايا المحولة في الجسم ، ويمكن أن يكون العلاج الديناميكي الدوائي مسببًا للمرض ومسببًا للأمراض.

11. المبادئ الأساسية للعلاج الكيميائي العقلاني.

1. يجب أن يكون العامل الممرض حساسًا لـ AB

قاعدة "أفضل عرض" - جداول مرجعية ، مع الأخذ في الاعتبار الخصائص السكانية الإقليمية للحساسية المضادة للبكتيريا.

2. يجب على AB إنشاء تركيز علاجي في بؤرة التركيز.

3. نظام الجرعات المناسب في الغالب ، اعتمادًا على:

ü الممرض

ديناميات المسار السريري للعدوى

توطين العدوى

ü مدة وطبيعة مسار العدوى (حاد ، مزمن ، ناقل جرثومي)

4. المدة المثلى للعلاج الكيميائي بمضادات الميكروبات (مثال: التهاب البلعوم العقدي قابل للشفاء في 10 أيام ، التهاب الإحليل الحاد غير المصحوب بمضاعفات بالمكورات البنية في 1-3 أيام ، التهاب المثانة الحاد غير المعقد في 3 أيام).

لمنع ردود الفعل السلبية ، وتطوير العدوى أو المقاومة ، يجب أن تتوافق مدة العلاج مع فترة استئصال العامل الممرض.

5. حساب عوامل المريض:

تاريخ الحساسية والكفاءة المناعية

وظيفة الكبد والكلى

ü تحمل AB عند تناوله عن طريق الفم ؛ امتثال

شدة الحالة

ü العمر ، الجنس ، الحمل أو الرضاعة ، موانع الحمل الفموية

ü الآثار الجانبية

6. العلاج بالمضادات الحيوية المركبة.