التشخيص المختبريالجميع تقريبا أمراض معديةيعتمد على تحديد الأجسام المضادة الموجودة في دم المريض والتي يتم إنتاجها ضد المستضدات المسببة للأمراض باستخدام التفاعلات المصلية. لقد دخلوا الممارسة الطبية من أواخر القرن التاسع عشر إلى أوائل القرن العشرين.

لقد ساعد تطور العلم في تحديد هيكل مستضديالميكروبات و الصيغ الكيميائيةسمومهم. هذا جعل من الممكن خلق ليس فقط العلاجية، ولكن أيضا الأمصال التشخيصية. يتم الحصول عليها عن طريق حقن مسببات الأمراض الضعيفة في حيوانات المختبر. وبعد عدة أيام من التعرض، يتم تحضير مستحضرات من دم الأرانب أو الفئران، تستخدم للتعرف على الميكروبات أو سمومها، باستخدام ردود الفعل المصلية.

يعتمد المظهر الخارجي لمثل هذا التفاعل على ظروف إنتاجه وعلى حالة المستضدات في دم المريض. إذا كانت الجزيئات الميكروبية غير قابلة للذوبان، فإنها تترسب أو تتحلل أو ترتبط أو تثبت في المصل. إذا كانت المستضدات قابلة للذوبان، تحدث ظاهرة التعادل أو هطول الأمطار.

تفاعل التراص (RA)

تفاعل التراص المصلي محدد للغاية. إنه سهل الأداء ومرئي بدرجة كافية لتحديد وجود المستضدات في مصل دم المريض بسرعة. يتم استخدامه لإجراء رد فعل فيدال (التشخيص حمى التيفودونظيرة التيفية) وفايجل (التيفوس).

يعتمد على التفاعل المحدد بين الأجسام المضادة البشرية (أو الراصات) والخلايا الميكروبية (الراصات). بعد تفاعلها، يتم تشكيل الجزيئات التي تترسب. وهذه علامة إيجابية. يمكن استخدام العوامل الميكروبية الحية أو المقتولة، والفطريات، والأوالي، والخلايا الجسدية لتنظيم التفاعل.

كيميائياً، ينقسم التفاعل إلى مرحلتين:

1. مزيج محدد من الأجسام المضادة (AT) مع المستضدات (AG).
2. غير محدد - ترسيب تكتلات AG-AT، أي تكوين تراص.

تفاعل التراص غير المباشر (IAR)

لإنتاجها، يتم استخدام خلايا الدم الحمراء الأغنام المنقى وخلايا الدم الحمراء. خلايا الدمبشري، تمت معالجته مسبقًا بالأجسام المضادة أو المستضدات (وهذا يعتمد على ما يريد فني المختبر العثور عليه بالضبط). في بعض الحالات، يتم علاج خلايا الدم الحمراء البشرية بالجلوبيولين المناعي. تعتبر التفاعلات المصلية لكريات الدم الحمراء ناجحة إذا استقرت في قاع الأنبوب. يمكننا التحدث عن رد فعل إيجابي عندما يتم ترتيب الخلايا على شكل مظلة مقلوبة، وتحتل الجزء السفلي بأكمله. يتم احتساب رد الفعل السلبي إذا استقرت خلايا الدم الحمراء في عمود أو على شكل زر في وسط القاع.

تفاعل الهطول (RP)

تُستخدم الاختبارات المصلية من هذا النوع للكشف عن جزيئات صغيرة جدًا من المستضدات. يمكن أن تكون هذه، على سبيل المثال، البروتينات (أو أجزاء منها)، ومركبات البروتينات مع الدهون أو الكربوهيدرات، وأجزاء من البكتيريا وسمومها.

يتم الحصول على أمصال التفاعل عن طريق إصابة الحيوانات بالعدوى بشكل مصطنع، وعادةً ما تكون الأرانب. باستخدام هذه الطريقة، يمكنك الحصول على أي مصل راسب. إنتاج تفاعلات الترسيب المصلية يشبه في آلية عمل تفاعلات التراص. تتحد الأجسام المضادة الموجودة في المصل مع المستضدات لتكوين جزيئات بروتينية كبيرة تترسب في قاع الأنبوب أو على الركيزة (الهلام). تعتبر هذه الطريقة محددة للغاية ويمكنها اكتشاف كميات دقيقة من المادة.

يستخدم لتشخيص الطاعون، والتولاريميا، الجمرة الخبيثةوالتهاب السحايا وأمراض أخرى. وبالإضافة إلى ذلك، فهو يشارك في الفحص الطبي الشرعي.

في هلام

يمكن إجراء التفاعلات المصلية ليس فقط في وسط سائل، ولكن أيضًا في هلام الأجار. وهذا ما يسمى طريقة الهطول المنتشر. بمساعدتها، تتم دراسة تكوين الخلائط المستضدية المعقدة. تعتمد هذه الطريقة على الانجذاب الكيميائي للمستضدات إلى الأجسام المضادة والعكس. في الجل يتحركون نحو بعضهم البعض بسرعات مختلفةويجتمعون ويشكلون خطوط هطول الأمطار. كل سطر عبارة عن مجموعة واحدة من AG-AT.

تفاعل تحييد السموم الخارجية مع مضاد السموم (RN)

الأمصال المضادة للسموم قادرة على تحييد تأثير السموم الخارجية التي تنتجها الكائنات الحية الدقيقة. وتستند هذه التفاعلات المصلية على هذا. يستخدم علم الأحياء الدقيقة هذه الطريقة لمعايرة الأمصال والسموم والمركبات السامة، وكذلك تحديد نشاطها العلاجي. يتم تحديد قوة تحييد السموم الوحدات التقليدية- إ.

بالإضافة إلى ذلك، بفضل هذا التفاعل، من الممكن تحديد نوع أو نوع السموم الخارجية. يستخدم هذا للدفتيريا والتسمم الغذائي. يمكن إجراء الدراسة "على الزجاج" وفي الجل.

رد فعل التحلل (RL)

وللمصل المناعي الذي يدخل جسم المريض، بالإضافة إلى وظيفته الرئيسية مناعة سلبية، وأيضا مع خصائص lysing. إنه قادر على إذابة العوامل الميكروبية والعناصر الخلوية الأجنبية والفيروسات التي تدخل جسم المريض. اعتمادًا على خصوصية الأجسام المضادة الموجودة في المصل، يتم عزل البكتيريا، والسيتوليزينات، والسبيروكيتوليسينات، والهيموليزينات وغيرها.

وتسمى هذه الأجسام المضادة المحددة "المكملة". وهو موجود في جميع سوائل الجسم البشري تقريبًا، وله بنية بروتينية معقدة وحساس للغاية لارتفاع درجة الحرارة والاهتزاز والأحماض والتأثيرات المباشرة. أشعة الشمس. ولكن عند تجفيفه، يمكنه الاحتفاظ بخصائصه القابلة للتحلل لمدة تصل إلى ستة أشهر.

هناك الأنواع التالية من التفاعلات المصلية من هذا النوع:

التحلل البكتيري.

انحلال الدم.

يتم إجراء التحلل البكتيري باستخدام مصل دم المريض ومصل مناعي محدد يحتوي على ميكروبات حية. إذا كانت هناك كمية كافية من المكمل في الدم، فسوف يرى الباحث تحلل البكتيريا، ويعتبر التفاعل إيجابيًا.

أما التفاعل الدموي المصلي الثاني فهو أن يتم معالجة تعليق كريات الدم الحمراء للمريض بمصل يحتوي على الهيموليزينات، والتي يتم تنشيطها فقط في وجود مجاملة معينة. إذا كان هناك واحد، يقوم مساعد المختبر بمراقبة انحلال خلايا الدم الحمراء. يستخدم هذا التفاعل على نطاق واسع في الطب الحديثلتحديد العيار المكمل (أي أقل مبلغ، الذي يثير تحلل خلايا الدم الحمراء) في مصل الدم ولإجراء اختبار التثبيت التكميلي. وبهذه الطريقة يتم إجراء رد فعل مصلي لمرض الزهري -

تفاعل التثبيت المكمل (CFR)

يستخدم هذا التفاعل للكشف عن الأجسام المضادة للعامل المعدي في مصل دم المريض، وكذلك لتحديد العامل الممرض من خلال تركيبته المستضدية.

حتى هذه اللحظة قمنا بوصف التفاعلات المصلية البسيطة. يعتبر RSC تفاعلًا معقدًا، حيث لا يتفاعل فيه عنصران، بل ثلاثة عناصر: الجسم المضاد والمستضد والمكمل. يكمن جوهرها في حقيقة أن التفاعل بين الجسم المضاد والمستضد يحدث فقط في وجود بروتينات مكملة، والتي يتم امتصاصها على سطح مركب AG-AT الناتج.

تخضع المستضدات نفسها، بعد إضافة المكمل، لتغييرات كبيرة، مما يدل على جودة التفاعل الذي يتم إجراؤه. قد يكون هذا تحللًا أو انحلال الدم أو الشلل أو تأثير مبيد للجراثيم أو جراثيم.

يحدث التفاعل نفسه على مرحلتين:

1. تكوين مركب من الأجسام المضادة للمستضد لا يمكن ملاحظته بصريًا للباحث.
2. التغير في المستضد تحت تأثير المكمل. يمكن ملاحظة هذه المرحلة في أغلب الأحيان بالعين المجردة. إذا لم يكن التفاعل مرئيًا بالعين المجردة، فسيتم استخدام نظام مؤشر إضافي لتحديد التغييرات.

نظام المؤشر

ويستند هذا التفاعل على التثبيت التكميلي. تتم إضافة كريات الدم الحمراء المنقى والمصل الانحلالي الذي لا يحتوي على مكمل إلى أنبوب الاختبار بعد ساعة من وضع RSC. إذا بقي هناك مكمل غير منضم في أنبوب الاختبار، فسوف ينضم إلى مركب AG-AT المتكون بين خلايا دم الأغنام والهيموليزين ويسبب انحلالها. وهذا يعني أن RSC سلبي. إذا ظلت خلايا الدم الحمراء سليمة، فإن رد الفعل إيجابي.

تفاعل التراص الدموي (HRA)

هناك نوعان في الأساس ردود فعل مختلفةتراص الدم. واحد منهم مصلي، ويستخدم لتحديد فصائل الدم. وفي هذه الحالة، تتفاعل خلايا الدم الحمراء مع الأجسام المضادة.

والتفاعل الثاني ليس مصليا، لأن خلايا الدم الحمراء تتفاعل مع الهيماجلوتينين التي تنتجها الفيروسات. وبما أن كل عامل ممرض يعمل فقط على خلايا دم حمراء معينة (الدجاج، لحم الضأن، القرد)، يمكن اعتبار هذا التفاعل محددًا للغاية.

يفهم، رد فعل إيجابيأو سلبي، بناءً على موقع خلايا الدم في أسفل الأنبوب. وإذا كان نمطها يشبه المظلة المقلوبة، فهذا يعني أن الفيروس المطلوب موجود في دم المريض. وإذا تشكلت جميع خلايا الدم الحمراء مثل عمود من العملات المعدنية، فإن مسببات الأمراض المطلوبة غير موجودة.

تفاعل تثبيط التراص الدموي (HAI)

هذا رد فعل محدد للغاية يسمح لك بتحديد نوع ونوع الفيروسات أو وجود أجسام مضادة محددة في مصل دم المريض.

يكمن جوهرها في حقيقة أن الأجسام المضادة المضافة إلى أنبوب الاختبار مع مادة الاختبار تمنع ترسب المستضدات على خلايا الدم الحمراء، وبالتالي توقف التراص الدموي. وهذه علامة نوعية على وجود مستضدات محددة في الدم للفيروس المحدد المطلوب البحث عنه.

التفاعل المناعي (RIF)

يعتمد التفاعل على القدرة على اكتشاف مجمعات AG-AT بعد معالجتها بأصباغ الفلوروكروم. هذه الطريقة سهلة الاستخدام ولا تتطلب عزل الثقافة البحتة وتستغرق القليل من الوقت. لا غنى عنه للتشخيص السريع للأمراض المعدية.

ومن الناحية العملية، تنقسم هذه التفاعلات المصلية إلى نوعين: مباشرة وغير مباشرة.

يتم إنتاج RIF المباشر باستخدام مستضد تمت معالجته مسبقًا بمصل الفلورسنت. والطريقة غير المباشرة هي أن الدواء يعالج أولاً بتشخيص تقليدي يحتوي على مستضدات للأجسام المضادة المرغوبة، ثم يتم تطبيق مصل مضيء مرة أخرى، وهو خاص ببروتينات مجمع AG-AT، وتصبح الخلايا الميكروبية ملحوظة تحت الجلد. الفحص المجهري.

تفاعل التلقيح الدموي غير المباشر، RNGA
(اختبار التراص الدموي غير المباشر)

طريقة للكشف عن المستضدات والأجسام المضادة، بناءً على قدرة خلايا الدم الحمراء، التي تم امتصاص المستضدات أو الأجسام المضادة على سطحها مسبقًا، على التراص في وجود الأمصال المتماثلة أو المستضدات المقابلة.

عند اكتشاف المستضدات، تتم الإشارة إلى التفاعل بالعكس التراص الدموي السلبي- ROPGA (اختبار التراص الدموي السلبي المعكوس)، وعند اكتشاف الأجسام المضادة - اختبار التراص الدموي السلبي - RPHA (اختبار التراص الدموي السلبي). تم العثور على RNGA تطبيق واسعلتحديد العلامات المصلية لعدوى فيروس التهاب الكبد B، وخاصة HBsAg والأجسام المضادة له.

المتقدمة حاليا أساليب مختلفةإنتاج تشخيصات كريات الدم الحمراء، والتي تختلف في طرق توعية كريات الدم الحمراء (باستخدام التانين، الغلوتارالدهيد، كلوريد الكروم، الريفانول، إلخ)، وأنواعها (الإنسان، الأغنام، الدجاج، الديك الرومي، إلخ)، خيارات تنظيم التفاعل ( في العيار الميكروي). اللوحات وأنابيب الاختبار والشعيرات الدموية وما إلى ذلك) وتسجيل النتائج (المرئية والفعالة). يتم إنتاج مجموعات تشخيص كريات الدم الحمراء للكشف عن HBsAg ومضادات HBs من قبل العديد من المؤسسات والشركات في بلدنا وخارجها.

في كثير من الأحيان، يتم إجراء RNGA في لوحات ميكروتيتر، حيث يتم تحضير تخفيفات مصل الاختبار وعينات التحكم مسبقًا. بعد إضافة كريات الدم الحمراء التشخيصية والحضانة، يتم تسجيل نتائج التفاعل. تعتبر العينات التي يحدث فيها تراص لخلايا الدم الحمراء، والتي تبدو وكأنها "مظلة" مقلوبة، إيجابية. إذا كان رد الفعل سلبيا، تستقر خلايا الدم الحمراء في قاع الحفرة على شكل حلقة أو قرص.

لتأكيد خصوصية النتائج التي تم الحصول عليها، يتم إجراء التفاعل باستخدام تشخيص كريات الدم الحمراء "التجريبي" (أي كريات الدم الحمراء المتحسسة بالمستضد أو الأجسام المضادة) ومع تشخيص "التحكم" (أي كريات الدم الحمراء غير المتحسسة بالمستضد أو الأجسام المضادة). يشير وجود تفاعل إيجابي مع دواء تشخيصي "مراقب" إلى تفاعل إيجابي كاذب. للتخلص من التفاعلات غير النوعية، يتم معالجة مصل الاختبار بكريات الدم الحمراء غير الحساسة. الشرط المطلوبإجراء RNGA هو رد فعل تحييد، أي اختبار التأكيد.

بالمقارنة مع طرق مثل RPG وVIEF وRSK، فإن تفاعل التراص الدموي غير المباشر له حساسية أعلى (200 - 400 مرة). وبالتالي، يمكن اكتشاف HBsAg في RPGA بتركيزات 6-10 نانوغرام/مل. إن بساطة التفاعل وسرعته (20 - 30 دقيقة) هي التي حددت استخدامه على نطاق واسع هذه الطريقةفي خدمة نقل الدم للكشف عن HBsAg.

بالإضافة إلى تشخيصات كريات الدم الحمراء للكشف عن HBsAg ومضادات HBs، تم أيضًا تطوير الاستعدادات التشخيصية للكشف عن مضادات HBc ومضادات HBc. فئة IgM(إصدار المرحلة الصلبة)، HBeAg، مستضد فيروس التهاب الكبد A والأجسام المضادة له، ومع ذلك، لم يتم العثور على كل منهم تطبيق في الرعاية الصحية العملية.

يتم إجراء التفاعل للكشف عن المستضدات المسببة للأمراض في مادة الاختبار عن طريق إضافة المصل المناعي إليها. في وجود مستضد متماثل، ترتبط الأجسام المضادة، وبالتالي، بعد إضافة كريات الدم الحمراء الحساسة بواسطة المستضد، لا يحدث تراصها، وهو ما يتم تقييمه على أنه نتيجة ايجابية. ولجعل التفاعل أكثر حساسية، تتم إضافة مصل مناعي محدد إلى مادة الاختبار بكمية قليلة (وحدتان من التراص الدموي). يتم تحديد عيار المصل المناعي أولاً باستخدام RNGA. وحدة التراص الدموي الواحدة هي الحد الأقصى لتخفيف المصل الذي يتسبب في التصاق خلايا الدم الحمراء ببعضها البعض.

المنهجية. أضف 0.025 مل من محلول 1٪ من مصل الأرانب الطبيعي إلى آبار ألواح البوليسترين أو أنابيب التراص وقم بإجراء تخفيفات تسلسلية ثنائية لمادة الاختبار. ثم يضاف 0.025 مل من مصل المناعة إلى جميع الآبار، ويرج الطبق ويترك لمدة 30 دقيقة عند درجة حرارة 37 درجة مئوية أو لمدة ساعة عند درجة حرارة 37 درجة مئوية. درجة حرارة الغرفة. بعد ذلك، أضف 0.025 مل من التشخيص المستضدي إلى جميع الآبار، ثم رجها واتركها لمدة ساعتين، وبعد ذلك يتم أخذ النتائج في الاعتبار.

عند إجراء هذا التفاعل، تتم إضافة عنصر التحكم في خصوصية المصل المناعي إلى عنصر التحكم في RNHA، والذي يتكون من مستضد محدد ومصل مناعي (2، 1، 0.5 وحدة تراص الدم) ومعلق كريات الدم الحمراء المحسسة.

يستخدم RTNGA أيضًا للكشف عن أجسام مضادة محددة (كاملة وحاجبة)، والتي يتم من خلالها إضافة كمية محددة من المستضد إلى مصل الاختبار. إذا كانت تحتوي على أجسام مضادة، فإنها مرتبطة بالمستضد، وبالتالي، بعد إضافة كريات الدم الحمراء الحساسة بواسطة الأجسام المضادة (المرحلة الثانية من RTNGA)، لا تلتصق كريات الدم الحمراء ببعضها البعض.

بفضل الاستخدام الحد الأدنى للكميةالمستضد (جرعتان معادلتان) يكون التفاعل حساسًا للغاية. يتم تحديد عدد جرعات التعادل في إعداد المستضد باستخدام RNGA، في حين يتم إجراء التخفيفات التسلسلية ذات الطيتين للمستضد في محلول 1% من مصل الأرانب الطبيعي ويتم إضافة تشخيص كريات الدم الحمراء المضاد إلى الآبار. تعتبر الجرعة المعادلة للمستضد هي الحد الأقصى للتخفيف، مما يعطي التصاقًا كاملاً لخلايا الدم الحمراء الحساسة.

قبل التفاعل، يتم تخفيف أمصال الاختبار بنسبة 1:5-1:10 ويتم تعطيلها عند درجة حرارة 56 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة. لامتصاص الهيماجلوتينين، يضاف إلى المصل معلق 50% من كريات الدم الحمراء الجاهزة أو المغسولة حديثًا بمعدل 0.1 مل من المعلق لكل 1 مل من المصل المخفف. يتم رج الخليط وحضنه لمدة 30 دقيقة عند 37 درجة مئوية أو لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة، وبعد ذلك يتم ترسيب خلايا الدم الحمراء بواسطة الطرد المركزي. يمكنك ترك المصل في الثلاجة حتى اليوم التالي لترسيب خلايا الدم الحمراء.

عند إجراء تجربة، يتم تخفيف مادة الاختبار في محلول 1٪ من مصل الأرانب الطبيعي بحجم 0.025 مل في آبار لوحة ميكروتيتر. ثم تتم إضافة جرعتين معادلة من المستضد بحجم 0.025 مل إلى كل بئر. تُرج الأطباق وتُترك لمدة 30 دقيقة عند 37 درجة مئوية أو لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة. ثم يتم إضافة 0.025 مل من الأجسام المضادة لتشخيص كرات الدم الحمراء إلى جميع الآبار. يتم رج الصفائح وحضنها لمدة 1.5-2 ساعة في درجة حرارة الغرفة، وبعد ذلك يتم أخذ نتائج التفاعل بعين الاعتبار. ويمكن أيضا أن يتم المحاسبة في اليوم التالي. يعتبر عيار مصل الاختبار هو الحد الأقصى للتخفيف الذي لا تلتصق فيه خلايا الدم الحمراء ببعضها البعض.

الخبرة مصحوبة الأنواع التاليةيتحكم:

1) استقرار كريات الدم الحمراء الحساسة (كرات الدم الحمراء + محلول 1% من مصل الأرانب الطبيعي)؛

2) اكتمال استنفاد الهيماجلوتينين في كل مصل اختبار (مصل الاختبار في أدنى التخفيف+ خلايا الدم الحمراء الرسمية)؛

3) صحة تحديد الجرعة المعادلة الدنيا للمستضد (2 و 1 و 0.5 جرعة تحييد المستضد + تشخيص كريات الدم الحمراء للجسم المضاد).

يُستخدم تفاعل التراص الدموي العكسي غير المباشر (رونجا) للإشارة إلى المستضدات البكتيرية والفيروسية في مواد الاختبار، وكذلك للتشخيص السريع لعدد من حالات العدوى.

على عكس RNGA، في هذا التفاعل، لا يتم توعية خلايا الدم الحمراء بواسطة المستضد، ولكن عن طريق الأجسام المضادة، التي يحدث تراصها عند إضافة المستضد.

يتم تثبيت خلايا الدم الحمراء مسبقًا بالفورمالدهيد أو الجلوتارالدهيد ثم ترتبط بجلوبيولين جاما، الذي يتم عزله من الأمصال المناعية وتنقيته من بروتينات المصل الأخرى. يحدث ارتباط جاما جلوبيولين بسطح خلايا الدم الحمراء بمساعدة كلوريد الكروم. للقيام بذلك، أضف حجمًا واحدًا من الغلوبولين المناعي المعزول من مصل المناعة، وحجمًا واحدًا من تعليق 50٪ من كريات الدم الحمراء الفورمالينية وحجمًا واحدًا من محلول كلوريد الكروم 0.1-0.2٪ إلى 8 مجلدات من الماء المقطر. يترك الخليط لمدة 10-15 دقيقة في درجة حرارة الغرفة، ثم تتم معالجة خلايا الدم الحمراء كما في تفاعل التراص الدموي السلبي.

يتم التحقق من خصوصية تشخيص الأجسام المضادة في تفاعل تثبيط التراص الدموي السلبي بواسطة مستضد متماثل. يجب أن يتم تثبيط التفاعل بواسطة مستضد متماثل 16 مرة على الأقل وعدم تثبيطه بواسطة مستضد غير متجانس. يتم استخدام عنصر التحكم لضمان عدم وجود تراص الدم التلقائي.

باستخدام هذا التفاعل، تتم الإشارة إلى مسببات الأمراض في المواد المأخوذة من الأعضاء اشخاص موتىوالحيوانات، على سبيل المثال، من الدماغ والطحال والكبد من الرئتين. إعداد تعليق 10٪ من هذه الأجهزة في محلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر، والطرد المركزي لهم لمدة 30-60 دقيقة عند 10000 دورة في الدقيقة واستخدام المادة طافية كمستضد.

المنهجية.قم بإعداد تخفيفات ثنائية لمادة الاختبار (المستضد) في محلول مثبت. أضف قطرة واحدة من كل تخفيف مستضد إلى 3 آبار متجاورة من اللوحة الدقيقة (يحتل التفاعل 3 صفوف متوازية من الآبار). أضف قطرة واحدة من محلول التثبيت إلى كل بئر من الصف الأول، وقطرة واحدة من مصل المناعة المتماثل المخفف بنسبة 1:10 إلى آبار الصف الثاني، وقطرة واحدة من مصل المناعة غير المتجانسة إلى الصف الثالث. يعمل الصفان الثاني والثالث كعناصر تحكم لخصوصية التفاعل. يترك الخليط لمدة 20 دقيقة في درجة حرارة الغرفة.

أضف قطرة واحدة من تعليق 1% من كريات الدم الحمراء الحساسة (تشخيص الأجسام المضادة لكريات الدم الحمراء) إلى جميع الآبار واهتز اللوحات جيدًا. تؤخذ نتائج التفاعل في الاعتبار بعد 30-40 دقيقة. في وجود مستضد معين، لوحظ التراص الدموي في الصف الأول والثالث (مع مصل غير متجانس) ويغيب في الصف الثاني، حيث يتم تحييد المستضد مسبقًا بمصل متماثل.

يصاحب التفاعل تحكم في كريات الدم الحمراء المتحسسة للتراص التلقائي.

تفاعل تثبيط التراص الدموي العكسي غير المباشر (RTONGA)يسمح لك بتحديد وجود الأجسام المضادة في أمصال البشر والحيوانات.

المنهجية. يتم تخفيف الأمصال 10 مرات محلول متساوي التوتريتم تسخين كلوريد الصوديوم لمدة 20 دقيقة عند درجة حرارة 65 درجة مئوية لتدمير مثبطات غير محددة، ثم تحضير تخفيفات ثنائية الأمصال في محلول مثبت وجرعة عمل من المستضد تحتوي على 4 وحدات تراص. أضف قطرة واحدة من كل تخفيف من المصل إلى ثقوب اللوحة الدقيقة وأضف إليها قطرة واحدة من المستضد، الذي يتوافق تخفيفه مع جرعة العمل. بعد الاتصال بمكونات الخليط لمدة 20 دقيقة في درجة حرارة الغرفة، أضف قطرة واحدة من تشخيص الأجسام المضادة لكرات الدم الحمراء إلى جميع الآبار واهتز جيدًا. بعد 1.5-2 ساعة من الحضانة في درجة حرارة الغرفة، يتم أخذ نتائج التفاعل بعين الاعتبار للتراص الدموي. عيار المصل هو أعلى تخفيف له، والذي يثبط تمامًا تفاعل التراص الدموي بأربع وحدات مستضد تراصية.

ويرافق التفاعل ضوابط من كريات الدم الحمراء المحسسة للتراص التلقائي في وجود: أ) محلول تثبيت؛ ب) المستضد الطبيعي (من مادة لا تحتوي على فيروس)؛ ج) مصل الاختبار. ميزة التفاعل هي تنوعه والقدرة على استخدامه للكشف عن المستضدات المختلفة.

تقييم نتائج التراص الدموي. يتم أخذ نتائج RNGA وRONGA وRTONGA في الاعتبار وفقًا لدرجة تراص كريات الدم الحمراء: (++++) - تراص كامل؛ (+++) - تراص أقل اكتمالا؛ (++) – تراص جزئي؛ (+) – آثار التراص. (-) – غياب التراص.

يعتبر التفاعل إيجابياً إذا كان التراص كاملاً (++++) أو شبه كامل (+++)، ولا يعطي التشخيص تراصاً تلقائياً في وجود كل مكون من مكونات التفاعل، كما يتم التحكم في خصوصية التفاعل. المستضد أو الجسم المضاد إيجابي.

تفاعلات التراصتعتمد على تفاعل الكاشف (الأجسام المضادة) مع المستضدات الموجودة على سطح الخلايا أو الجزيئات الأجنبية. ونتيجة لذلك تتشكل كتل كبيرة تترسب ويمكن رؤيتها حتى بالعين المجردة. وبهذه الطريقة يتم تحديد فصيلة الدم وفقًا لنظام ABO، ووجود عامل Rh فيها، وما إلى ذلك. وهذه طريقة تشخيصية أكثر حساسية مقارنة بتفاعلات الترسيب، نظرًا لأن حجم الرواسب (التراص) يتجاوز حجم ترسب.

التراص الدموي المباشر

التراص الدموي غير المباشر

يعتمد ذلك على حقيقة أن خلايا الدم الحمراء، التي تم امتصاص المستضدات عليها سابقًا، تكتسب القدرة على التراص في وجود الأمصال المتماثلة (الأجسام المضادة).

في هذه الحالة، تعمل خلايا الدم الحمراء كحاملات بمحددات محددة، والتي يحدث تراصها نتيجة تفاعل المستضد + الجسم المضاد.

تسمى خلايا الدم الحمراء التي ترتبط المستضدات بقوة بسطحها بتشخيص مستضد كريات الدم الحمراء، أو كريات الدم الحمراء الحساسة للمستضد.

نوع آخر من RNGA - يتم امتصاص الأجسام المضادة على سطح كريات الدم الحمراء ويحدث تراصها اللاحق في وجود مستضد متماثل. في هذه الحالة، تسمى كريات الدم الحمراء هذه تشخيص الأجسام المضادة لكريات الدم الحمراء، أو كريات الدم الحمراء المتحسسة بالأجسام المضادة.

واستنادا إلى هذين النهجين المنهجيين الأساسيين، تم تطوير واستخدام العديد من التعديلات على RNGA. وبالتالي، يتم استخدام جزيئات اللاتكس القياسية الصغيرة كحاملات. في هذه الحالة، يسمى التفاعل تفاعل تراص اللاتكس (RLA) أو يتم استخدامه المكورات العنقودية الذهبية- تفاعل التراص، وما إلى ذلك. عادة، يتم إعداد تشخيصات كريات الدم الحمراء في مؤسسات الصناعة البيولوجية، ويتم تنفيذ الخبرة الرئيسية لـ RNGA في مختبرات التشخيص.

يتضمن إعداد تشخيص كريات الدم الحمراء الخطوات التالية:

• تثبيت خلايا الدم الحمراء بالفورمالدهيد أو الألدهيدات الجلوتاريكية أو الأكريليكية. يتم تخزين خلايا الدم الحمراء المعالجة هذه لفترة طويلة. في كثير من الأحيان، يتم استخدام كريات الدم الحمراء من الأغنام والبشر والدجاج وما إلى ذلك لهذا الغرض؛
• علاج كريات الدم الحمراء الثابتة بمحلول التانين. ونتيجة لذلك، تكتسب خلايا الدم الحمراء القدرة على امتصاص البروتينات (الفيروسات والأجسام المضادة) الموجودة على سطحها بشكل لا رجعة فيه؛
• تحسس كريات الدم الحمراء التانيزية بواسطة الفيروسات أو الأجسام المضادة.

تجدر الإشارة إلى أن طرق تحضير كريات الدم الحمراء التشخيصية اصابات فيروسيةمختلف.

الإجراء الخاص بإجراء RNGA للكشف عن عيار الجسم المضاد وتحديده هو كما يلي:

• تضاف جرعات متساوية من كريات الدم الحمراء المتحسسة بالمستضد إلى التخفيفات المتتالية من المصل؛
• يُترك الخليط لمدة 2-3 ساعات عند درجة حرارة الغرفة أو لمدة 16-18 ساعة عند 4 درجات مئوية؛
• تأخذ في الاعتبار النتائج. إذا كان المصل يحتوي على أجسام مضادة للفيروس الذي تم تحسس خلايا الدم الحمراء به، يتم ملاحظة التراص الدموي، والذي يتم تقييمه بالتهجين.

يعتبر عيار الجسم المضاد الموجود في المصل هو أعلى تخفيف في المصل والذي لا يزال يوفر التراص الدموي بواسطة تهجينين على الأقل.

ويرافق RNGA جميع الضوابط ذات الصلة. عادةً ما يتم التفاعل باستخدام الطريقة الدقيقة.

يتيح لك RNGA حل المشكلات التشخيصية التالية:

• الكشف عن الأجسام المضادة وتحديد عيارها في مصل الدم باستخدام تشخيص مستضد كريات الدم الحمراء المعروف؛
• اكتشاف وتحديد فيروس غير معروف باستخدام تشخيص الأجسام المضادة المعروفة لكرات الدم الحمراء.

مزايا RNGA: الحساسية العالية، وبساطة تقنية التنسيب، وسرعة الاستجابة. ومع ذلك، من المهم ملاحظة أنه تنشأ صعوبات كبيرة في إعداد تشخيصات خلايا الدم الحمراء المستقرة ( اعتماد كبيرعلى نقاء المكونات المستخدمة، والحاجة إلى اختيار طريقة التثبيت، تانيزيشن وتوعية كريات الدم الحمراء لكل نوع من الفيروسات).