رد فعل تثبيط التراص الدموي في علم الفيروسات. تفاعل تثبيط التراص الدموي (HRT)

يعتمد RHA على قدرة خلايا الدم الحمراء على الالتصاق ببعضها البعض عندما يتم امتصاص مستضدات معينة عليها. يتم استخدام السائل السقاء والسلوي، وتعليق الأغشية المشيمائية لأجنة الدجاج، والمعلقات والمستخلصات من المزارع أو أعضاء الحيوانات المصابة بالفيروسات، والمواد المعدية المحلية كمواد اختبار للتراص الدموي. RGA ليس مصليًا، لأنه يحدث بدون مشاركة المصل المناعي ويستخدم لتحديد التخفيف العامل للمستضد لإجراء RGA أو وجود مستضد (فيروس) في مادة الاختبار (على سبيل المثال، للأنفلونزا). يستخدم التفاعل خلايا الدم الحمراء للحيوانات والطيور والبشر من فصيلة الدم I (0).

لإعداد RGA تقريبي، يتم تطبيق قطرة من تعليق 5٪ من خلايا الدم الحمراء وقطرة من مادة الاختبار على شريحة زجاجية وتخلط جيدًا. إذا كانت النتيجة إيجابية، بعد 1-2 دقيقة يتم ملاحظة ظهور تراص كريات الدم الحمراء بشكل مجهري.

لإعداد RGA في صف غير مطوي في آبار ألواح البوليسترين، يتم تحضير التخفيفات المتزايدة بشكل مضاعف لمواد الاختبار في محلول فسيولوجي بحجم 0.5 مل. يضاف 0.5 مل من معلق 0.25 - 1% من خلايا الدم الحمراء إلى جميع أنابيب الاختبار. تؤخذ النتائج في الاعتبار بعد الترسيب الكامل لكريات الدم الحمراء في السيطرة (خلايا الدم الحمراء + المحلول الملحي). يؤخذ التفاعل في الاعتبار حسب طبيعة رواسب كرات الدم الحمراء. في الحالات الإيجابية، يتم وضع علامة على درجة التراص بالإيجابيات. يتم تقييم التفاعل الذي يشبه طبقة رقيقة من خلايا الدم الحمراء اللزجة التي تغطي الجزء السفلي من أنبوب الاختبار (المظلة) بأربع إيجابيات؛ ويتم تمييز التفاعل الذي يحتوي على فجوات في الفيلم بثلاث إيجابيات؛ ووجود فيلم مزود بشريط صدفي تتميز حواف خلايا الدم الحمراء اللزجة بإيجابيتين: رواسب ندفية من خلايا الدم الحمراء محاطة بمنطقة من الكتل المتراصة من كريات الدم الحمراء تتوافق مع زائد واحد. تشير رواسب كريات الدم الحمراء المحددة بشكل حاد والتي لا يمكن تمييزها عن عنصر التحكم إلى عدم وجود تراص. يعتبر العيار هو الحد الأقصى للتخفيف من مادة الاختبار التي تسببت في تراص كريات الدم الحمراء بواسطة إيجابيتين.

إذا كانت نتيجة RHA إيجابية، تستمر الدراسة، لتحديد نوع الفيروس المعزول باستخدام تفاعل تثبيط التراص الدموي مع الأمصال الخاصة بالنوع.

يعتمد RTGA على خاصية المصل المضاد لقمع تراص الدم الفيروسي، حيث أن الفيروس الذي يتم تحييده بواسطة أجسام مضادة معينة يفقد القدرة على تراص خلايا الدم الحمراء. بالنسبة للكتابة المبدئية للفيروسات، يتم استخدام طريقة القطرات على الزجاج. لتحديد نوع الفيروس المعزول بشكل نهائي ومعايرة الأجسام المضادة في الأمصال، يتم وضع RTGA الموسع في أنابيب الاختبار أو الآبار. لهذا الغرض، يتم تحضير تخفيفات مزدوجة من الأمصال في محلول فسيولوجي وتوزيعها في 0.25 مل. أضف إلى تخفيفات المصل قطرة واحدة من مادة تحتوي على الفيروس وقطرة واحدة من معلق 1% من خلايا الدم الحمراء.

عند استخدام RTGA لتحديد نوع الفيروس، يتم استخدام الأمصال الخاصة بالنوع، والتي تتم إضافتها إلى حجم متساوٍ من التخفيف العامل للمستضد. يتم تحديد نوع الفيروس المعزول من خلال المصل المناعي النوعي الذي أظهر أعلى عيار من الأجسام المضادة لهذا الفيروس.

يتم استخدام RGA وRTGA على نطاق واسع لتشخيص الالتهابات الفيروسية ( إلتهاب الدماغ المعدي، والأنفلونزا، وما إلى ذلك) من أجل اكتشاف أجسام مضادة محددة وتحديد العديد من الفيروسات بواسطة مستضداتها.

مبدأ RTGAيتكون من خلط كميات متساوية من مصل الدم ومعلق الفيروس في أنبوب اختبار، وبعد التعرض، يتم تحديد ما إذا كان الفيروس سيبقى في الخليط عن طريق إضافة معلق من خلايا الدم الحمراء. يشير تراص كريات الدم الحمراء إلى وجودها، وغياب التراص الدموي يشير إلى عدم وجود الفيروس في الخليط. ويعتبر اختفاء الفيروس من الفيروس + خليط المصل علامة على التفاعل بين الأجسام المضادة في المصل والفيروس.

لكن الأجسام المضادة تتفاعل مع المستضدات بنسب كمية محددة بدقة. لذلك، من أجل حرمان كمية معينة من الفيروس من قدرته على التراص الدموي، يلزم حد أدنى معين من الأجسام المضادة، وبما أن أحد مكونات RTHA غير معروف دائمًا، فيجب وضع التفاعل في سلسلة من أنابيب اختبار بجرعات مختلفة من الأجسام المضادة ونفس جرعات الفيروس، أو العكس. يتم تحقيق ذلك عن طريق أخذ أو تخفيفات مختلفةالمصل وبنفس التخفيف للفيروس، أو تخفيفات مختلفة للفيروس وبنفس التخفيف للمصل.

يتيح لك RTGA حل المشكلات التالية: تحديد عيار الأجسام المضادة لفيروس التراص الدموي في المصل؛ التعرف على فيروس تراص الدم غير معروف من الأمصال المعروفة؛ تحديد درجة الارتباط المستضدي للفيروسين.

مزايا RTGA:بساطة التقنية، السرعة، عدم الحاجة إلى عمل معقم، الخصوصية، التكلفة المنخفضة. العيب: RTGA ممكن فقط مع الفيروسات الملتصقة بالدم.

مبدأ معايرة الأجسام المضادة في RTGAعلى النحو التالي:

– تحضير سلسلة من التخفيفات المتعاقبة (عادة 2 أضعاف) من مصل الاختبار بأحجام متساوية (عادة 0.25 أو 0.2 مل)؛

- لكل تخفيف، أضف نفس الكميات من الفيروس المتماثل في عيار 4 HAE؛

- يتم حفظ المخاليط لفترة معينة عند درجة حرارة معينة (لفيروس مرض نيوكاسل 40-60 دقيقة في درجة حرارة الغرفة)؛

– تضاف كميات متساوية من معلق 1% من كريات الدم الحمراء المغسولة إلى جميع المخاليط؛

– بعد التعرض، يتم تقييم التراص الدموي في كل خليط على شكل تهجينات.

يشمل التفاعل ضوابط المصل والفيروسات وخلايا الدم الحمراء.

يتم أخذ أعلى تخفيف في المصل والذي لا يزال يمنع التراص الدموي تمامًا كمؤشر على عيار الأجسام المضادة في هذا المصل.

استخدام رد فعل امتصاص الدم في علم الفيروسات.

رجاد.تم اكتشاف الامتصاص الدموي - اتصال كريات الدم الحمراء بسطح الخلايا المصابة بالفيروس - لأول مرة بواسطة فوجل وشيلوكوف (1957) في مزرعة أنسجة مصابة بفيروس الأنفلونزا. وتعتمد هذه الظاهرة على تقارب مستقبلات الفيروس الموجودة على سطح الخلية المصابة مع مستقبلات كريات الدم الحمراء، مما يؤدي إلى التصاقها المتبادل بشكل يشبه تفاعل التراص الدموي. وميزة هذا التفاعل هو أنه يصبح إيجابيا حتى قبل ظهور تغيرات خلوية مميزة في الخلايا المصابة.

تقنية رجادعلى النحو التالي. في اليوم 3-4 بعد إصابة الخلايا، يتم أخذ أنبوبين من نفس مزرعة الخلية، أحدهما مصاب بمادة تحتوي على الفيروس، والثاني هو السيطرة. يتم تصريف السائل المزروع من كلا الأنبوبين ويتم إضافة 2-3 قطرات من معلق 0.5% من كريات الدم الحمراء المغسولة إلى كليهما. يُترك كلا الأنبوبين لمدة 5-10 دقائق بحيث تكون خلايا الدم الحمراء على سطح الخلايا (توضع أفقيًا على الطاولة)، ثم يتم شطفهما قليلًا بالمحلول الملحي وفحصهما تحت المجهر (تكبير منخفض). في أنبوب التحكم، تتم إزالة خلايا الدم الحمراء بالكامل باستخدام المحلول الملحي، ويطفو جزء من الخلايا المتبقية مع السائل. إذا لم تتم إزالة خلايا الدم الحمراء الموجودة في الأنبوب المصاب بالمحلول الملحي ولم تطفو، ولكنها تعلق على سطح الخلايا، فيجب اعتبار RGAd إيجابيًا.

اعتمادًا على الفيروس ونوع الخلية، يمكن أن يكون ترتيب خلايا الدم الحمراء ثلاثيًا:

– يتم امتصاص خلايا الدم الحمراء فقط على طول محيط طبقة الخلية على شكل “قلادة” (فيروس الطاعون الأفريقيالخنازير)؛

– توجد خلايا الدم الحمراء على طبقة الخلايا في بؤر أو مجموعات (فيروس الأنفلونزا)؛

– توجد خلايا الدم الحمراء بشكل منتشر على طبقة الخلايا (فيروس نظير الانفلونزا).

كل فيروس قادر على امتصاص خلايا الدم الحمراء لأنواع معينة من الحيوانات.

التشخيص المصلي للأمراض الفيروسية عن طريق زيادة عيار الأجسام المضادة في أمصال الدم المقترنة.

تفاعل التراص الدموي (HRA) وتفاعل تثبيط التراص الدموي (HIR)، آلية ومكونات وتطبيق التفاعلات.

يعتمد تفاعل التراص الدموي على ظاهرة التصاق خلايا الدم الحمراء، والتي تحدث تحت تأثير عوامل مختلفة. هناك التراص الدموي المباشر وغير المباشر.

أولاً، يتم غسل خلايا الدم الحمراء بمحلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر، ثم، إذا لزم الأمر (عند استخدام مستضدات البروتين)، يتم معالجتها بمحلول التانين بنسبة 1: 20000 ويتم حساسيتها بمستضدات قابلة للذوبان. بعد الغسيل بمحلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر، يصبح مستضد كريات الدم الحمراء جاهزًا للاستخدام.

يتم تخفيف أمصال الاختبار بمحلول متساوي التوتر من كلوريد الصوديوم في أنابيب اختبار أو ألواح بلاستيكية خاصة ذات فتحات، ثم يضاف تشخيص كريات الدم الحمراء إلى كل تخفيف للمصل. وتؤخذ نتائج تفاعل التراص الدموي غير المباشر بعين الاعتبار طبيعة رواسب خلايا الدم الحمراء المتكونة في قاع الأنبوب. تعتبر نتيجة التفاعل التي تغطي فيها خلايا الدم الحمراء الجزء السفلي من الأنبوب بالكامل بالتساوي إيجابية. في حالة حدوث رد فعل سلبي، توجد خلايا الدم الحمراء على شكل قرص صغير أو “زر” في منتصف الجزء السفلي من أنبوب الاختبار

المكونات الرئيسية لبرنامج RP:

أ) مستضد قابل للذوبان،

ب) الأجسام المضادة المحددة (المصل)

(RTGA) هي طريقة للتعرف على الفيروس أو الكشف عن الأجسام المضادة للفيروسات في مصل دم المريض، تعتمد على ظاهرة غياب تراص خلايا الدم الحمراء بواسطة دواء يحتوي على فيروس في وجود مصل دم محصن ضده.
يعتمد على الحصار، وقمع المستضدات الفيروسية بواسطة الأجسام المضادة في المصل المناعي، ونتيجة لذلك تفقد الفيروسات قدرتها على تراص خلايا الدم الحمراء.

يستخدم RTGA لتشخيص العديد من الأمراض الفيروسية، التي يمكن للعوامل المسببة لها (فيروسات الأنفلونزا، الحصبة، الحصبة الألمانية، التهاب الدماغ الذي ينقله القراد، وما إلى ذلك) أن تتراكم كريات الدم الحمراء في الحيوانات المختلفة.
آلية.تتم كتابة الفيروس باستخدام تفاعل تثبيط التراص الدموي (HAI) مع مجموعة من الأمصال الخاصة بالنوع. تؤخذ نتائج التفاعل في الاعتبار بسبب غياب التراص الدموي. أنواع فرعية من الفيروس A مع المستضدات H0N1، H1N1، H2N2، H3N2، إلخ.

يمكن تمييزها في RTGA مع مجموعة من الأمصال المتماثلة الخاصة بالنوع.

في الصميم تفاعلات التراص الدموي وتكمن ظاهرة التصاق خلايا الدم الحمراء، والتي تحدث تحت تأثير عوامل مختلفة.

هناك التراص الدموي المباشر وغير المباشر.
في تفاعل التراص الدموي المباشر، تلتصق خلايا الدم الحمراء معًا عندما يتم امتصاص مستضدات معينة، مثل الفيروسات، عليها.
في الدراسات المصلية، يتم استخدام تفاعل تثبيط التراص الدموي المباشر، عندما يتم تحييد الفيروس المعزول من المريض بمصل مناعي محدد ثم دمجه مع خلايا الدم الحمراء.

يشير غياب التراص الدموي إلى تماسك الفيروس والمصل المناعي المستخدم.

يتم ملاحظة تفاعل التراص الدموي غير المباشر (التراص الدموي السلبي) في الحالات التي يتم فيها إضافة مصل مناعي أو مصل مريض يحتوي على أجسام مضادة مناسبة إلى خلايا الدم الحمراء التي تم علاجها (توعية) مسبقًا بمستضدات مختلفة.

يحدث التصاق محدد لخلايا الدم الحمراء، والتراص الدموي السلبي.

يتفوق تفاعل التراص الدموي غير المباشر أو السلبي في الحساسية والنوعية على الطرق المصلية الأخرى، ويستخدم في تشخيص الالتهابات التي تسببها البكتيريا، والريكتسيا، والأوالي.

تتكون طريقة إجراء تفاعل التراص الدموي غير المباشر من عدة مراحل.

أولاً، يتم غسل خلايا الدم الحمراء بمحلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر، ثم، إذا لزم الأمر (عند استخدام مستضدات البروتين)، يتم معالجتها بمحلول التانين بنسبة 1: 20000 ويتم حساسيتها بمستضدات قابلة للذوبان.

بعد الغسيل بمحلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر، يصبح مستضد كريات الدم الحمراء جاهزًا للاستخدام. يتم تخفيف أمصال الاختبار بمحلول متساوي التوتر من كلوريد الصوديوم في أنابيب اختبار أو ألواح بلاستيكية خاصة ذات فتحات، ثم يضاف تشخيص كريات الدم الحمراء إلى كل تخفيف للمصل.

وتؤخذ نتائج تفاعل التراص الدموي غير المباشر بعين الاعتبار طبيعة رواسب خلايا الدم الحمراء المتكونة في قاع الأنبوب. تعتبر نتيجة التفاعل التي تغطي فيها خلايا الدم الحمراء الجزء السفلي من الأنبوب بالكامل بالتساوي إيجابية. في رد الفعل السلبي، توجد خلايا الدم الحمراء على شكل قرص صغير أو “زر” في منتصف الجزء السفلي من أنبوب الاختبار.

رد فعل تثبيط التراص الدموي - التفاعل المصلي، بناءً على قدرة الأجسام المضادة على منع تراص كريات الدم الحمراء عن طريق أنواع الفيروسات الملتصقة بالدم (الفيروسات الغدية والفيروسات المفصلية وبعض الفيروسات المعوية وفيروسات الأنفلونزا ونظير الأنفلونزا والحصبة والفيروسات الرجعية).

تتفاعل الأجسام المضادة المحددة المضادة للفيروسات مع جزيئات الراصة الدموية السطحية لفيروسات هذه الفيروسات وتمنع ارتباطها بالجزيئات المكملة لغشاء كرات الدم الحمراء.

في مؤخرايُستخدم هذا التفاعل على نطاق واسع في مختبرات علم الفيروسات السريرية لتحديد عيارات أجسام مضادة معينة لفيروسات معينة، بالإضافة إلى التحديد المصلي وتصنيف الفيروسات المعزولة من المواد السريرية المأخوذة من المرضى.

استخدامها محدود إلى حد ما بسبب وجود مثبطات فيروسية غير محددة في مصل الدم البشري، وكذلك الأجسام المضادة الطبيعية - الراصات.

تفاعل التعادل هو تفاعل تثبيط التراص الدموي (HAI).

يستخدم RTGA:
-للفيروسات المصلية؛
– للتشخيص المصلي للعدوى.
هناك طريقتان للإعداد:
- طريقة التنقيط على الزجاج ( رد فعل إرشادي)، يستخدم للنسخ المصلي للفيروسات؛
- الموسع في أنابيب الاختبار.

آلية.

تحتوي بعض الفيروسات (مثل الأنفلونزا) على الهيماجلوتينين، الذي يسبب تراص خلايا الدم الحمراء في الحيوانات المختلفة، اعتمادًا على نوع الفيروس.

في وجود الأجسام المضادة - مضادات الهيماجلوتينين - في المصل، لوحظ تثبيط النشاط الفيروسي.
RTGA.
الهدف: التنميط المصلي لفيروس الأنفلونزا A

عناصر:
1. المادة قيد الدراسة هي السائل السقاء لجنين الدجاج،
2. الأمصال التشخيصية المضادة للأنفلونزا من النوع المحدد،
3. 5% معلقه من كريات الدم الحمراء للدجاج.
4.

ملحي.

يتم التفاعل على الزجاج باستخدام طريقة الإسقاط. ضع قطرة واحدة من الأمصال التشخيصية ومواد الاختبار على الزجاج، واخلطها، ثم أضف قطرة واحدة من معلق خلايا الدم الحمراء. مع رد فعل إيجابي، لوحظ احمرار متجانس، ومع رد فعل سلبي، تسقط رقائق حمراء (تراص دموي).

السابق31323334353637383940414243444546التالي

خصائص فيروسات الأنفلونزا. علم الأوبئة وتشخيص الأنفلونزا. استخدام RTGA للتنميط المصلي لفيروسات الأنفلونزا. الاستعدادات للوقاية والعلاج محددة.

الانفلونزا أو الانفلونزا - حادة عدوى، ويتميز بتلف الأغشية المخاطية العلوية الجهاز التنفسي، الحمى، التسمم العام، اضطراب في القلب والأوعية الدموية والجهاز العصبي.

الأنفلونزا عرضة للانتشار الوبائي والجائحي بسبب ارتفاع معدل العدوى وتقلب العامل الممرض.

خصائص مسببات الأمراض. مسببات الأمراض - تنتمي فيروسات الأنفلونزا إلى العائلة. Orthomyxoviridae، أجناس فيروسات الأنفلونزا A وB وفيروسات الأنفلونزا C. فيروسات الأنفلونزا هي فيروسات RNA. تم عزل فيروس الأنفلونزا من النوع A في عام 1933 بواسطة دبليو سميث، وك. أندروز، وب. ليدلاو. في عام 1940 ت.

تطبيق طريقة التراص الدموي في علم الفيروسات.

قام فرانسيس وآر ماجيل بعزل فيروسات الأنفلونزا من النوع ب، في عام 1949 من نوع ر. تايلور - من النوع ج. وفي روسيا، تم عزل فيروسات الأنفلونزا الأولى في عام 1936 بواسطة أ. أ. سمورودينتسيف وتم تصنيفها على أنها من النوع أ. فيروسات الأنفلونزا لها شكل كروي (شكل كروي) - 80 - 120 نانومتر، وفي كثير من الأحيان يكون لها شكل خيطي. تتكون من: 1) نواة - قفيصة نووية من النوع الحلزوني المتماثل (شريط خطي مفرد "-" من RNA + قفيصة بروتين)؛ 2) الغشاء القاعدي - الغشاء البروتيني الدهني الخارجي - القفيصة الفائقة.

يوجد على سطح القشرة بروتينات سكرية (على شكل أشواك وزغابات) من نوعين: 1) الراصة الدموية - يعزز الارتباط بمستقبلات الخلية؛ 2) النورامينيداز - يعزز إطلاق الفيروس من الخلية. زراعة. للزراعة، يتم استخدام أجنة الدجاج، ومزارع الخلايا التربسينية الأولية، وأحيانا حيوانات المختبر.

النموذج الأكثر ملاءمة هو أجنة الدجاج 10-12 -أيام العمر. فهو يتيح لك الحصول على كميات كبيرة من الفيروس الضروري في إنتاج اللقاحات والأدوية المضادة للبكتيريا.

يتم تنفيذ العدوى في التجويف الخيفي، في الغشاء المشيمي الخيفي، في التجويف السلوي، في السلى. يتم الكشف عن وجود الفيروس في جنين الدجاج عن طريق تفاعل التراص الدموي. هيكل مستضدي. تحتوي الفيروسات على مستضد داخلي - S ومستضدات سطحية: HA-hemagglutinin وNA-neuraminidase. مستضد S خاص بالمجموعة، وهو مشترك بين النوع بأكمله؛ ووفقًا لهذا المستضد، تنقسم فيروسات الأنفلونزا إلى أنواع A وB وC. وهو مستضد ثابت ومستقر (غير متغير).

مستضدات HA و NA هي مستضدات محددة. يتسبب مستضد HA في تكوين أجسام مضادة تحييد الفيروس والتصاق خلايا الدم الحمراء.

يتسبب مستضد NA في تكوين أجسام مضادة تعمل على تحييد الفيروسات جزئيًا.

فيروس النوع B أقل تغيرًا، بينما النوع C مستقر للغاية.

خصائص سامة. التأثير السام للفيروس على الجسم ( صداع, ألم عضلي، درجة الحرارة، أعراض النزلة) سببها البروتينات الفيروسية (الجسيم الفيروسي نفسه). هذا الإجراء محدد تمامًا ولا يتم تحييده إلا عن طريق المصل المناعي من النوع أو النوع الفرعي أو المصل المناسب لأولئك الذين تعافوا من المرض. مقاومة. فيروسات الأنفلونزا حساسة للأشعة فوق البنفسجية والمطهرات (الفورمالين والكحول والفينول والكلورامين) والمذيبات الدهنية.

وفي البيئة السائلة تموت عند درجة حرارة 50 - 60 درجة مئوية لعدة دقائق. في درجة حرارة الغرفة في الهواء، تحتفظ الفيروسات بخصائصها المعدية لعدة ساعات. إنها تدوم لفترة طويلة عند تجفيفها، وعندما يتم تجميدها (-70 درجة مئوية) فإنها لا تدوم لفترة طويلة فحسب، ولكنها أيضًا لا تفقد فوعتها.

حساسية الحيوان. في الظروف الطبيعية، تصيب الفيروسات من النوع A البشر والحيوانات (تتأثر الخيول والخنازير)، بينما تصيب الفيروسات من النوع B وC البشر فقط. من بين حيوانات المختبر، تعتبر الفئران البيضاء، والقوارض الأفريقية، والهامستر السوري، والقرود حساسة للفيروسات.

يتميز المرض عند الحيوانات بتلف الرئة وحالة الحمى ويمكن أن يؤدي إلى نفوق الحيوانات. وبائيات المرض. مصدر العدوى هو شخص مريض ذو شكل واضح سريريًا أو بدون أعراض. يقوم الشخص المريض بإطلاق الفيروس إلى داخله بيئةعند السعال والتحدث والعطس مع قطرات من اللعاب والمخاط والبلغم بالفعل خلال فترة الحضانة.

يصبح المريض معديًا قبل 24 ساعة من ظهور الأعراض الرئيسية ويشكل خطرًا وبائيًا خلال 48 ساعة بعد اختفائها.

آلية النقل هوائية. طريق النقل محمول جوا. إن قابلية الناس للإصابة بالأنفلونزا عالية جدًا. الجميع يمرض الفئات العمرية، وخاصة في فصل الشتاء. الأطفال وكبار السن هم الأكثر عرضة للإصابة. يعكس اسم المرض خصوصيات علم الأوبئة: الأنفلونزا من الفرنسيين. القابض - انتزاع الأنفلونزا - من الإيطالية. انفلونزا دي فريدو - تأثير البرد.

من بين كل التوابل أمراض الجهاز التنفسيالانفلونزا هي الأكثر انتشارا و مرض خطير. تغطي الأوبئة وأوبئة الأنفلونزا ما يصل إلى 30-50% أو أكثر من السكان الكرة الأرضيةمما تسبب في أضرار جسيمة على صحة واقتصاد البلدان. تعود الأوصاف الأولى لأوبئة الأنفلونزا إلى القرنين الثاني عشر والرابع عشر. يحدث حدوث الجوائح والأوبئة الكبرى بسبب فيروس الأنفلونزا من النوع A، والذي يرجع إلى التباين الكبير للفيروس ويرتبط بظهور نوع فرعي جديد نتيجة تحول المستضد.

بين الأوبئة، تحدث حالات تفشي الوباء كل 1.5-2 سنة، وهو ما يرتبط بانجراف مستضدات الفيروسات. في عام 1918، كان سبب جائحة الأنفلونزا الإسبانية (مرض 1.5 مليار شخص، ومات 20 مليون شخص) هو فيروس الأنفلونزا A1. تم تسجيل هذا الوباء في البداية في إسبانيا، وقد غطى هذا الوباء جميع سكان الأرض تقريبًا؛ تميز المرض بتطور الالتهاب الرئوي النزفي الشديد للغاية مع معدل وفيات قياسي (يصل إلى 1٪ من جميع الحالات).

في عام 1957، كان سبب الوباء "الآسيوي" (2 مليار شخص) هو نوع فرعي جديد - النوع الفرعي A2. في عام 1968، كان سبب جائحة "هونج كونج" (مرض مليار شخص) هو نوع فرعي ناشئ حديثًا - النوع الفرعي A3. عادة، يحل متغير جديد من الفيروس محل البديل المنتشر سابقًا بين البشر.

ولكن في عام 1977، بعد انقطاع دام 20 عامًا، عاد النوع A1 بشكل غير متوقع، مما أدى إلى انتشار وباء كبير. ونتيجة لذلك، تستمر المتغيرات النازحة من فيروس الأنفلونزا، ويمكن أن تسبب وباءً مرة أخرى في فترات معينة. فيروس النوع B يسبب أوبئة محلية، لكن النوع C لا يسبب أوبئة. التسبب والصورة السريرية للمرض. بوابة الدخول هي الجهاز التنفسي العلوي. يغزو الفيروس الخلايا الظهارية للغشاء المخاطي ويتكاثر فيها.

يؤدي تأثير الفيروس على الخلايا الظهارية إلى نخرها وتقشرها (رفضها) للظهارة، ونتيجة لذلك يصبح الغشاء المخاطي نافذاً للفيروسات والبكتيريا. إنها تخترق الدم وتنتشر في جميع أنحاء الجسم." يصاحب فيروس الدم آفات متعددة في بطانة الأوعية الدموية مع زيادة في نفاذيتها.

في الحالات الشديدةويلاحظ نزيف واسع النطاق في الرئتين وعضلة القلب والأعضاء المتني. هناك منتجات انهيار الخلايا التالفة والبروتينات الفيروسية تأثير سامعلى مختلف الأجهزة وأنظمة الأعضاء. تعمل سموم الفيروس على ضغط الجهاز العصبي المركزي بقوة، وعلى الرغم من أن العملية لا تستمر طويلا (3 - 5 أيام)، إلا أن الشخص المريض يبقى ضعيفا لفترة طويلة وتنضم بعض العدوى الثانوية إلى الجسم الضعيف وتظهر مضاعفات: الالتهاب الرئوي الأنفلونزا ، الوذمة الرئوية الحادة، تلف الكلى، القلب، القصبات الهوائية.

من المضاعفات الشائعة للأنفلونزا الالتهاب الرئوي الجرثومي (المكورات العقدية من المجموعة ب). خلال جائحة الأنفلونزا الإسبانية، مات الناس بشكل رئيسي بسبب الالتهاب الرئوي البكتيري الثانوي.

في التسبب في الأنفلونزا، ليس فقط التسمم هو المهم، ولكن أيضا الحساسية، فضلا عن انتهاك الخصائص الوظيفية للخلايا المناعية مع تطور نقص المناعة. فترة الحضانة- عدة ساعات - 1-3 أيام. تتميز ببداية حادة، ارتفاع في درجة الحرارة إلى 37.5 - 38 درجة مئوية، تسمم عام، معبر عنه بالضيق، والصداع، والألم في مقل العيون, العمليات الالتهابيةالجهاز التنفسي بدرجات متفاوتة (التهاب الأنف، التهاب الحنجرة، التهاب القصبات الهوائية، التهاب البلعوم).

تستمر حالة الأنفلونزا الحموية دون مضاعفات لمدة 5-6 أيام. حصانة. بعد المرض، يتم تشكيل مناعة خاصة بالنوع ومناعة خاصة بالسلالة، والتي يتم توفيرها من خلال عوامل خلوية وخلطية محددة وغير محددة. أهمية عظيمةلديك أجسام مضادة Ig A. لا تتطور المناعة المتقاطعة، بعد الإصابة بالأنفلونزا من النوع A1، يمكن أن تصاب بالأنفلونزا من النوع A2، وما إلى ذلك. بعد فيروس من النوع B، تستمر المناعة لمدة 1-2 سنوات، بعد فيروس من النوع B - 3-5 سنوات.

المناعة الطبيعية السلبية - عند الأطفال أقل من 8 - 11 شهرًا. بسبب التباين المستضدي العالي للفيروس، فإن التعافي لا يؤدي إلى تطوير مناعة مستقرة ضد الالتهابات المتكررة.

التشخيص المختبري. المواد قيد الدراسة: مسحات - بصمات من الغشاء المخاطي للتجويف الأنفي، وإفرازات من البلعوم الأنفي، وقطع من الرئتين، والدماغ في حالة الوفاة.

طرق التشخيص: 1) طريقة التنظير الخلوي - الكشف عن الشوائب داخل الخلايا الخاصة بالفيروس - عند صبغها بالبيوكتانين تحت المجهر، تظهر شوائب حمراء زاهية لفيروس الأنفلونزا في خلايا الظهارة الهدبية؛ 2) الطريقة الفيروسية - عزل فيروس الأنفلونزا من جسم الإنسان عن طريق إصابة أجنة الدجاج بمسحة من البلعوم الأنفي للمريض؛ يتم تحديد (وجود) الفيروس باستخدام RGA (فيروسات الأنفلونزا تتراكم كريات الدم الحمراء لدى البشر والحيوانات المختلفة)، ويتم تحديد الفيروس على مراحل: يتم تحديد النوع في RSC، ويتم تحديد النوع الفرعي للهيماجلوتينين في يتم تحديد RGA، والنوع الفرعي النورامينيداز في تفاعل تثبيط نشاط الإنزيم؛ 3) الطريقة المصلية - اكتشاف زيادة في عيار (4 مرات) أجسام مضادة محددة في مصل دم المريض باستخدام RSK، RTGA، RN في زراعة الخلايا، تفاعل الترسيب في الجل، ELISA؛ 4) الطريقة البيولوجية - عدوى الفئران داخل الأنف - حقن مادة في الرئتين تحت التخدير الأثيري؛ تموت الفئران بعد 2-3 أيام نتيجة الإصابة بالالتهاب الرئوي؛ 5) التشخيص السريع - الكشف عن المستضد الفيروسي باستخدام RIF.

العلاج والوقاية.

للوقاية والعلاج في الأيام الأولى من المرض، يتم استخدام إنترفيرون الكريات البيض البشرية (عن طريق الأنف). في الأغراض الطبيةيستخدم الأدوية المضادة للفيروسات- الريمانتادين (الأنفلونزا من النوع أ)، الأدابرومين، فيرازول والأدوية المعدلة للمناعة - ديبازول، بروديجيوزان، ليفاميسول.

في بالطبع شديدبالنسبة للأنفلونزا، وخاصة عند الأطفال، يتم استخدام الغلوبولين المناعي المضاد للأنفلونزا من المانحين، وكذلك الأدوية التي مثبطات البروتياز الخلوي (حمض جوردوكس، كونتريكال، أمينوكابرويك).

الوقاية الخاصة. يتم استخدام الأدوية المضادة للفيروسات والمعدلات المناعية التالية، بالإضافة إلى اللقاحات - الحية والمعطلة: 1) اللقاحات الأحادية الحية للاستخدام عن طريق الفم - السلالات الموهنة من الفيروسات المنتشرة حاليًا (A1 وA3 وB)؛ يحمل أعظم المناعة. 2) لقاحات الفيروس الكامل من السلالات الفتاكة المعطلة بواسطة الفورمالديهايد أو الأشعة فوق البنفسجية؛ 3) لقاحات الأنفلونزا الوحيدة من المستضدات السطحية فقط - مستضدات HA و NA (لديها الحد الأدنى من التفاعل).

للحصول على اللقاحات، تتم زراعة الفيروسات في أجنة الدجاج وفي مزارع خلايا جنين الدجاج.

عندما يتم إعطاء اللقاحات، المحلية و الحصانة الخلطية. يتم التطعيم خلال الفترات التي يكون فيها خطر الأوبئة أكبر. يشار في الغالب إلى الشباب وكبار السن. يتطلب استخدام اللقاحات الميتة إعادة التطعيم سنويًا؛ فعاليتها لا تتجاوز 60 - 70٪.

لأن غالبا ما يتم ملاحظة الاختلافات المستضدية للعامل الممرض، ثم لا يمكن تحديد مجموعة المستضدات للفيروس المقابل للتحصين إلا بعد بدء تفشي المرض.

التذكرة 15.

تفاعل التراص الدموي (HRA).

في المختبر، يتم استخدام تفاعلين من تفاعلات التراص الدموي مع آليات عمل مختلفة.

أول RGA هو مصلي. في هذا التفاعل، يتم تراص خلايا الدم الحمراء عند التفاعل مع الأجسام المضادة المناسبة (الهيماجلوتينين).

يستخدم التفاعل على نطاق واسع لتحديد فصائل الدم.

RGA الثاني ليس مصليا. في ذلك، لا يحدث التصاق خلايا الدم الحمراء

الأجسام المضادة، ولكن المواد الخاصة التي تشكلها الفيروسات. على سبيل المثال، يقوم فيروس الأنفلونزا بتجميع خلايا الدم الحمراء في الدجاج و خنازير غينيا- فيروس شلل الأطفال - خلايا الدم الحمراء في الأغنام. هذا التفاعل يجعل من الممكن الحكم على وجود فيروس معين في المادة قيد الدراسة.

يتم التفاعل في أنابيب اختبار أو على ألواح خاصة ذات آبار.

يتم تخفيف المادة التي تم اختبارها لوجود الفيروس بمحلول متساوي التوتر من 1:10 إلى 1:1280؛ يتم خلط 0.5 مل من كل تخفيف مع كمية متساوية من 1-2% من معلق خلايا الدم الحمراء. في السيطرة، يتم خلط 0.5 مل من كريات الدم الحمراء مع 0.5 مل من محلول متساوي التوتر. توضع أنابيب الاختبار في منظم الحرارة لمدة 30 دقيقة، وتترك الألواح في درجة حرارة الغرفة لمدة 45 دقيقة.

المحاسبة عن النتائج.إذا كان رد الفعل إيجابيًا، تظهر رواسب من خلايا الدم الحمراء ذات حواف صدفية ("مظلة") في قاع أنبوب الاختبار أو البئر، وتغطي قاع البئر بالكامل.

رد فعل تثبيط التراص الدموي

إذا كانت النتيجة سلبية، فإن خلايا الدم الحمراء تشكل رواسب كثيفة ذات حواف ناعمة ("الزر"). يجب أن تكون نفس الرواسب في السيطرة.

يتم التعبير عن شدة التفاعل بعلامة "+". عيار الفيروس هو الحد الأقصى لتخفيف المادة التي يحدث فيها التراص.

رد فعل تثبيط التراص الدموي

هذا هو رد فعل مصلي تقوم فيه أجسام مضادة محددة مضادة للفيروسات، تتفاعل مع الفيروس (المستضد)، بتحييده وحرمانه من القدرة على تراص خلايا الدم الحمراء، أي.

هـ - تمنع تفاعل التراص الدموي. يتيح لك هذا التفاعل تحديد نوع ونوع الفيروسات.

إعداد رد الفعل.يتم خلط 0.25 مل من المصل المضاد للفيروسات مع كمية متساوية من المادة التي تحتوي على الفيروس. يرج الخليط ويوضع في منظم الحرارة لمدة 30 دقيقة، وبعد ذلك يضاف 0.5 مل من معلق خلايا الدم الحمراء 1-2%.

المحاسبة عن النتائج.في تحديد المواقع الصحيحخبرة في مراقبة المصل وكريات الدم الحمراء، يجب أن يتشكل "زر" - لا يوجد عامل تراص كريات الدم الحمراء؛ في السيطرة على المستضد، يتم تشكيل "مظلة" - تسبب الفيروس في تراص خلايا الدم الحمراء.

إذا كان المصل متماثلًا للفيروس قيد الدراسة، فسيتم تشكيل "زر" - حيث يقوم المصل بتحييد الفيروس.

رد فعل التراص الدموي غير المباشر

يعتمد تفاعل التراص الدموي غير المباشر (السلبي) (RIHA) على حقيقة أن خلايا الدم الحمراء، إذا تم امتصاص مستضد قابل للذوبان على سطحها، تكتسب القدرة على التراص عند التفاعل مع الأجسام المضادة للمستضد الممتز.

إعداد رد الفعل.

يتم تسخين المصل لمدة 30 دقيقة عند 56 درجة مئوية، ويتم تخفيفه بالتتابع بنسبة 1:10 - 1:1280 ويصب في 0.25 مل في أنابيب الاختبار أو الآبار، حيث يتم بعد ذلك وضع قطرتين من خلايا الدم الحمراء مع المستضدات الممتزة عليها. وأضاف.

ضوابط:تعليق كريات الدم الحمراء مع المستضدات الممتزة عليها بمصل مناعي واضح، تعليق كريات الدم الحمراء مع المستضدات الممتزة عليها بالمصل الطبيعي؛ تعليق خلايا الدم الحمراء الطبيعية مع مصل الاختبار.

في التحكم الأول، يجب أن يحدث التراص، في الثانية والثالثة لا ينبغي أن يحدث.

أسئلة التحكم.

1. ما الذي تشير إليه نتيجة تحليل الأشعة السينية الإيجابية بين خلايا الدم الحمراء والمادة التي يتم فحصها لوجود الفيروس؟

2. هل سيحدث تفاعل تراص لخلايا الدم الحمراء إذا أضيف إليها الفيروس والمصل المقابل له؟

ما اسم التفاعل الذي يكشف هذه الظاهرة؟

العمل العملي رقم 12.

رد فعل التثبيت المكمل.

يعتمد تفاعل تثبيت المتمم (FFR) على حقيقة أن مركب جسم مضاد محدد يمتص دائمًا (يربط) المكمل لنفسه.

يستخدم هذا التفاعل على نطاق واسع في تحديد المستضدات والتشخيص المصلي للعدوى، وخاصة الأمراض التي تسببها اللولبيات (تفاعل فاسرمان)، والريكتسيا والفيروسات.

RKS هو تفاعل مصلي معقد.

أنها تنطوي على نظامين مكملين وجسم مضاد للمستضد. في الأساس، هذين هما التفاعلان المصليان.

يتكون النظام الرئيسي الصحيح من مستضد وجسم مضاد (أحدهما معروف والآخر غير معروف). يتم إضافة كمية معينة من المكملات إليه. إذا تطابق المستضد والجسم المضاد لهذا النظام، فسوف يتصلان ويربطان مجاملة. المجمع الناتج مشتت بدقة وغير مرئي.

تم الكشف عن تكوين هذا المجمع باستخدام نظام انحلالي أو نظام مؤشر ثانٍ.

ويشمل خلايا الدم الحمراء للأغنام (المستضد) والمصل الانحلالي المقابل (الجسم المضاد)، أي. مجمع المناعي الجاهز. في هذا النظام، لا يمكن أن يحدث تحلل خلايا الدم الحمراء إلا في وجود المكمل. إذا كان المكمل مرتبطًا بالنظام الأول، فلن يكون هناك انحلال للدم في النظام الثاني، لأن

لا يوجد تكملة مجانية. يتم تسجيل غياب انحلال الدم (محتويات الأنبوب غائمة أو وجود رواسب من كريات الدم الحمراء في الأسفل) كنتيجة RSC إيجابية.

إذا كان المستضد في النظام الأول لا يتوافق مع الجسم المضاد، فلن يتشكل المركب المناعي وسيظل المكمل حرًا. تبقى المجاملة حرة، وتشارك في النظام الثاني، مما يسبب انحلال الدم، وتكون نتيجة RSC سلبية (محتويات الأنابيب شفافة - "الدم المطلي").

مكونات تفاعلات التثبيت المكملة:

مستضد - عادة المحللة، استخراج، ناشب،

في كثير من الأحيان تعليق الكائنات الحية الدقيقة.

2. الأجسام المضادة - مصل المريض.

3. المكمل - مصل خنزير غينيا.

المستضد - خلايا الدم الحمراء للأغنام.

5. الأجسام المضادة - الهيموليزين إلى كريات الدم الحمراء في الأغنام.

6. محلول متساوي التوتر.

بسبب حقيقة أن RSK تشارك عدد كبير منمكونات معقدة،

يجب أولاً معايرتها وإدخالها في التفاعل بكميات محددة وبأحجام متساوية: 0.5 أو 0.25، وفي كثير من الأحيان 0.2 أو 1.25 أو 1.0 مل (الأحجام الأكبر تعطي نتيجة أكثر دقة). يتم إجراء معايرة مكونات التفاعل بنفس حجم التجربة، مع استبدال المكونات المفقودة بمحلول متساوي التوتر.

معلومات ذات صله:

البحث في الموقع:

يعتمد ذلك على حقيقة أن خلايا الدم الحمراء، التي تم امتصاص المستضدات عليها سابقًا، تكتسب القدرة على التراص في وجود الأمصال المتماثلة (الأجسام المضادة).

في هذه الحالة، تعمل خلايا الدم الحمراء كحاملات بمحددات محددة، والتي يحدث تراصها نتيجة تفاعل المستضد + الجسم المضاد.

تسمى خلايا الدم الحمراء التي ترتبط المستضدات بقوة بسطحها بتشخيص مستضد كريات الدم الحمراء، أو كريات الدم الحمراء الحساسة للمستضد.

نوع آخر من RNGA - يتم امتصاص الأجسام المضادة على سطح كريات الدم الحمراء ويحدث تراصها اللاحق في وجود مستضد متماثل.

في هذه الحالة، تسمى كريات الدم الحمراء هذه تشخيص الأجسام المضادة لكريات الدم الحمراء، أو كريات الدم الحمراء المتحسسة بالأجسام المضادة.

واستنادا إلى هذين النهجين المنهجيين الأساسيين، تم تطوير واستخدام العديد من التعديلات على RNGA. وبالتالي، يتم استخدام جزيئات اللاتكس القياسية الصغيرة كحاملات.

تفاعل تثبيط التراص الدموي (HAI)

في هذه الحالة، يسمى التفاعل تفاعل تراص اللاتكس (RLA) أو يتم استخدامه المكورات العنقودية الذهبية- تفاعل التراص، وما إلى ذلك. عادة، يتم إعداد تشخيصات كريات الدم الحمراء في مؤسسات الصناعة البيولوجية، ويتم تنفيذ الخبرة الرئيسية لـ RNGA في مختبرات التشخيص.

يتضمن إعداد تشخيص كريات الدم الحمراء الخطوات التالية:

• تثبيت خلايا الدم الحمراء بالفورمالدهيد أو الألدهيدات الجلوتاريكية أو الأكريليكية.

  يتم تخزين خلايا الدم الحمراء المعالجة هذه لفترة طويلة. في كثير من الأحيان، يتم استخدام كريات الدم الحمراء من الأغنام والبشر والدجاج وما إلى ذلك لهذا الغرض؛

• علاج كريات الدم الحمراء الثابتة بمحلول التانين. ونتيجة لذلك، تكتسب خلايا الدم الحمراء القدرة على امتصاص البروتينات (الفيروسات والأجسام المضادة) الموجودة على سطحها بشكل لا رجعة فيه؛
• تحسس كريات الدم الحمراء التانيزية بواسطة الفيروسات أو الأجسام المضادة.

تجدر الإشارة إلى أن طرق إعداد تشخيصات كريات الدم الحمراء للعدوى الفيروسية مختلفة.

الإجراء الخاص بإجراء RNGA للكشف عن عيار الجسم المضاد وتحديده هو كما يلي:

• تضاف جرعات متساوية من كريات الدم الحمراء المتحسسة بالمستضد إلى التخفيفات المتتالية من المصل؛
• يُترك الخليط لمدة 2-3 ساعات عند درجة حرارة الغرفة أو لمدة 16-18 ساعة عند 4 درجات مئوية؛
• تأخذ في الاعتبار النتائج.

  إذا كان المصل يحتوي على أجسام مضادة للفيروس الذي تم تحسس خلايا الدم الحمراء به، يتم ملاحظة التراص الدموي، والذي يتم تقييمه بالتهجين.

يعتبر عيار الجسم المضاد الموجود في المصل هو أعلى تخفيف في المصل والذي لا يزال يوفر التراص الدموي بواسطة تهجينين على الأقل.

ويرافق RNGA جميع الضوابط ذات الصلة. عادةً ما يتم التفاعل باستخدام الطريقة الدقيقة.

يتيح لك RNGA حل المشكلات التشخيصية التالية:

• الكشف عن الأجسام المضادة وتحديد عيارها في مصل الدم باستخدام تشخيص مستضد كريات الدم الحمراء المعروف؛
• اكتشاف وتحديد فيروس غير معروف باستخدام تشخيص الأجسام المضادة المعروفة لكرات الدم الحمراء.

مزايا RNGA: الحساسية العالية، وبساطة تقنية التنسيب، وسرعة الاستجابة.

ومع ذلك، من المهم ملاحظة أنه تنشأ صعوبات كبيرة في إعداد تشخيصات خلايا الدم الحمراء المستقرة ( اعتماد كبيرعلى نقاء المكونات المستخدمة، والحاجة إلى اختيار طريقة التثبيت، تانيزيشن وتوعية كريات الدم الحمراء لكل نوع من الفيروسات).

إذا وجدت خطأ، فيرجى تحديد جزء من النص والضغط على Ctrl+Enter.

في تواصل مع

زملاء الصف

ويستخدم خلايا الدم الحمراء أو المواد الاصطناعية المحايدة (على سبيل المثال، جزيئات اللاتكس)، والتي يتم امتصاص المستضدات (البكتيرية والفيروسية والأنسجة) أو الأجسام المضادة على سطحها.

ويحدث تراصها عند إضافة الأمصال أو المستضدات المناسبة. تسمى خلايا الدم الحمراء المتحسسة بالمستضدات كريات الدم الحمراء المستضدية التشخيصية وتستخدم للكشف عن الأجسام المضادة ومعايرتها. كريات الدم الحمراء المتحسسة بالأجسام المضادة. تسمى تشخيصات الغلوبولين المناعي لكريات الدم الحمراء وتستخدم للكشف عن المستضدات.

رد فعل التراص الدموي السلبييستخدم لتشخيص الأمراض التي تسببها البكتيريا ( حمى التيفودوالحمى نظيرة التيفية، والدوسنتاريا، وداء البروسيلات، والطاعون، والكوليرا، وما إلى ذلك)، والأوالي (الملاريا)، والفيروسات (الأنفلونزا، الالتهابات الفيروسية الغدانية، التهاب الكبد الفيروسي ب، الحصبة، التهاب الدماغ الذي ينقله القراد، القرم الحمى النزفيةالخ)، وكذلك لتحديد بعض الهرمونات، وتحديدها فرط الحساسيةإعطاء المريض الأدوية والهرمونات، مثل البنسلين والأنسولين.

تفاعل التراص الدموي السلبي (RPHA).

يعد اختبار التراص الدموي السلبي طريقة حساسة للتشخيص المصلي ويستخدم للتشخيص المبكر والتشخيص بأثر رجعي، وكذلك لتحديد الحالة المناعية للأشخاص الذين تم تطعيمهم. في المرضى الذين يعانون من مرض التولاريميا، يتم اكتشاف الأجسام المضادة عادة في نهاية الأسبوع الأول أو الثاني من المرض؛ وبعد 1-1.5 شهر، يصل عيار RPHA إلى الحد الأقصى (1: 100000-1: 20000، وأقل في كثير من الأحيان أعلى)، وبعد ذلك يتم اكتشافهم يتم تخزين الانخفاض إلى المستوى 1:100-1:200 لفترة طويلة.

في الأشخاص الملقحين، يتم أيضًا اكتشاف الأجسام المضادة باستمرار، ولكن بعيارات أقل، لا تتجاوز 1:2000-1:5000 بعد 1-1.5 شهرًا من التطعيم، وتبقى لعدة سنوات عند مستوى منخفض يبلغ 1:20-1:80.

المستضد لتحديد مرحلة RPHA هو مرض التولاريميا في كريات الدم الحمراء التشخيصية (مستضدي).

الدواء عبارة عن خلايا دم حمراء للأغنام تم إضفاء الطابع الرسمي عليها، حساسة بمستضد التولاريميا، وهي متوفرة في شكل سائل وجاف. تحضير سائل - تعليق 10٪ من خلايا الدم الحمراء في محلول الفورمالديهايد بتركيز 10٪. المستحضر المجفف بالتجميد الجاف عبارة عن معلق مجفف بالفراغ بنسبة 10٪ من خلايا الدم الحمراء بدون مواد حافظة. قبل الاستخدام، يتم تخفيفه وفقًا للتعليمات الموجودة على الملصق. لتنفيذ التفاعل في ألواح البوليسترين، يتم استخدام كلا العقارين بتركيز 2.5٪، وعند إجراء التفاعل بأحجام صغيرة - بتركيز 0.5٪.

تقنية لإعداد RPGA.

يتم تخفيف أمصال الاختبار محلول ملحي 1:5 (1:10) ويسخن عند 56 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة.

تفاعل التراص الدموي (HRA) و

بعد ذلك، ومن أجل إزالة الأجسام المضادة غير المتجانسة من كريات الدم الحمراء في الأغنام، تتم معالجة الأمصال بتعليق 50٪ من كريات الدم الحمراء في الأغنام. للقيام بذلك، أضف خلايا الدم الحمراء بمعدل قطرتين (0.05 مل) لكل 1 مل من المصل واخلطهما جيدًا عن طريق الرج.

يُترك المصل حتى تستقر كريات الدم الحمراء تماماً، أو يتم طرده بعد ساعة في درجة حرارة الغرفة، وبعد ذلك يصبح جاهزاً للفحص.

يُسكب سائل التخفيف بحجم 0.5 مل في صف من الثقوب الموجودة على لوح البوليسترين.

في دراسة أوليةفمن المستحسن لاختبار الأمصال عن طريق إعداد رد الفعل في صف قصير من اللوحة (6 آبار). إذا تم الكشف عن الأجسام المضادة في سلسلة قصيرة، يتم إعادة اختبار الأمصال في سلسلة طويلة من التخفيفات (12 بئر).

بعد سكب سائل التخفيف، أضف 0.5 مل من أمصال الاختبار في تخفيف 1:5 إلى البئر الأول من كل صف (قصير أو طويل). ثم تتم معايرة نفس الكميات من المصل بتخفيفات مضاعفة. وبالتالي، يتم الحصول على تخفيفات المصل في السلسلة القصيرة من 1:10 إلى 1:320، وفي السلسلة الطويلة من 1:10 إلى 1:20480. بعد معايرة الأمصال، تضاف قطرة واحدة (0.05 مل) من المعلق العامل 2.5% من كريات الدم الحمراء الحساسة إلى كل بئر.

يتم رج محتويات الصفائح جيدًا حتى يتم الحصول على تعليق متجانس. تُترك الأطباق في درجة حرارة الغرفة على سطح طاولة ثابت. يتم إجراء التسجيل الأولي للتفاعل بعد 2-3 ساعات، ويتم التحديد النهائي للعيار بعد الترسيب الكامل لخلايا الدم الحمراء في الآبار. يتم توفير الضوابط التالية للتفاعل: 1) مصل الاختبار المخفف بنسبة 1:10 في حجم 0.5 مل + 1 قطرة من معلق 2.5٪ من كريات الدم الحمراء غير الحساسة؛ 2) سائل مخفف بحجم 0.5 مل + قطرة واحدة من معلق 2.5٪ من كريات الدم الحمراء غير الحساسة. 3) سائل مخفف بحجم 0.5 مل + قطرة واحدة من معلق 2.5٪ من كريات الدم الحمراء الحساسة.

يجب أن تعطي جميع الضوابط رد فعل سلبي واضح.

المحاسبة وتقييم RPGA. يتم تقييم التفاعل وفقًا للمخطط التالي:

1) بحدة رد فعل إيجابي(++++) - تسقط خلايا الدم الحمراء في قاع الحفرة في طبقة متساوية على شكل "مظلة"، والتي غالبًا ما يكون ذوبان حوافها صدفيًا؛

2) رد فعل إيجابي (+++) - تغطي خلايا الدم الحمراء ما لا يقل عن ثلثي قاع البئر؛

3) رد فعل إيجابي ضعيف (++) - المادة المتراصة صغيرة وتقع في وسط البئر؛

4) رد فعل مشكوك فيه (+) - حول رواسب كريات الدم الحمراء في وسط البئر توجد حبيبات متراصة فردية؛

5) سالب (-) - في قاع الحفرة تستقر خلايا الدم الحمراء على شكل "زر" أو حلقة صغيرة ذات حواف ناعمة ومحددة بشكل حاد.

يتم أخذ عيار المصل في الاعتبار بناءً على التخفيف الأخير للمصل، والذي أعطى تفاعلًا واضحًا جدًا (ثلاث إيجابيات على الأقل).

يعتبر التخفيف بنسبة 1:100 أو أعلى عيارًا تشخيصيًا، ومع ذلك، كما هو الحال في حالة التهاب المفاصل الروماتويدي، من الضروري مراقبة زيادته.

يعد اختبار RPHA لمرض التولاريميا محددًا تمامًا ويكتشف بعض التفاعلات المتصالبة فقط مع أمصال داء البروسيلات. تشخيص متباينممكن من خلال ارتفاع التتر في RPGA، والتي تكون أعلى بكثير مع المستضد المتماثل.

تقنية لإعداد RPHA في الأحجام الصغيرة.

يمكن إجراء RPGA بأحجام صغيرة باستخدام جهاز معايرة ميكروية من نوع Takachi (أو ألواح ميكروية مستديرة القاع مزودة بماصات دقيقة)، مما يسمح بمعايرة المواد بأحجام 25 ميكرولتر و50 ميكرولتر. تقنية التفاعل وتسلسل جميع العمليات هي نفسها عند الدراسة في ألواح البوليسترين. ومع ذلك، ينبغي أن يؤخذ في الاعتبار أن حساسية الطريقة الدقيقة عادة ما تكون تخفيفًا واحدًا (أي.

2 مرات) أقل من الطريقة الكلية.

لإعداد التفاعل في جهاز المعايرة الدقيقة، تتم إضافة سائل تخفيف بحجم 50 ميكرولتر إلى كل بئر باستخدام قطارة ماصة. بعد ذلك، باستخدام أجهزة المعايرة ذات رأس سعة 50 ميكرولتر، يتم جمع مصل الاختبار عن طريق غمر الرأس فيه.

تأكد من أن السائل قد ملأ رأس جهاز المعايرة. يتم نقل جهاز المعايرة بالمصل إلى البئر الأول ويتم الاحتفاظ به الوضع الرأسي، قم بعدة حركات دورانية في كلا الاتجاهين. ثم يتم نقل جهاز المعايرة إلى البئر التالي ويتم تكرار عملية المعالجة. يمكن إجراء المعايرة في وقت واحد في عدة صفوف. بعد معايرة السلسلة بأكملها، يتم غسل جهاز المعايرة بالماء المقطر (تغيير جزأين) عن طريق حركات دوارة، ويتم إزالة الماء من الرأس باستخدام مسحة وحرقه على لهب الموقد.

بعد المعايرة، أضف 25 ميكرولتر من سائل تشخيص كرات الدم الحمراء إلى الآبار.

يجب أن يكون تركيز التشخيص لـ RPHA في الأحجام الدقيقة 0.5% (أي أنه يتم تخفيف تعليق خلايا الدم الحمراء بنسبة 2.5% 5 مرات أيضًا). بعد إضافة خلايا الدم الحمراء، يجب أن تهتز الصفائح قليلاً حتى يتم الحصول على تعليق متجانس. يمكن تسجيل النتائج خلال 1-1.5 ساعة، وهي ميزة كبيرة لـ RPGA في العيار الميكروي.

بالإضافة إلى ذلك، تتطلب هذه التقنية كميات صغيرة من جميع مكونات التفاعل وأمصال الاختبار.

ويؤخذ رد الفعل في الاعتبار وفقا للمخطط التالي:

1) "+" - التراص الدموي الكامل، حيث تسقط خلايا الدم الحمراء في قاع البئر في طبقة متساوية على شكل "مظلة"، تحتل ما لا يقل عن ثلثي القاع؛

2) "+-" - التراص الجزئي، حيث تتساقط خلايا الدم الحمراء إلى الأسفل على شكل حلقة فضفاضة صغيرة الحجم؛

3) “-” – غياب التراص الدموي، حيث تتساقط خلايا الدم الحمراء إلى الأسفل على شكل زر صغير أو حلقة ذات حافة ناعمة.

يمكن اختبار خصوصية النتيجة الإيجابية التي تم الحصول عليها في RPHA باستخدام تفاعل ثلاثي المكونات - تفاعل تثبيط التراص الدموي السلبي (PHA).

تقنية لإعداد RTPGA.

يُستخدم رد الفعل هذا لتأكيد خصوصية نتيجة RPGA الإيجابية عندما تكون موضع شك أو ذات أهمية وبائية خاصة. آلية التفاعل هي التثبيط النوعي للتراص الدموي عند إضافة معلق من بكتيريا التولاريميا المقتولة إلى مصل الاختبار. تتفاعل ثلاثة مكونات في التفاعل: مصل الاختبار، مستضد التولاريميا النوعي ومستضد كريات الدم الحمراء التشخيصية RTPHA يتم وضعها عادة في صف من 7-8 آبار.

يُنصح بتثبيت RPGA متكرر بالتوازي مع RTPGA. يسكب 0.25 مل من سائل التخفيف في صفين من الثقوب، ثم يضاف مصل الاختبار بحجم 0.25 مل إلى الثقوب الأولى لكلا الصفين ويتم إجراء المعايرة، ويتم الحصول على صفين متماثلين من تخفيفات المصل. أضف 0.25 مل من سائل التخفيف إلى جميع آبار الصف الثاني، و 0.25 مل من معلق بكتيريا التولاريميا إلى آبار الصف الأول.

يتم استخدام تشخيص التولاريميا (يحتوي على 25 مليار بكتيريا تولاريميا في 1 مل)، وقد تم تخفيفه مسبقًا 50 مرة.

يحتوي هذا المعلق على 500 مليون بكتيريا في 1 مل أو 125 مليون في حجم 0.25 مل. بعد إضافة المستضد، تُترك اللوحة لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة، وبعد ذلك تُضاف قطرة واحدة (0.05 مل) من تشخيص كريات الدم الحمراء إلى جميع الآبار في كلا الصفين، وتُرج اللوحة وتُترك على سطح طاولة مستو.

تتم المحاسبة بعد 2-3 ساعات.

المحاسبة وتقييم RTPGA. إذا كان مصل الاختبار يحتوي على أجسام مضادة محددة للتولاريميا، فسيتم تحييدها بواسطة المستضد المضاف ولن يحدث التراص الدموي في الصف الأول من الآبار، أو، مع ارتفاع عيار المصل، سيتم ملاحظة التراص الدموي في عدد أصغر (2-4) من الآبار مما كانت عليه في الصف مع RPHA. وفي هذه الحالة، تم تأكيد خصوصية النتائج.

إذا لوحظ التراص الدموي في كلا الصفين، أي. إذا تطابقت نتائج RTPGA وRPGA، فهذا يشير إلى عدم وجود أجسام مضادة لمرض التوليميا في مصل الاختبار. في هذه الحالة، تعتبر النتيجة الأولية لـ RPGA غير محددة.

تقنية تنظيم RTHG في الأحجام الصغيرة. يمكن إجراء RTPGA، مثل RPGA، بأحجام صغيرة باستخدام عيار صغير من نوع Takachi.

للقيام بذلك، أضف 0.25 ميكرولتر من السائل المخفف إلى آبار الصفائح الدقيقة في صفين من 7-8 آبار لكل منهما. ثم، باستخدام جهاز المعايرة، تتم إضافة 0.25 ميكرولتر من مصل الاختبار ومعايرته في كلا الصفين. بعد ذلك، يضاف 25 ميكرولتر من مستضد التولاريميا (تركيزه 500 مليون بكتيريا تولاريميا في 1 مل) إلى كل بئر في الصف الأول، ويضاف 25 ميكرولتر من سائل التخفيف إلى الصف الثاني.

يتم ترك اللوحات لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة، وبعد ذلك يتم إضافة 25 ميكرولتر من تشخيص الزريتروسيتيك المستضدي (تركيز 0.5٪) إلى جميع الآبار في كلا الصفين.

يتم تنفيذ المحاسبة وتقييم النتائج بشكل مشابه لردود الفعل في الأحجام الكبيرة.

تاريخ النشر:2015-02-03; إقرأ: 3176 | انتهاك حقوق الطبع والنشر للصفحة

Studopedia.org - Studopedia.Org - 2014-2018 (0.003 ثانية)…

هناك العديد من الأساليب النوعية و تحديد الكمياتالأجسام المضادة الخاصة بالفيروسات. باستخدام هذه الطرق، يمكنك اكتشاف كل من IgM وIgG في وقت واحد، والجلوبيولين المناعي بشكل منفصل لكل فئة. كقاعدة عامة، يتم اكتشاف IgG الخاص بالفيروس فقط في تفاعل التثبيت التكميلي. ومع ذلك، عند اختبار المستضدات الميكروبيولوجية بهذه الطريقة، فمن الممكن تحديد IgM وIgG محددين في نفس الوقت.

تُستخدم الطرق المناعية بشكل أساسي لغرضين: أولاً، تشخيص عدوى فيروسية حالية أو مكتملة أو خلقية، وثانيًا، الكشف عن أجسام مضادة محددة، يشير وجودها إلى عدوى سابقة، وبالتالي، المناعة ضد احتمال الإصابة. إعادة العدوى. يختلف الناس بشكل كبير في قوة استجابتهم المناعية للعدوى الفيروسية. في التين. ويبين الشكل 3 منحنى ارتفاع عيار نموذجي

الأجسام المضادة استجابة لعدوى الحصبة الألمانية الأولية. من السهل ملاحظة أن تشخيص الحصبة الألمانية ممكن عن طريق زيادة عيار IgG المحدد وتحديد IgM محدد. يشير وجود IgM محدد في دم الوليد إلى وجود عدوى داخل الرحم، حيث أن IgM الأمومي، على عكس IgG، يتم الاحتفاظ به بواسطة المشيمة. IgG النوعي الذي يتم إنتاجه نتيجة للعدوى الأولية عادة ما يستمر طوال الحياة. ولذلك فإن وجود الأجسام المضادة لهذه الفئة في مصل الدم يشير إلى مناعة ضد الإصابة المتكررة المقابلة.

فيما يلي الطرق المناعية للكشف عن أجسام مضادة محددة لفيروس الحصبة الألمانية، والتي تكون فعالة بشكل خاص في تشخيص مرض الجنين وتحديد عيار أجسام مضادة محددة في مصل الدم. الأوصاف التفصيليةيمكن العثور على الطرق المستخدمة لتشخيص الحصبة الألمانية في المراجعات التي أجراها باتيسون ومورجان كابنر.

رد فعل تثبيط التراص الدموي

يسبب فيروس الحصبة الألمانية تراصًا دمويًا لخلايا الدم الحمراء في العديد من الأنواع الحيوانية. في أغلب الأحيان، يتم استخدام كريات الدم الحمراء من الكتاكيت عمرها يوم واحد في RTGA. المستضد المتراص لفيروس الحصبة الألمانية في هذا التفاعل هو الفيروس الذي تمت زراعته في المزرعة ومعالجته باستخدام توين 80 والإيثر. المعالجة الأوليةيزيد من عيار GA للفيروس.

5.1.1 توحيد مستضد فيروس الحصبة الألمانية HA

1. يتم غسل 1 مل من معلق 50٪ من كريات الدم الحمراء في الدجاج ثلاث مرات في محلول فيروسي مع ديكستران وجيلاتين عن طريق الطرد المركزي وإعادة تعليق الرواسب في أنبوب طرد مركزي متدرج سعة 15 مل. يتم إعادة تعليق الخلايا المغسولة في المخزن المؤقت DGV للحصول على تعليق بنسبة 30٪.

الجدول 3. إعداد العازلة فيروسي مع ديكستران والجيلاتين

2. قم بتخفيف المستحضر المجفف بالتجميد من مستضد GA لفيروس الحصبة الألمانية في حجم الماء المقطر المطلوب وفقًا للتعليمات.

3. أضف حجمًا واحدًا من DGV إلى كل بئر من الآبار الثمانية لصفين متجاورين من لوحة ميكروتيتر من البوليسترين ذات 96 بئرًا مع آبار على شكل حرف U.

4. تتم إضافة حجم واحد من مستضد GA لفيروس الحصبة الألمانية إلى الآبار الأولى من صفين.

5. قم بإعداد التخفيفات التسلسلية ذات الشقين لمستضد فيروس الحصبة الألمانية GA، والتي تتراوح من 1:2 إلى 1:256، باستخدام ميكروتيتر 0.025 مل. قبل الاستخدام، يجب تسخين رأس جهاز المعايرة الدقيقة في لهب حتى يصبح أحمر اللون، ثم تبريده لبضع ثوان، ووضعه في ماء مقطر، ثم مسحه بورق الترشيح.

6. أضف حجمًا إضافيًا واحدًا من المخزن المؤقت DGV إلى كل من الآبار المملوءة. كعنصر تحكم، تتم إضافة مجلدين من المخزن المؤقت DGV إلى الآبار 12 من الصفين الأولين.

7. يتم تخفيف معلق كريات الدم الحمراء للدجاج المغسول 100 مرة باستخدام محلول DGV، وبالتالي الحصول على معلق بنسبة 0.03%.

أضف مجلدين من تعليق خلايا الدم الحمراء بنسبة 0.03% إلى جميع الآبار الـ 18، وقم بتغطية اللوحة النهائية بلوحة أخرى غير مستخدمة واحتضانها لمدة ساعة عند 4 درجات مئوية.

9. تتشكل "لوحة" كثيفة من كريات الدم الحمراء غير الملتصقة في الجزء السفلي من آبار التحكم. تستقر خلايا الدم الحمراء الملتصقة بالتساوي. يعتبر عيار GA هو المعاملة بالمثل لأعلى تخفيف لمستضد GA لفيروس الحصبة الألمانية، حيث يحدث التراص الكامل. يحتوي هذا التخفيف على وحدة واحدة من التراص الدموي.

لاختبار الأمصال، يتم استخدام 4 وحدات GA من مستضد فيروس الحصبة الألمانية. وبالتالي، إذا كان عيار المستضد GA هو 32، فمن أجل الكشف عن الأجسام المضادة لفيروس الحصبة الألمانية، يتم تخفيفه باستخدام DGV ثماني مرات. المستضد المخفف مستقر لمدة 25-48 ساعة عند 4 درجات مئوية.

5.1.2 المعالجة المسبقة لمصل اللبن

تحتوي جميع الأمصال على مثبطات التراص الدموي غير النوعية التي يجب إزالتها. مثبطات GA غير المحددة هي في الأساس بروتينات دهنية، والتي يتم إطلاقها عن طريق معالجة مصل اللبن بالكاولين. بالإضافة إلى ذلك، قد توجد راصات غير محددة من كريات الدم الحمراء في الدجاج في الأمصال البشرية. ومع ذلك، فإن الامتزاز الأولي لأمصال الاختبار بواسطة كريات الدم الحمراء ليس ضروريًا، حيث يتم اكتشاف جميع الراصة الدموية غير المحددة الموجودة في الأمصال في عناصر التحكم.

1. أضف 0.2 مل من المصل في أنابيب زجاجية مرقمة. بالإضافة إلى أمصال الاختبار، هناك حاجة إلى ضوابط إيجابية وسلبية في كل تجربة.

2. أضف 0.8 مل من 25% كاولين في محلول ملحي بورات إلى كل أنبوب اختبار.

3. ترج محتويات أنابيب الاختبار وتترك في درجة حرارة الغرفة لمدة 20 دقيقة.

4. يتم ترسيب الكاولين المستهلك بواسطة الطرد المركزي في جهاز طرد مركزي منضدي بسرعة 2000 دورة في الدقيقة لمدة 20 دقيقة.

5. يتم نقل المادة الطافية إلى أنابيب مرقمة نظيفة. نتيجة للتنقية، يتم الحصول على الأمصال المخففة أربع مرات. يتم استخدامها لإجراء تفاعل تثبيط التراص الدموي. يمكن تخزين الأمصال عند 4 درجات مئوية خلال الليل.

5.1.3 تفاعل تثبيط التراص الدموي

1. لاختبار عينة مصل واحدة، قم بإضافة مجلد واحد من DGV إلى صف واحد من الآبار.

2. أضف حجمًا واحدًا من المصل المخفف أربع مرات إلى البئر الأول والأخير.

3. يتم تحضير التخفيفات التسلسلية ذات الشقين من المصل باستخدام جهاز المعايرة الدقيقة.

4. يضاف حجم واحد من مستضد الحصبة الألمانية HA الذي يحتوي على 4 HAE إلى الآبار 1-10. لم يتم إضافة مستضد الحصبة الألمانية HA إلى البئر 12.

5. تتم إضافة حجم واحد من التخفيف العامل لمستضد الحصبة الألمانية GA إلى الآبار 1-8 من لوحة أخرى، ثم يتم تحضير التخفيفات المزدوجة المتعاقبة لمستضد GA في ثمانية آبار. تمت إضافة مجلد واحد من DGV إلى هذه الآبار الستة عشر. هذه المعايرة هي اختبار لمستضد الحصبة الألمانية HA. للتحكم، تتم إضافة مجلدين من DGV إلى الآبار 12 من الصفين الأول والثاني.

6. تُترك الأطباق المغلقة لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة أو طوال الليل عند درجة حرارة 4 درجات مئوية.

7. تتم إضافة مجلدين من تعليق كريات الدم الحمراء للدجاج بنسبة 0.03% إلى جميع الآبار المملوءة وتترك اللوحات لمدة 1-1.5 ساعة عند 4 درجات مئوية.

8. بالنظر من خلال اللوحات، حدد عيار مستضد الحصبة الألمانية GA. لا ينبغي أن يحدث التراص في آبار المراقبة.

9. إذا كانت خلايا الدم الحمراء ملتصقة في المصل في غياب مستضد الحصبة الألمانية HA، فمن الضروري إعادة اختبار التخفيف الأصلي للمصل. قبل ذلك، يتم امتصاص المصل بقطرة واحدة من معلق 30% من كريات الدم الحمراء في الدجاج لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة، ثم يتم ترسيب كريات الدم الحمراء عن طريق الطرد المركزي.

10. يعتبر عيار الأجسام المضادة المحددة في مصل الاختبار هو القيمة المتبادلة للتخفيف الذي يتم عنده قمع التراص الدموي بالكامل.

5.1.4 تفسير النتائج

عند العيار المنخفض، يكون من الصعب تفسير النتائج، لأنه مع التخفيف البسيط من الممكن وجود بقايا مثبطات غير محددة. يعتبر وجود الأجسام المضادة الخاصة بالفيروس مثبتًا عندما يكون العيار 16 أو أعلى.

هذا هو رد فعل مصلي تقوم فيه أجسام مضادة محددة مضادة للفيروسات، تتفاعل مع الفيروس (المستضد)، بتحييده وحرمانه من القدرة على تراص خلايا الدم الحمراء، أي. يمنع تفاعل التراص الدموي (HRTHA)، والذي يسمح لك باستخدامه لتحديد نوع وحتى نوع الفيروسات المكتشفة خلال HRA.

رد فعل العرض. يتم خلط 0.25 مل من المصل المضاد للفيروسات في تخفيفات متتالية مضاعفة من 1:10 إلى 1:2560 مع كمية متساوية من المادة التي تحتوي على الفيروس، مخففة 4 مرات أقل من العيار المحدد في RGA. يرج الخليط ويوضع في منظم الحرارة لمدة 30 دقيقة، وبعد ذلك يضاف 0.5 مل من معلق 1-2% من خلايا الدم الحمراء.

ويرافق رد الفعل 3 الضوابط.

يتم تسجيل النتائج بعد الحضانة الثانية في منظم الحرارة لمدة 30 أو 45 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. إذا تم تنفيذ التجربة بشكل صحيح، فيجب تشكيل "زر" للتحكم في مصل الدم وكريات الدم الحمراء - لا يوجد عامل تراص كريات الدم الحمراء؛ في السيطرة على المستضد، يتم تشكيل "مظلة" - تسبب الفيروس في تراص خلايا الدم الحمراء.

في إحدى التجارب، إذا كان المصل متماثلًا للفيروس قيد الدراسة، يتم تشكيل "زر" - حيث يقوم المصل بتحييد الفيروس. عيار المصل هو الحد الأقصى للتخفيف الذي يتأخر فيه التراص الدموي.

رد فعل التراص الدموي غير المباشر

يعتمد تفاعل التراص الدموي غير المباشر (السلبي) (IRHA) على حقيقة أن خلايا الدم الحمراء، إذا تم امتصاص مستضد قابل للذوبان على سطحها، تكتسب القدرة على التراص عند التفاعل مع الأجسام المضادة للمستضد الممتز. يستخدم RNGA على نطاق واسع في تشخيص عدد من الالتهابات.

إعداد رد الفعل. يتم تسخين مصل الاختبار لمدة 30 دقيقة عند 56 درجة مئوية، ويتم تخفيفه بالتتابع بنسبة 1:10-1:1280 ويصب في أنابيب أو آبار سعة 0.25 مل، حيث يتم وضع قطرتين من كريات الدم الحمراء التشخيصية (كريات الدم الحمراء مع المستضد الممتز عليها) ثم أضاف.

الشكل 70: مخطط تفاعل التراص الدموي السلبي (RPHA).

أ - الحصول على تشخيص كريات الدم الحمراء. ب -RPGA: 1-كريات الدم الحمراء: 2- المستضد قيد الدراسة: 3-كريات الدم الحمراء التشخيصية؛ 4 - الجسم المضاد للمستضد قيد الدراسة؛ 5 - تراص.

الضوابط: تعليق تشخيص كريات الدم الحمراء مع مصل المناعة المعروف؛ تعليق التشخيص مع المصل الطبيعي. تعليق خلايا الدم الحمراء الطبيعية مع مصل الاختبار. في التحكم الأول، يجب أن يحدث التراص، في الثانية والثالثة لا ينبغي أن يحدث.

باستخدام RNGA، يمكنك تحديد مستضد غير معروف إذا تم امتصاص الأجسام المضادة المعروفة على كريات الدم الحمراء.

يمكن إجراء تفاعل التراص الدموي في حجم 0.025 مل (الطريقة الدقيقة) باستخدام جهاز المعايرة الدقيقة Takachi.

معادلة الترسيب

في تفاعل الهطول، تترسب مادة معينة مجمع المناعي، يتكون من مستضد قابل للذوبان (محلول، مستخلص، (أبتن) وجسم مضاد محدد في وجود الشوارد.

وتسمى الحلقة الغائمة أو الراسب المتكون نتيجة لهذا التفاعل بالراسب. ويختلف هذا التفاعل بشكل أساسي عن تفاعل التراص في حجم جزيئات المستضد.

عادة ما يستخدم تفاعل الترسيب لتحديد المستضد في تشخيص عدد من الالتهابات ( الجمرة الخبيثة، التهاب السحايا، وما إلى ذلك)؛ في الطب الشرعي - لتحديد أنواع الدم والحيوانات المنوية وما إلى ذلك؛ في الدراسات الصحية والنظافة - عند إثبات تزوير المنتجات؛ وبمساعدتها يتم تحديد العلاقة التطورية بين الحيوانات والنباتات. لرد الفعل تحتاج:

1. الأجسام المضادة (الرواسب) - مصل مناعي ذو عيار مرتفع من الأجسام المضادة (لا يقل عن 1: 100000). يتم تحديد عيار المصل المترسب بواسطة أعلى تخفيف للمستضد الذي يتفاعل معه.
عادة ما يتم استخدام المصل غير مخفف أو في تخفيف بنسبة 1:5-1:10.

2. المستضد - البروتين المذاب أو
طبيعة السكاريد الدهني (المستضدات الكاملة و
يحدث).

3. الحل متساوي التوتر.

الطرق الرئيسية لتنفيذ تفاعل الترسيب هي: تفاعل الترسيب الحلقي وتفاعل الترسيب في الأجار (الجيل).

انتباه! يجب أن تكون جميع المكونات المشاركة في تفاعل الهطول شفافة تمامًا.

الشكل 71: تفاعل الهطول: أ - تفاعل الهطول الحلقي؛ ب - تفاعل هطول الأمطار أوتشتيرلوني

رد فعل هطول الأمطار الدائري. باستخدام ماصة باستور، أضف 0.2 - 0.3 مل (5-6 قطرات) من المصل في أنبوب الترسيب (يجب ألا يصل المصل إلى جدران الأنبوب). يتم وضع المستضد الموجود في نفس الحجم بعناية على المصل، ثم يتم سكبه باستخدام ماصة باستور رفيعة على طول جدار أنبوب الاختبار. يتم الاحتفاظ بأنبوب الاختبار في وضع مائل. عندما يتم وضع الطبقات بشكل صحيح، يجب أن يكون هناك حدود واضحة بين المصل والمستضد. بعناية، حتى لا يختلط السائل، ضع أنبوب الاختبار في الحامل. إذا كان التفاعل إيجابيا، يتم تشكيل "حلقة" غائمة عند واجهة المستضد والجسم المضاد - راسب (انظر الشكل 48).

ويرافق رد الفعل عدد من الضوابط (الجدول 18). يعد تسلسل إضافة مكونات التفاعل إلى أنبوب الاختبار أمرًا مهمًا للغاية. لا يمكنك طبقة المصل على المستضد (في السيطرة - على محلول متساوي التوتر)، بما أن الكثافة النسبية للمصل أكبر، فسوف يغوص إلى قاع أنبوب الاختبار، ولن يتم اكتشاف الحدود بين السوائل.

مخطط لإعداد رد فعل هطول الأمطار الدائري

الجدول رقم 13

ملحوظة. + وجود "الحلقة"؛ - غياب "الخاتم".

يتم تسجيل النتائج بعد 5-30 دقيقة، وفي بعض الحالات بعد ساعة، كما هو الحال دائمًا بدءًا من أدوات التحكم. تشير "الحلقة" الموجودة في أنبوب الاختبار الثاني إلى قدرة المصل المناعي على الدخول في تفاعل محدد مع المستضد المقابل. يجب ألا تكون هناك "حلقات" في أنابيب الاختبار 3-5 - لا توجد أجسام مضادة ومستضدات تتوافق مع بعضها البعض. "الحلقة" في الأنبوب الأول - نتيجة رد فعل إيجابية - تشير إلى أن مستضد الاختبار يتوافق مع المصل المناعي المأخوذ، وغياب "الحلقة" ("الحلقة" في الأنبوب الثاني فقط) يشير إلى عدم اتساقها - رد فعل سلبي نتيجة.

رد فعل هطول الأمطار في أجار (جل). تكمن خصوصية التفاعل في حدوث تفاعل بين المستضد والجسم المضاد بيئة كثيفة، أي في هلام. يعطي الراسب الناتج خطًا عكرًا في سمك الوسط. يشير عدم وجود شريط إلى وجود تناقض بين مكونات التفاعل. يستخدم هذا التفاعل على نطاق واسع في أبحاث الطب الحيوي، وخاصة في دراسة تكوين السم في العامل المسبب للدفتيريا.

دراسة طبيعة تفاعل المستضد مع الجسم المضاد في التفاعل
هطول الأمطار في أجار، ارسم النتيجة (احصل على كوب من معلمك).

المرحلة الصلبة ELISA- متغير اختبار عندما يتم امتصاص أحد مكونات التفاعل المناعي (مستضد أو جسم مضاد) على مادة حاملة صلبة، على سبيل المثال، في فتحات ألواح البوليسترين. يتم الكشف عن المكونات عن طريق إضافة الأجسام المضادة أو المستضدات المسمى. إذا كانت النتيجة إيجابية، يتغير لون الكروموجين. في كل مرة بعد إضافة مكون آخر، تتم إزالة الكواشف غير المرتبطة من الآبار عن طريق الغسيل،

I. عند تحديد الأجسام المضادة (الشكل الأيسر)، تتم إضافة مصل دم المريض ومصل مضاد الجلوبيولين المسمى بالإنزيم والركيزة/مولد اللون للإنزيم بشكل تسلسلي إلى آبار الصفائح التي تحتوي على المستضد الممتص.

ثانيا. عند تحديد مستضد (الشكل الأيمن)، تتم إضافة مستضد إلى الآبار مع الأجسام المضادة الممتصة (على سبيل المثال، مصل الدم مع المستضد المطلوب)، ومصل تشخيصي ضده وأجسام مضادة ثانوية (ضد مصل التشخيص)، تحمل علامة إنزيم ، ثم تتم إضافتها، ثم الركيزة/مولد الكروم للإنزيم.

إليسا التنافسيةلتحديد المستضدات: يتنافس المستضد محل الاهتمام والمستضد المسمى بالإنزيم مع بعضهما البعض للارتباط كمية محدودةالأجسام المضادة في الدم المناعي.

اختبار آخر هو اختبار ELISA التنافسي لتحديد الأجسام المضادة: تتنافس الأجسام المضادة المرغوبة والأجسام المضادة التي تحمل علامة الإنزيم مع بعضها البعض على المستضدات الممتصة في الطور الصلب.

اللطخة المناعية- طريقة حساسة للغاية للكشف عن البروتينات، تعتمد على مزيج من الرحلان الكهربائي وELISA أو RIA. يتم استخدام اللطخة المناعية كوسيلة لتشخيص الإصابة بفيروس نقص المناعة البشرية، وما إلى ذلك.

يتم فصل مستضدات مسببات الأمراض باستخدام الفصل الكهربائي لهلام بولي أكريلاميد، ثم نقلها من الهلام إلى الورق المنشط أو غشاء النيتروسليلوز وتطويرها باستخدام ELISA. تنتج الشركات مثل هذه الشرائط مع "بقع" من المستضدات. يتم وضع مصل المريض على هذه الشرائط. . بعد ذلك، بعد الحضانة، يتم غسل المريض من الأجسام المضادة غير المرتبطة ويتم تطبيق مصل ضد الغلوبولين المناعي البشري الموسوم بالإنزيم . يتم اكتشاف المركب المتكون على الشريط [المستضد + الجسم المضاد للمريض + الجسم المضاد ضد Ig البشري] عن طريق إضافة ركيزة مولدة للضوء والتي تغير لونها تحت تأثير الإنزيم.