اللطخة المناعية. تشخيص مرض الإيدز عن طريق التطعيم المناعي لفيروس نقص المناعة البشرية

اللطخة المناعية هي إجراء تشخيصي يتم إجراؤه في ظروف معملية، وتكشف نتائجه عن الأجسام المضادة لمسببات الأمراض امراض عديدة. أحد هذه الأمراض هو فيروس نقص المناعة البشرية. تجدر الإشارة على الفور إلى أن دراسة مثل التطعيم المناعي لفيروس نقص المناعة البشرية هي إجراء إضافي موصوف لتأكيد نتيجة ELISA الإيجابية.

فيروس نقص المناعة البشرية هو عدوى تتطور ببطء. من لحظة دخول مسببات الأمراض إلى الجسم وحتى ظهور الأعراض الأولى، غالبًا ما يمر وقت طويل، قد يصل إلى عدة سنوات.

على المرحلة الأوليةتطوير الاعراض المتلازمةقد يكون مفقودا. ترقية درجة الحرارة العامة، الشعور بالضيق، والتهاب الحلق، والأعراض المميزة للإصابة بفيروس نقص المناعة البشرية، ويختلط الأمر على الشخص مع نزلات البرد، ولكن العدوى تستمر في التقدم. ولذلك ينصح المتخصصون في مراكز فيروس نقص المناعة البشرية بالخضوع لها تشخيص شاملفي حالات كهذه:

• إذا مارست اتصالاً جنسيًا غير محمي مع شريك جديد؛
• إذا تم إعادة استخدام حقنة أو إبرة طبية يمكن التخلص منها؛
• إذا كنت قد حصلت مؤخرًا على وشم أو ثقب.
• إذا تم الكشف عن عدوى أخرى، يكون طريق انتقالها جنسيًا (على سبيل المثال، الزهري، التهاب المهبل الجرثومي، السيلان)؛
• إذا كنت قد اتصلت بشخص مصاب.

يتم إجراء Immunoblot لفيروس نقص المناعة البشرية باستخدام المصل أو البلازما. تتطلب الدراسة على شريط واحد 1.5-2 مل من الدم أو 15-25 ميكرولتر من المصل.

يتيح الاختبار التشخيصي اكتشاف الأجسام المضادة ليس فقط لفيروس نقص المناعة البشرية، ولكن أيضًا لمسببات الأمراض الأخرى. يتم خلال الدراسة استخدام مجموعات خاصة خاصة بأمراض مختلفة، على سبيل المثال:

• HSV1 و HSV2 IgM/IgG (للكشف عن الهربس عدوى فيروسية);
• ملف تعريف TORCH IgM (للكشف عن داء المقوسات والحصبة الألمانية، عدوى الفيروس المضخم للخلايا، HSV 1 و HSV 2)؛
• EBV IgMTIgG (للكشف عن عدوى فيروس Epstein-Barr)؛
• HCV IgG (للكشف التهاب الكبد الفيروسيالنوع ج).

يمكن أن تكون نتيجة النشاف المناعي إيجابية (عند اكتشاف الأجسام المضادة) وسلبية (عند غياب الأجسام المضادة في المادة البيولوجية)، بالإضافة إلى نتائج غير محددة وإيجابية كاذبة وسلبية كاذبة.

أين يمكنك إجراء اختبار الإصابة بالفيروس وماذا تفعل بعد ذلك؟

كل عيادة ومختبر خاص ومستشفى وعيادة متخصصة في مثل هذه الأنشطة التشخيصية. يمكنك إجراء الاختبار في مركز اختبار فيروس نقص المناعة البشرية. تقدم بعض العيادات الخاصة الاستشارة والفحص للكشف عن مرض الإيدز وفيروس نقص المناعة البشرية في المنزل.

مهم! بعد الحصول على نتائج الدراسة، عليك الاتصال بالطبيب ليصف لك العلاج المناسب.

اختبارات إيجابية

إذا كانت نتائج اللطخة المناعية إيجابية، فهذا لا يعني أن الإصابة بفيروس نقص المناعة البشرية تتطور في الجسم. لتأكيد التشخيص، توصف دراسات أخرى، على سبيل المثال، المناعي غير المباشر.

على الرغم من أن طريقة اللطخة المناعية حساسة للغاية، إلا أنه نظرًا لتحديد الجلوبيولين المناعي من الفئة G، فمن الممكن اكتشاف خطأ. نتيجة ايجابيةفي الأسابيع الثلاثة الأولى بعد الإصابة. وفي هذه الحالة يتم تكرار الاختبار بعد فترة معينة.

جميع أسباب الحصول على نتيجة إيجابية كاذبة غير معروفة. المصادر الأكثر شيوعًا هي الحمل والتناول الحديث للقاح مثبط للمناعة. إذا ظلت الكتلة المناعية لفيروس نقص المناعة البشرية إيجابية بعد فترة زمنية معينة بعد التعرض لمثل هذه العوامل، فهذا يعني أن الشخص مصاب بالعدوى.

نتيجة سلبية

قد تعطي الكتلة المناعية نتيجة سلبية، مما يشير إلى عدم وجود أجسام مضادة لعدوى فيروس نقص المناعة البشرية في الجسم، ونتيجة لذلك، بكامل الصحة.

غالبًا ما تتم ملاحظة وجود كتلة مناعية سلبية خلال "فترة النافذة" (الأشهر الثلاثة الأولى بين الإصابة وظهور الأجسام المضادة في الدم). خلال هذه الفترة، لا يكتشف الاختبار الأجسام المضادة المقابلة، ولكن في السوائل الأخرى (الحيوانات المنوية، الإفرازات المهبلية) يمكن اكتشافها بكميات كبيرة.

كيف يتم إجراء التحليل؟

يسمح Immunoblot بتحديد الأجسام المضادة عن طريق فحص الدم واستخدام الرحلان الكهربائي الهلامي.

أولا وقبل كل شيء، يتم تدمير الخلايا البكتيرية أو الفيروسات بواسطة الموجات فوق الصوتية، وبعد ذلك يتم فصل جميع مستضدات الفيروس أو الخلايا البكتيرية عن طريق الرحلان الكهربائي. والنتيجة هي كاشف تجاري يوضع على فيلم خاص من النيتروسليلوز.

أثناء النشاف المناعي، يتم تطبيق مصل الاختبار أيضًا على المادة التي تحتوي على مستضد معروف. بعد الحضانة وغسل الأجسام المضادة غير المرتبطة، ابدأ مقايسة الامتصاص المناعي المرتبطيتم تطبيق الغلوبولين المناعي، الذي يحمل إنزيمًا، وركيزة مولدة للضوء يتغير لونها عند ملامستها للإنزيم، على المصل.

في حالة وجود الأجسام المضادة، سوف تتشكل البقع على الناقل.

الطريقة الخطية

اللطخة الخطية لفيروس نقص المناعة البشرية هي اختبار مناعي غير مباشر، تنتج طريقته مؤشرا نوعيا للأجسام المضادة الذاتية لفئة IgG.

خلال البحوث المناعية يستخدمونها مادة فيروسيةشكل فيروس نقص المناعة البشرية أو المستضدات. في المختبر، يتم دمج بروتينات فيروس نقص المناعة البشرية مع الأجسام المضادة الفردية التي تم الحصول عليها من مصل الدم. بعد ذلك، يتم إجراء الحضانة عن طريق إضافة الأجسام المضادة المسمى والجلوبيولين المناعي البشري.

تشخيص فيروس نقص المناعة البشرية عند الأطفال حديثي الولادة

في جسم الطفل الذي يقل عمره عن 9 أشهر والمولود من امرأة مصابة، توجد أجسام مضادة لفيروس نقص المناعة البشرية لدى الأم، مما يؤدي إلى نتيجة إيجابية كاذبة لفحص ELISA. ولهذا السبب، تعطى الأفضلية للاختبارات الفيروسية - التحليل الكمي للحمض النووي الريبي (RNA) والحمض النووي (DNA PCR). تعتبر طريقة الثقافة لتشخيص العدوى أكثر حساسية.

مهم! مؤشرات تنفيذ التدابير التشخيصية للكشف عن الإصابة بفيروس نقص المناعة البشرية عند الأطفال حديثي الولادة هي: الولادة من امرأة مصابة، الحصول على نتيجة مشكوك فيها من التحليل الذي تم إجراؤه مسبقًا.

إختبار الحمل

وبما أن عدوى فيروس نقص المناعة البشرية التي تتطور لدى المرأة الحامل يمكن أن تنتقل إلى الجنين، فمن الضروري ذلك التشخيص المبكرلفيروس نقص المناعة.

في البداية، يتم استخدام مقايسة الامتصاص المناعي المرتبط بالإنزيم كاختبار فحص. يساعد الإجراء التشخيصي على اكتشاف الأجسام المضادة للعدوى في مصل الدم. وعلى الرغم من دقة نتائج التحليل أثناء الحمل، إلا أنه يلزم تكرار الاختبار.

أحد أنواع اختبار ELISA هو التطعيم المناعي، والذي يُستخدم غالبًا أثناء الحمل. بناءً على نتائج التشخيص، من الممكن تحديد الأجسام المضادة لبعض المستضدات، والتي يتم توزيعها حسب الوزن الجزيئي باستخدام الرحلان الكهربائي.

كيفية اجتياز الاختبار بشكل صحيح

يتطلب التطعيم المناعي لفيروس نقص المناعة البشرية تدريب خاص، كغيرها من طرق تشخيص المرض. إذا تمكنت من إجراء بعض الدراسات والحصول على نتائج مؤشرات معينة على مدار اليوم (على سبيل المثال، الاستجابة لمسببات الحساسية)، فأنت بحاجة إلى التبرع بالدم لإجراء اختبار مناعي فقط في الصباح.

فك تشفير النتائج

فك التشفيريتم إجراء نتائج اللطخة المناعية بواسطة عامل المختبر. إذا تم الكشف عن 2 من 3 بروتينات فيروس نقص المناعة البشرية-1 أو فيروس نقص المناعة البشرية-2، فهذا يشير إلى وجود عدوى مقابلة في الجسم. يتم إجراء الدراسة لتأكيد المقايسة المناعية الإنزيمية الإيجابية. ولذلك، يتم اختبار التفاعل أيضًا للبروتينات مثل gp120/160، gp41 بالاشتراك مع p24. وهذا الأخير جزء من جينات الإيدز الثلاثة - gag pol وenv.

يتضمن التشخيص الأولي دراسة البروتينات p25 وgp110/120 وgp160، مما يشير إلى وجود مرحلة مبكرةتطور المرض. إذا أعطت المقايسة المناعية للإنزيم المصلي الثاني نتيجة إيجابية، يتم إجراء كتلة مناعية. إذا كان الأخير يعطي أيضا نتيجة إيجابية، يتم تأكيد تشخيص فيروس نقص المناعة البشرية.

تعتمد احتمالية الحصول على نتيجة إيجابية على الفترة التي مرت من لحظة الإصابة حتى التشخيص:

• بعد 28 يومًا - 60-65%؛
• بعد 42 يومًا - 80%؛
• بعد 56 يومًا - 90%؛
• بعد 84 يومًا – 95%.

من الممكن الحصول على نتيجة إيجابية كاذبة إذا كانت العينة مادة بيولوجيةلمزيد من التشخيص تم تنفيذها أثناء الحمل، في حالة حدوث انتهاك المستويات الهرمونية، قمع لفترات طويلة وظيفة المناعةبعض الأدوية التي يتناولها الشخص.

معايير تقييم التحليل

يجب أن تستوفي نتائج ELISA والتحليل المناعي المعايير التالية:

• لطخة المادة البيولوجية قيد الدراسة تتزامن مع لطخة العينة المرجعية؛
• الوزن الجزيئي للمكون الرئيسي المحدد يلبي متطلبات المواصفات.

يجب أن تفي الشوائب المكتشفة ومحتواها بمتطلبات الشهادة الخاصة بالمواد المرجعية.

نتائج غير قابلة للتفسير

في بعض الحالات، لا يتوافق التخثر المناعي لفيروس نقص المناعة البشرية والإيدز مع نتيجة سلبية وإيجابية، ولا يستطيع الطبيب تحديد ذلك السبب الحقيقيمعلومات مشكوك فيها. غالبًا ما يكون سبب التفسير الخاطئ هو العدوى الناجمة عن نمط مصلي آخر.

لإزالة الشكوك، يتم تنفيذ PCR و ELISA في ديناميات. مع الغياب سمة من المرضالأعراض لمدة ستة أشهر وعوامل الخطر تشير إلى الصحة الكاملة. في هذه المرحلة التدابير التشخيصيةيتخرجون.

يمكن أيضًا الحصول على نتيجة مشكوك فيها في حالة ظهور مرض معد آخر أو سرطان أو رد فعل تحسسي في الجسم.

مهم! إذا كانت النتيجة مشكوك فيها، فلا يمكن للشخص أن يكون متبرعًا بالدم أو أي مادة بيولوجية أخرى.

الأخطاء النموذجية عند تشخيص الإصابة بفيروس نقص المناعة البشرية

جمع المواد البيولوجية وتسليم وتسجيل المواد المستخدمة أثناء التشخيص المختبري، يجب أن تمتثل للقواعد التالية:

1. يتم إعداد الوثائق المصاحبة التي تشير إلى اسم نظام الاختبار وتاريخ انتهاء صلاحيته وسلسلته.
2. تفاصيل جواز السفر للموضوع والتاريخ والمكان الذي تم فيه جمع المادة البيولوجية موضحة بالكامل.
3. لا يتم تخزين المصل لفترة أطول من الفترة المحددة، ويتم أخذ الكمية المسموح بها من مادة الخزعة للاختبار - على الأقل 2-5 مل.
4. الرقم الموجود على الزجاجة يتوافق مع الرقم المشار إليه في الاتجاه.
5. ويتم جمع المواد البيولوجية وفقا لقواعد ثابتة، وهي من الوريد الزندي. يجب ألا يحتوي الدم الذي يتم فحصه على جلطات.

يتم استخدام أنبوب اختبار جاف لتجميع المادة. غالبًا ما يتم أخذ دم الحبل السري من الأطفال حديثي الولادة، مما يشير إلى هذه الحقيقة في الاتجاه.

من الأخطاء النموذجية التي يرتكبها الأطباء تخزين المواد التي تم الحصول عليها لأكثر من 12 ساعة في درجة حرارة الغرفةوأطول من يوم واحد عند درجة حرارة 4-8 درجات فوق مئوية. بسبب بداية انحلال الدم، يتم تشويه نتائج الإجراء التشخيصي.

لذلك أخطاء نموذجيةأثناء تشخيص الإصابة بفيروس نقص المناعة البشرية تشمل:

• جمع غير لائق من المواد البيولوجية.
• التخزين غير السليم لمواد الخزعة.
• النقل غير السليم لأنظمة التشخيص.
• تخزين نظام الاختبار على المدى الطويل.

وتتأثر النتيجة أيضًا بنوعية المياه المستخدمة لشطف الحاويات التي توضع فيها المادة البيولوجية.

بعد تلقي نتائج الاختبار، يجب على عامل المختبر إصدار استنتاج للطبيب. إذا تم إجراء التشخيص خلال "فترة النافذة"، فإنه يأمر بتكرار التشخيص بعد فترة زمنية معينة. على أية حال، لتشخيص الإصابة بفيروس نقص المناعة البشرية، لا يكفي وجود كتلة مناعية واحدة. مطلوب تشخيص شامل.

يتم أخذ الدم من الوريد. ثم تستمر الدراسة وفق التعليمات:

• يتم وضع العينة في هلام للفصل الكهربي، مما ينتج عنه بروتينات محددة حساسة للفيروس؛
• يتم تطبيق ورق النيتروسليلوز على الجل المعالج.
• يتم وضع العينة المحضرة في جهاز النشاف.

لتحديد إنزيمات معينة، من الضروري تحضير الورقة بشكل صحيح البحوث المختبرية. للقيام بذلك، يتم تطبيق الأجسام المضادة والاقتران المشع المسمى عليه. يتم تقييم نتيجة الدراسة بصريًا، ويتم فحص سلاسل الإنزيمات المبنية.

فك تشفير النتائج

بعد التلاعب، تبقى الشرائط على الورق. وهي تقع في مكان حدوث الاقتران، أي أن الدواء المطبق يتفاعل مع بروتين الفيروس. بهذه الطريقة يمكنك اكتشاف أجزاء من البروتين:

• من قلب فيروس نقص المناعة البشرية-1 – ص17، ص24، ص55؛
• العامل الممرض فيروس نقص المناعة البشرية-2 – ص16، ص26، ص56.

تعتبر نتائج النشاف المناعي إيجابية إذا تم الكشف عن 2 من 3 بروتينات فيروس نقص المناعة البشرية-1 أو فيروس نقص المناعة البشرية-2. نظرًا لأن اللطخة الغربية (الاسم الثاني للدراسة) تستخدم غالبًا لتأكيد اختبار ELISA إيجابي، يتم فحص التفاعل بحثًا عن بروتينات معينة: gp120/160، gp41 أو p24. وهي جزء من جينات الإيدز الثلاثة الرئيسية - gag، pol، وenv. في التشخيص الأولييتم إجراء الاختبار فقط للبروتينات p25، وgp110/120، وgp160؛ وإذا كانت النتيجة إيجابية، فسيتم إجراء الاختبار لـ p24. ويسمح هذا الجزء من البروتين باكتشاف الفيروس في مرحلة مبكرة.

النتيجة الإيجابية هي سبب للبحث عن تشخيصات أكثر تعقيدًا. ولا يصح إلا في ثلاث حالات:

• في المرضى الذين يعانون من مستوى عالالبيلروبين؛
• عند الاتصال بالمستضدات الفيروسية.
• لأمراض النسيج الضام.

إذا لم يكن لدى المريض خطوط تتوافق مع بروتينات الإيدز، فسيتم تقييم النتيجة على أنها سلبية. وهذا يعني أن الشخص غير مصاب بفيروس نقص المناعة البشرية أو أنه في فترة النافذة. وهذا الأخير يعني أن الفيروس كان من الممكن أن يدخل الجسم، لكنه لم يتطور فيه بعد. ولزيادة دقة التشخيص، يتم استخدام أنظمة الاختبار:

• المؤتلف-فيروس نقص المناعة البشرية؛
• مولد المضاد؛
• شاشة بيبتوسكرين.

وبعد فحصها تعتبر النتيجة سلبية إذا لم يتم العثور على البروتينات gp120، gp160، Sp4 في العينة.

هناك خيار تفسير آخر - نتيجة محايدة أو مشكوك فيها. ويحدث عند أولئك الذين لديهم اتصال جنسي مع شريك مصاب بفيروس نقص المناعة البشرية. تم العثور على الأجسام المضادة للبروتينات gp120 و gp160 في دمائهم. أيضًا، يتم تقديم إجابة مشكوك فيها أثناء النشاف عندما تكون العدوى بدون أعراض، أي أنها في حالة سبات.

من المهم التحقق بدقة من النتيجة المشكوك فيها. ولهذا الغرض، يتم استخدام دراسة ديناميكية لمصل الدم، أي إجراء فحوصات منتظمة باستخدام طرق التطعيم المناعي وELISA لمدة ستة أشهر. توصف أيضًا فحوصات إضافية نظرًا لوجود الأجسام المضادة في الدم و المجمعات المناعيةقد يكون راجعا إلى:

• أمراض معدية؛
• وجود أورام سرطانية.
• الحساسية.

في ممارسة التشخيص المختبري للأمراض المعدية، تكون هناك أحيانًا حاجة لتحديد الأجسام المضادة ليس لمسببات الأمراض بشكل عام، ولكن لبعض بروتيناتها (المستضدات)، أي مجموعة من الأجسام المضادة المحددة. إذا تم استخدام طريقة مقايسة الامتصاص المناعي المرتبط بالإنزيم لهذا الغرض، فمن الضروري في هذه الحالة أولاً عزل وتنقية المستضدات الضرورية من ثقافة العامل الممرض. يتم تطبيق البروتينات الناتجة بشكل منفصل على المرحلة الصلبة. في حالة استخدام لوحة 96 بئر، يتم وضع نوع واحد من المستضد في كل بئر. ثم يتم تحديد الأجسام المضادة المحددة بطريقة غير مباشرة.

من خلال وجود رد فعل إيجابي في البئر مع مستضد معين، يمكن الحكم على وجود الأجسام المضادة المحددة المقابلة. يتم تقديم هذه الأنواع من أنظمة اختبار الإنزيم المناعي من قبل الشركات المصنعة، ولكن طريقة النشاف المناعي (اللطخة الغربية) أصبحت منتشرة على نطاق واسع بسبب محتواها الأكبر من المعلومات وسهولة تنفيذ الاختبار نفسه.

يسمح النشاف المناعي للشخص بتحديد الأجسام المضادة في مصل الدم في وقت واحد وفي نفس الوقت بشكل تفاضلي لجميع البروتينات ذات الأهمية التشخيصية للعامل الممرض. الترجمة من الإنجليزية Western blot تعني النقل الغربي (حرفيًا - النشاف). تاريخ هذا المصطلح غير العادي هو كما يلي.

في عام 1975، اقترح عالم يُدعى إي. ساذرن لأول مرة طريقة لنقل أجزاء الحمض النووي المنفصلة كهربائيًا من مادة هلامية إلى غشاء. وبحسب المؤلف فإن الطريقة كانت تسمى "اللطخة الجنوبية" والتي تعني "النقل الجنوبي". طريقة نقل جزيئات الحمض النووي الريبي (RNA) أطلق عليها الخبراء لقب اللطخة الشمالية - "النقل الشمالي". في البداية على سبيل المزاح، ثم أصبح هذا الاسم راسخا في الأدبيات العلمية الرسمية.

في عام 1979، نشر ج. توبين نتائج التجارب الأولى على نشاف البروتين. استمرارًا لتقاليد الأسماء "الجغرافية" لطرق نقل الجزيئات البيولوجية هذه الطريقةبدأ يطلق عليه اسم النقل "الغربي" - لطخة غربية.

تتضمن الخطوة الأولى من هذه الطريقة الفصل الكهربي لخليط من البروتينات المسببة للأمراض في هلام بولي أكريلاميد في وجود كبريتات دوديسيل الصوديوم (SDS). DSN، كونها سطحية المادة الفعالةيغلف جزيئات البروتين بالتساوي ويمنحها جميعًا شحنة سالبة متساوية الحجم تقريبًا. ولذلك تتحرك الجزيئات في مجال كهربائي في اتجاه واحد، وتعتمد سرعة حركتها فقط على حجم الجزيء (الوزن الجزيئي) للبروتين.

نتيجة للإجراء الكهربي، يتم الحصول على لوحة هلامية، في سمك البروتينات الموجودة في شكل مناطق خطية رقيقة منفصلة. وفقًا لاتجاه الحركة، يتم تقسيمها بالترتيب التالي: البروتينات ذات الوزن الجزيئي الكبير، حوالي 120-150 كيلو دالتون، تكون أقرب إلى البداية، والبروتينات ذات الكتلة 5-10 كيلو دالتون تتحرك أبعد نحو النهاية. خط. في المرحلة الثانية، يتم وضع لوحة الهلام على ورقة من النيتروسليلوز ويتم وضع هذا الهيكل بين أقطاب مصدر التيار المباشر. تحت تأثير الحقل الكهربائيتتدفق البروتينات من الهلام المسامي إلى غشاء أكثر كثافة، حيث تكون ثابتة تمامًا.

تتم معالجة اللطخة الناتجة بمحلول مانع يحتوي على بروتينات غير مستضدية و/أو منظفات غير أيونية (توين 20)، والتي تحجب المواقع الخالية من المستضد على الغشاء. يتم بعد ذلك قطع طبقة الغشاء إلى شرائح ضيقة بحيث يحتوي كل شريط على جميع أجزاء المستضدات. يتم تنفيذ الخطوات الموضحة من قبل الشركة المصنعة.

تحتوي أنظمة الاختبار التجارية للكشف عن الأجسام المضادة باستخدام النشاف المناعي على بقع (شرائط أو شرائط) جاهزة للاختبار. يحدد المستخدم الطيف الكامل للأجسام المضادة المحددة للبروتينات المسببة للأمراض وفقًا للمخطط طريقة غير مباشرة. يتم استخدام مادة عديمة اللون قابلة للذوبان ككروموجين لإجراء تفاعل لوني (إنزيمي)، حيث يكتسب منتجها اللون، ويصبح غير قابل للذوبان ويستقر (يرسب) على النيتروسليلوز.

نتيجة للتفاعلات المناعية والأنزيمية المتسلسلة، في وجود أجسام مضادة لبروتينات مسببات الأمراض في عينة الاختبار، تظهر خطوط عرضية داكنة على اللطخة، ويكون موقعها في منطقة بروتينات معينة مسببة للأمراض. يشير كل نطاق من هذه النطاقات إلى وجود أجسام مضادة محددة للمستضد المقابل. يتم تقديم نتيجة الدراسة التي تم إجراؤها عن طريق التطعيم المناعي في شكل قائمة من الأجسام المضادة لبروتينات معينة من العامل الممرض. على سبيل المثال: "تم اكتشاف أجسام مضادة للبروتينات p17 وp24".

يمكن تخزين بقع النيتروسليلوز جافة لفترة طويلة بعد التطور. ومع ذلك، فإن شدة اللون تضعف بشكل ملحوظ. يمكن تصوير البقع الرطبة أو يمكن إدخال صورها الرسومية في ذاكرة أجهزة الكمبيوتر الشخصية باستخدام الماسحات الضوئية. خاص برامج الحاسوبتسمح لك بمعالجة النتائج التي تم الحصول عليها ومراقبة ديناميكيات طيف الأجسام المضادة بسرعة أثناء المراقبة الديناميكية

اللطخة المناعية (اللطخة المناعية، اللطخة الغربية، اللطخة الغربية)- يجمع بين مقايسة الامتصاص المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA) مع النقل الكهربي الأولي لمستضدات الفيروس على شريط النيتروسليلوز (الشريط).

في هذا الاسم العلمي الجميل، الأرجح أن كلمة "blot" تُترجم إلى "blot"، و"western" إلى كلمة "western" تعكس اتجاه انتشار هذه "blot" عبر الورقة من اليسار إلى اليمين، أي إلى الخريطة الجغرافيةوهذا يتوافق مع الاتجاه من الغرب إلى الشرق. جوهر طريقة "اللطخة المناعية" هو أن تفاعل الإنزيم المناعي لا يتم باستخدام خليط من المستضدات، ولكن مع مستضدات فيروس نقص المناعة البشرية، التي تم توزيعها مسبقًا عن طريق الرحلان المناعي إلى أجزاء تقع وفقًا للوزن الجزيئي على سطح غشاء النيتروسليلوز. ونتيجة لذلك، يتم توزيع بروتينات فيروس نقص المناعة البشرية الرئيسية، الحاملة للمحددات المستضدية، على السطح في شكل خطوط منفصلة، ​​تظهر أثناء تفاعل الامتصاص المناعي المرتبط بالإنزيم.

تتضمن Immunoblot عدة مراحل:

إعداد الشريط.يتعرض فيروس نقص المناعة البشرية (HIV)، الذي تم تنقيته مسبقًا وتدميره إلى مكوناته الأساسية، للرحلان الكهربائي، ويتم فصل المستضدات التي يتكون منها فيروس نقص المناعة البشرية بالوزن الجزيئي. بعد ذلك، باستخدام طريقة النشاف (المشابهة لضغط الحبر الزائد على وسادة النشاف)، يتم نقل المستضدات إلى شريط من النيتروسليلوز، والذي يحتوي الآن على طيف من العصابات المستضدية المميزة لفيروس نقص المناعة البشرية، والتي لا تزال غير مرئية للعين.

فحص العينة.يتم تطبيق مادة الاختبار (المصل، بلازما دم المريض، وما إلى ذلك) على شريط النيتروسليلوز، وإذا كانت هناك أجسام مضادة محددة في العينة، فإنها ترتبط بنطاقات مستضدية (مكملة) مقابلة تمامًا. نتيجة للتلاعبات اللاحقة، يتم تصور نتيجة هذا التفاعل - جعلها مرئية.

تفسير النتيجة.يؤكد وجود أشرطة في مناطق معينة من صفيحة النيتروسليلوز وجود أجسام مضادة لمستضدات فيروس نقص المناعة البشرية المحددة بدقة في المصل الذي تم اختباره.

قطاع أ-التحكم الإيجابي

الشريط ب - التحكم الإيجابي الضعيف

حارة C - التحكم السلبي

الخط D - عينة إيجابية (تم اكتشاف أجسام مضادة لفيروس نقص المناعة البشرية -1)

في الوقت الحالي، تعد اللطخة المناعية (immunoblot) هي الطريقة الرئيسية لتأكيد وجود الأجسام المضادة الخاصة بالفيروس في مصل الاختبار. في بعض حالات الإصابة بفيروس نقص المناعة البشرية، قبل حدوث الانقلاب المصلي، يتم اكتشاف أجسام مضادة محددة بشكل أكثر فعالية النشاف المناعيمن إليسا. عند دراسة طريقة التطعيم المناعي، وجد أنه في أغلب الأحيان تم اكتشاف الأجسام المضادة لـ gp 41 في أمصال مرضى الإيدز، وتم اكتشاف p24 في الأفراد الذين تم فحصهم باستخدام الغرض الوقائي، يتطلب أبحاث إضافيةلوجود الإصابة بفيروس نقص المناعة البشرية. أثبتت أنظمة اختبار النشاف المناعي المستندة إلى البروتينات المؤتلفة المهندسة وراثيًا أنها أكثر تحديدًا من الأنظمة التقليدية المعتمدة على المحللة الفيروسية النقية. عند استخدام مستضد مؤتلف، لا يتم تشكيل شريط مستضد منتشر، ولكن شريط مستضد ضيق محدد بوضوح، والذي يمكن الوصول إليه بسهولة للتسجيل والتقييم.

تكشف أمصال الأفراد المصابين بفيروس نقص المناعة البشرية-1 عن أجسام مضادة للبروتينات والبروتينات السكرية الرئيسية التالية - بروتينات الغلاف الهيكلي (env) - gp160، gp120، gp41؛ النواة (الكمامة) - p17، p24، p55، وكذلك الإنزيمات الفيروسية (pol) - p31، p51، p66. الأجسام المضادة للبيئة نموذجية بالنسبة لفيروس نقص المناعة البشرية-2 - gp140، gp105، gp36؛ الكمامة - ص16، ص25، ص56؛ بول - ص68.

ضمن طرق المختبرمن الضروري تحديد خصوصية التفاعل، والأكثر شهرة على نطاق واسع هو اكتشاف الأجسام المضادة لبروتينات الغلاف لـHIV-1 - gp41، gp120، gp160، وHIV-2 - gp36، gp105، gp140.

تعتبر منظمة الصحة العالمية الأمصال الإيجابية التي يتم فيها الكشف عن الأجسام المضادة لأي اثنين من البروتينات السكرية لفيروس نقص المناعة البشرية عن طريق التطعيم المناعي. وفقًا لهذه التوصيات، إذا كان هناك تفاعل مع بروتين واحد فقط من بروتينات الغلاف (gp 160، gp 120، gp 41) مجتمعًا أو بدون تفاعل مع بروتينات أخرى، فإن النتيجة تعتبر مشكوك فيها ويوصى بإعادة الاختبار باستخدام اختبار مجموعة من سلسلة مختلفة أو من شركة مختلفة. إذا ظلت النتيجة مشكوك فيها حتى بعد ذلك، يوصى بالمراقبة لمدة 6 أشهر (البحث بعد 3 أشهر).

قد يشير وجود تفاعل إيجابي مع المستضد p24 إلى فترة من الانقلاب المصلي، حيث تظهر الأجسام المضادة لهذا البروتين أولاً في بعض الأحيان. في هذه الحالة، يوصى، اعتمادًا على البيانات السريرية والوبائية، بتكرار الدراسة بعينة مصل مأخوذة بعد أسبوعين على الأقل، وهذا هو الحال بالضبط عندما يكون اختبار الأمصال المقترنة ضروريًا في الإصابة بفيروس نقص المناعة البشرية.

قد تعكس التفاعلات الإيجابية مع بروتينات gag وpol دون تفاعل مع بروتينات env الانقلاب المصلي المبكر وقد تشير أيضًا إلى الإصابة بفيروس نقص المناعة البشرية -2 أو تفاعل غير محدد. يتم إعادة اختبار الأفراد الذين حصلوا على هذه النتائج بعد اختبار فيروس نقص المناعة البشرية -2 بعد 3 أشهر (خلال 6 أشهر).

السمات المميزة:

• تحتوي مجموعة الكواشف "MPBA - Blot -HIV-1,HIV-2" على بروتينات فيروسية منقاة من فيروس نقص المناعة البشرية 1 والببتيد - المحدد المستضدي gp36 لفيروس نقص المناعة البشرية-2؛
• يوفر الكشف عن الأجسام المضادة لفيروس نقص المناعة البشرية-1، فيروس نقص المناعة البشرية-1 المجموعة O، فيروس نقص المناعة البشرية 2 على شريط واحد؛
• إجراء بسيط لإعداد وإجراء الاختبارات؛
• مراقبة جودة التفاعل الداخلي*
• السرعة القصوىإجراء التحليل (3 ساعات)؛
• حجم صغير من عينة الاختبار - 20 ميكرولتر؛
• لا يتطلب معدات إضافيةللبحث؛
• يتم ضمان جودة المجموعة من خلال استخدام العينات القياسية الروسية والدولية**

* يتم ضمان مراقبة الجودة الداخلية من خلال وجود:

• شرائط التحكم الداخلية، توفر التحكم في إدخال عينة المصل أو البلازما؛
• السيطرة على المصل السلبي (K-) ؛
• التحكم في المصل الإيجابي (K+)، والذي يسمح بتحديد النطاقات المكتشفة على الشريط؛
• التحكم في المصل الإيجابي الضعيف (K+cl)، والذي يوفر التحكم في حساسية مجموعة الكاشف.

**تاكيد الجودة:

تم تحديد خصائص مجموعة كاشف "MPBA-Blot-HIV-1,HIV-2" عن طريق اختبار عينات من عينة عشوائية من المتبرعين، وتشخيص المرضى عدوى فيروس نقص المناعة البشريةولوحات التحويل المصلي التجارية، واللوحات القياسية، والعينات التي تحتوي على مكونات "يحتمل أن تتداخل".

لا توفر مجموعة الكاشف نتائج إيجابية كاذبةعند دراسة الأمصال القياسية التي لا تحتوي على أجسام مضادة لفيروس نقص المناعة البشرية 1.2 ومستضد فيروس نقص المناعة البشرية -1 ("AT (-) معيار فيروس نقص المناعة البشرية"، رقم FSR 2007/00953 بتاريخ 2007/10/25). الخصوصية - 100%.

تم تحديد خصوصية التشخيص من خلال دراسة عينة عشوائية من 200 متبرع من مراكز وعيادات الدم المختلفة مع عدم وجود عدوى بفيروس نقص المناعة البشرية (HIV-1) وفيروس نقص المناعة البشرية (HIV-2) المؤكدة مسبقًا. كانت الخصوصية عند دراسة عينة عشوائية من المتبرعين 100%؛

وتم تحديد خصوصية مجموعة الكاشف من خلال اختبار 250 عينة، بما في ذلك عينات المصل أو البلازما التي تم الحصول عليها من النساء الحوامل، والمرضى في المستشفيات، والمرضى المصابين بالتهاب الكبد الوبائي C وE، والعينات التي تحتوي على مكونات "يحتمل أن تتداخل". عند استخدام مجموعة MPBA-Blot-HIV-1,HIV-2 لهذه العينات، لم يتم اكتشاف أي نتائج إيجابية كاذبة.

تم تحديد الحساسية التشخيصية باستخدام:
- عينات البلازما من لوحة Boston Biomedica, Inc فيروس نقص المناعة البشرية-1 (WWRB 301) من مناطق مختلفة تحتوي على أنواع فرعية مختلفة من فيروس نقص المناعة البشرية-1: المجموعة M (الأنواع الفرعية A، B، C، D، E، F)، والمجموعة O؛ وكانت حساسية مجموعة الكاشف 100%؛

تم تحديد حساسية مجموعة الكاشف في دراسة أجريت على لوحات التحويل المصلي الدولية Boston Biomedica, Inc (SeraCare Life Sciences)، قطة. nrs. PRB 903، PRB 904، PRB 909، PRB 912، PRB 916، PRB 917، PRB 918، PRB 919، PRB 921، PRB 923، PRB 924، PRB 927، PRB 928، PRB 932، PRB 940.

تكتشف مجموعة الكواشف الأجسام المضادة لفيروس نقص المناعة البشرية-1 في أمصال لوحة قياسية تحتوي على أجسام مضادة لفيروس نقص المناعة البشرية-1 ("AT (+) معيار فيروس نقص المناعة البشرية-1"، رقم FSR 2007/00953 بتاريخ 25 أكتوبر 2007)، وتكتشف الأجسام المضادة لفيروس نقص المناعة البشرية-1. فيروس نقص المناعة البشرية-2 في الأمصال القياسية التي تحتوي على أجسام مضادة لفيروس نقص المناعة البشرية-2 ("AT (+) معيار فيروس نقص المناعة البشرية-2"، رقم FSR 2007/00953 بتاريخ 25 أكتوبر 2007). الحساسية - 100%.

شهادة التسجيل رقم FSR 2010/07958 بتاريخ 13 يوليو 2011 (صلاحية غير محدودة)

مُجَمَّع:

• مناعي. شرائط غشاء النيتروسليلوز أبيضمع بروتينات فيروس نقص المناعة البشرية-1 الفردية (gp160، gp120، p66، p55، p51، gp41، p31، p24، p17) الممتصة عليها عن طريق النقل الكهربائي وتطبيقها على الشريط باستخدام ببتيد فيروس نقص المناعة البشرية-2 الاصطناعي، وهو نظير لبروتين gp36 و IgG المضاد للإنسان (التحكم الداخلي) - 18 قطعة ؛
• ك- - السيطرة على المصل السلبي. يتم تعطيل مصل الدم البشري الذي لا يحتوي على أجسام مضادة لفيروس نقص المناعة البشرية 1،2، وفيروس التهاب الكبد الوبائي، ومستضد فيروس نقص المناعة البشرية، HBsAg، عن طريق التسخين عند درجة حرارة 560 درجة مئوية؛ سائل أصفر فاتح شفاف - أنبوب اختبار واحد (0.08 مل). يحتوي على مواد حافظة: الثيميروسال وأزيد الصوديوم.
• K+ - السيطرة على المصل الإيجابي. مصل الدم البشري الذي يحتوي على أجسام مضادة لفيروس نقص المناعة البشرية -1،2 (عيار لا يقل عن 1: 10000)، ولا يحتوي على HBsAg، ومستضد فيروس نقص المناعة البشرية، والأجسام المضادة لفيروس التهاب الكبد الوبائي، يتم تعطيله عن طريق التسخين عند درجة حرارة 560 درجة مئوية؛ سائل أصفر فاتح شفاف - أنبوب اختبار واحد (0.08 مل) يحتوي على مواد حافظة: الثيميروسال وأزيد الصوديوم؛
• K+sl - التحكم في المصل الإيجابي الضعيف. مصل الدم البشري الذي يحتوي على أجسام مضادة لفيروس نقص المناعة البشرية -1،2 (عيار لا يزيد عن 1: 200)، ولا يحتوي على HBsAg، ومستضد فيروس نقص المناعة البشرية، والأجسام المضادة لفيروس التهاب الكبد الوبائي، يتم تعطيله عن طريق التسخين عند درجة حرارة 560 درجة مئوية؛ سائل أصفر فاتح شفاف - أنبوب اختبار واحد (0.08 مل). يحتوي على مواد حافظة: الثيميروسال وأزيد الصوديوم.
• RPOKk (x10) - محلول لتخفيف العينات والمقترنة. مركز - عازل تريس يحتوي على مصل الماعز الطبيعي المعالج مسبقًا؛ سائل رمادي معتم - 1 زجاجة (10 مل). يحتوي على مادة حافظة: الثيميروسال؛
• PRk (x20) - محلول الغسيل. التركيز - المخزن المؤقت تريس الذي يحتوي على توين-20؛ سائل شفاف عديم اللون - 1 زجاجة (70 مل). يحتوي على مادة حافظة: الثيميروسال؛
• المترافقة. الأجسام المضادة IgG المضادة للإنسان في الماعز مترافقة مع الفوسفاتيز القلوي؛ سائل شفاف عديم اللون - أنبوب اختبار واحد (0.06 مل)؛
• الركيزة (محلول التلوين). محلول من 5-برومو-4-فلورو-إندوليل فوسفات (BCIP) ونيتروبلو تيترازوليوم (NBT)؛ سائل أصفر فاتح شفاف - 1 زجاجة (50 مل)؛
• مسحوق للتحصين المناعي. مسحوق الحليب الخالي من الدسم - مسحوق أبيض أو أصفر فاتح غير متبلور - 5 عبوات × 1 جرام؛
• قرص بغطاء لإعداد التفاعل - قطعتان؛
• ملاقط بلاستيكية - 1 قطعة.