Reaktion indirekte Hämagglutination(RIGA).

RIGA wird in zwei Varianten eingesetzt: mit bekannten Antikörpern zum Nachweis von Antikörpern mit bekannten Antikörpern zum Nachweis von Antikörpern. Diese Reaktion ist spezifisch und wird zur Diagnose von durch Bakterien und Rickettsien verursachten Krankheiten verwendet. Zur Durchführung der RIGA wird eine Erythrozytendiagnostik eingesetzt, die je nach Untersuchungszweck durch Adsorption von AG oder AT an Erythrozyten hergestellt wird (Abb. 10.3). In positiven Fällen ist der Grad der Erythrozytenagglutination mit Pluszeichen gekennzeichnet. Vier Pluspunkte bewerten eine Reaktion, die die Form eines dünnen Films aus klebrigen roten Blutkörperchen (Regenschirm) hat, der den Boden des Reagenzglases bedeckt; Das Vorhandensein einer Folie mit überbackenen Spitzenkanten wird durch zwei Pluspunkte angezeigt. Als Titer gilt die maximale Verdünnung des Untersuchungsmaterials, die eine Agglutination der Erythrozyten um zwei Pluspunkte verursachte.

Reis. 10.3.

1 - rote Blutkörperchen, 2 - Erythrozyten AG, 3 - konjugiertes AG, 4-AT

RHA und Hämagglutinationshemmungsreaktion (HAI).

Wie bereits erwähnt, basiert RHA auf der Fähigkeit von Erythrozyten, zusammenzukleben, wenn bestimmte Antigene an ihnen adsorbiert werden. Als Testmaterial für die Hämagglutination werden Allantois- und Fruchtwasser, eine Suspension von Chorion-Allantois-Membranen von Hühnerembryonen, Suspensionen und Extrakte aus Kulturen oder Organen von mit Viren infizierten Tieren sowie natives infektiöses Material verwendet. RGA ist keine serologische Reaktion, da sie ohne Beteiligung von Immunserum auftritt und zur Auswahl der Arbeitsverdünnung eines Antigens für die Bestimmung einer RGA oder des Vorhandenseins eines Antigens (Virus) im Testmaterial (z. B. bei Influenza) verwendet wird ). Bei der Reaktion werden rote Blutkörperchen von Tieren, Vögeln und Menschen der Blutgruppe I (0) verwendet. Um eine ungefähre RGA festzulegen, werden ein Tropfen einer 5 %igen Erythrozytensuspension und ein Tropfen des Testmaterials auf einen Glasobjektträger aufgetragen und gründlich gemischt. Bei positivem Ergebnis wird makroskopisch nach 1-2 Minuten das Auftreten einer flockigen Agglutination der Erythrozyten beobachtet. Um RGA in einer entfalteten Reihe aufzustellen, werden doppelt steigende Verdünnungen des Testmaterials in physiologischer Lösung in einem Volumen von 0,5 ml in den Vertiefungen von Polystyrolplatten hergestellt. In alle Reagenzgläser werden 0,5 ml einer 0,25-1 %igen Suspension roter Blutkörperchen gegeben. Die Ergebnisse werden nach vollständiger Sedimentation der Erythrozyten in der Kontrolle (rote Blutkörperchen + Kochsalzlösung) berücksichtigt. Die Reaktion wird durch die Beschaffenheit des Erythrozytensediments berücksichtigt. In positiven Fällen wird der Grad der Agglutination mit Pluszeichen gekennzeichnet. Eine Reaktion, die wie ein dünner Film aus klebrigen roten Blutkörperchen aussieht, der den Boden eines Reagenzglases (Regenschirms) bedeckt, wird mit vier Pluspunkten bewertet; eine Reaktion mit Lücken im Film wird mit drei Pluspunkten gekennzeichnet; Ränder klebriger roter Blutkörperchen sind mit zwei Pluspunkten gekennzeichnet; ein flockiges Sediment roter Blutkörperchen, umgeben von einer Zone verklumpter Erythrozyten, entspricht einem Pluspunkt. Ein scharf abgegrenzter Erythrozytensediment, der von der Kontrolle nicht zu unterscheiden ist, weist auf das Fehlen einer Agglutination hin. Als Titer gilt die maximale Verdünnung des Untersuchungsmaterials, die eine Agglutination der Erythrozyten um zwei Pluspunkte verursachte. Wenn das RGA-Ergebnis positiv ist, wird die Studie fortgesetzt, wobei der Typ des isolierten Virus mithilfe von RT GA mit typspezifischen Seren bestimmt wird. RTGA basiert auf der Eigenschaft des Antiserums, die virale Hämagglutination zu unterdrücken, da das durch spezifische Antikörper neutralisierte Virus die Fähigkeit verliert, rote Blutkörperchen zu agglutinieren. Zur vorläufigen Typisierung von Viren wird die Tröpfchenmethode auf Glas verwendet. Um den Typ des isolierten Virus endgültig zu bestimmen und die Antikörper in den Seren zu titrieren, wird ein erweiterter Röntgentest in Reagenzgläsern oder Vertiefungen durchgeführt. Zu diesem Zweck werden zweifache Verdünnungen von Seren in physiologischer Lösung hergestellt und in 0,25 ml abgefüllt. Zu den Serumverdünnungen einen Tropfen virushaltiges Material und einen Tropfen einer 1 %igen Suspension roter Blutkörperchen hinzufügen. Bei der Verwendung von RTGA zur Bestimmung des Virustyps werden typspezifische Seren verwendet, die einem gleichen Volumen der Arbeitsverdünnung von AG zugesetzt werden. Der Typ des isolierten Virus wird durch das spezifische Immunserum bestimmt, das den höchsten Antikörpertiter gegen dieses Virus aufweist. RGA und RTGA werden häufig für die Diagnose verwendet Virusinfektionen (durch Zecken übertragene Enzephalitis, Influenza usw.), um spezifische Antikörper nachzuweisen und viele Viren anhand ihrer Antikörper zu identifizieren.

Diese Reaktionen werden genannt indirekt (passiv), da sie Ag (oder AT) verwenden, das künstlich auf der Oberfläche verschiedener korpuskulärer Partikel sorbiert wird.

Indirekte oder passive Hämagglutinationsreaktion (RNGA, RPGA) ist eine der empfindlichsten serologischen Reaktionen. Es basiert auf der Fähigkeit von AT, mit auf verschiedenen roten Blutkörperchen fixiertem Ag zu interagieren, das dann agglutiniert. Für eine höhere Stabilität des Diagnostikums werden rote Blutkörperchen formalinisiert.

Reverse RNGA wird zum Nachweis von Ag im Blutserum verwendet; Zu diesem Zweck wird nicht Ag, sondern AT auf Erythrozyten fixiert. Reaktionen dieser Art werden häufig zur Diagnose von Infektionskrankheiten, zur Feststellung einer Schwangerschaft und zum Nachweis eingesetzt Überempfindlichkeit zu Medikamenten usw.

Bremsreaktion passive Hämagglutination (RTPGA) - weitere Entwicklung RNGA; steuert gewissermaßen seine Spezifität. Im Gegensatz zu RNGA, umfasst drei Komponenten; Ag, AT und Ag (AT) werden an Erythrozyten adsorbiert. Zunächst reagiert Ag mit AT (Standard-Antiserum), dann werden der Mischung Erythrozyten zugesetzt, die mit demselben Ag (oder AT) sensibilisiert sind. Wenn während der Wechselwirkung von Ag mit AT kein freies AT (oder Ag) im System verbleibt, wird keine Agglutination des Erythrozytendiagnostums beobachtet.

Die Reaktion dient dem Nachweis von Krankheitserregerantigenen im Testmaterial durch Zugabe von Immunserum. In Gegenwart eines homologen Antigens binden Antikörper, daher kommt es nach Zugabe von durch das Antigen sensibilisierten Erythrozyten nicht zu deren Agglutination, was als bewertet wird positives Ergebnis. Um die Reaktion empfindlicher zu machen, wird dem Testmaterial in einer minimalen Menge (2 hämagglutinierende Einheiten) spezifisches Immunserum zugesetzt. Der Immunserumtiter wird zunächst mittels RNGA bestimmt. Eine hämagglutinierende Einheit ist die maximale Verdünnung des Serums, die zum Zusammenkleben der roten Blutkörperchen führt.

Methodik. Geben Sie 0,025 ml einer 1 %igen Lösung von normalem Kaninchenserum in die Vertiefungen von Polystyrolplatten oder Agglutinationsröhrchen und stellen Sie zweifache Verdünnungen des Testmaterials her. Anschließend werden 0,025 ml Immunserum in alle Vertiefungen gegeben, die Platte geschüttelt und 30 Minuten bei einer Temperatur von 37 °C oder 1 Stunde bei 37 °C belassen Zimmertemperatur. Anschließend 0,025 ml Antigendiagnostik in alle Vertiefungen geben, schütteln und 2 Stunden stehen lassen, danach werden die Ergebnisse berücksichtigt.

Bei der Durchführung dieser Reaktion wird der Kontrolle für RNHA eine Immunserumspezifitätskontrolle hinzugefügt, die aus einem spezifischen Antigen, Immunserum (2, 1, 0,5 hämagglutinierende Einheiten) und einer Suspension sensibilisierter Erythrozyten besteht.

RTNGA wird auch zum Nachweis spezifischer Antikörper (vollständige und blockierende) verwendet, wofür dem Testserum eine dosierte Menge Antigen zugesetzt wird. Wenn es Antikörper enthält, werden diese durch das Antigen gebunden, daher kommt es nach Zugabe von durch Antikörper sensibilisierten Erythrozyten (2. Stufe von RTNGA) nicht zu einem Zusammenkleben der Erythrozyten.

Dank der Verwendung mindestens hinzufügen Antigen (2 neutralisierende Dosen) ist die Reaktion hochempfindlich. Die Anzahl der neutralisierenden Dosen im Antigenpräparat wird unter Verwendung von RNGA bestimmt, während serielle 2-fache Verdünnungen des Antigens in einer 1 %igen Lösung von normalem Kaninchenserum hergestellt werden und ein Antikörper-Erythrozyten-Diagnostum in die Vertiefungen gegeben wird. Als neutralisierende Dosis des Antigens gilt seine maximale Verdünnung, die eine vollständige Adhäsion sensibilisierter Erythrozyten ermöglicht.

Vor der Reaktion werden die Testseren 1:5-1:10 verdünnt und bei einer Temperatur von 56°C für 30 Minuten inaktiviert. Zur Adsorption von Hämagglutininen wird dem Serum eine 50 %ige Suspension formalinisierter oder frisch gewaschener Schaferythrozyten in einer Menge von 0,1 ml Suspension pro 1 ml verdünntem Serum zugesetzt. Die Mischung wird geschüttelt und 30 Minuten lang bei 37 °C oder 1 Stunde lang bei Raumtemperatur inkubiert. Anschließend werden die roten Blutkörperchen durch Zentrifugation ausgefällt. Sie können das Serum bis zum nächsten Tag im Kühlschrank aufbewahren, um die roten Blutkörperchen zu sedimentieren.

Bei der Durchführung eines Experiments wird das Testmaterial in einer 1 %igen Lösung von normalem Kaninchenserum in einem Volumen von 0,025 ml in den Vertiefungen einer Mikrotiterplatte verdünnt. Anschließend werden in jede Vertiefung 2 neutralisierende Antigendosen in einem Volumen von 0,025 ml gegeben. Die Platten werden geschüttelt und 30 Minuten bei 37 °C oder 1 Stunde bei Raumtemperatur belassen. Anschließend werden in alle Vertiefungen 0,025 ml Antikörper Erythrozytendiagnostik gegeben. Die Platten werden geschüttelt und 1,5–2 Stunden bei Raumtemperatur inkubiert, danach werden die Reaktionsergebnisse berücksichtigt. Die Abrechnung kann auch am nächsten Tag erfolgen. Als Titer des Testserums gilt die maximale Verdünnung, bei der die roten Blutkörperchen nicht zusammenkleben.

Erfahrung begleitet die folgenden Typen Kontrolle:

1) Stabilität sensibilisierter Erythrozyten (Erythrozyten + 1 %ige Lösung von normalem Kaninchenserum);

2) Vollständigkeit der Hämagglutinin-Depletion in jedem Testserum (Testserum in geringste Verdünnung+ formalinisierte rote Blutkörperchen);

3) die Richtigkeit der Bestimmung der minimalen neutralisierenden Dosis des Antigens (2, 1 und 0,5 neutralisierende Dosis des Antigens + Antikörper-Erythrozyten-Diagnostik).

Die umgekehrte indirekte Hämagglutinationsreaktion (Ronga) wird zum Nachweis bakterieller und viraler Antigene in Testmaterialien sowie zur schnellen Diagnose einer Reihe von Infektionen eingesetzt.

Im Gegensatz zu RNGA werden die roten Blutkörperchen bei dieser Reaktion nicht durch Antigen, sondern durch Antikörper sensibilisiert, deren Agglutination bei Zugabe des Antigens auftritt.

Rote Blutkörperchen werden mit Formaldehyd oder Glutaraldehyd vorfixiert und dann an Gammaglobulin gebunden, das aus Immunseren isoliert und von anderen Serumproteinen gereinigt wird. Die Bindung von Gammaglobulin an die Oberfläche roter Blutkörperchen erfolgt mit Hilfe von Chromchlorid. Dazu 1 Volumenteil aus Immunserum isolierte Immunglobuline, 1 Volumenteil einer 50 %igen Suspension formalinisierter Erythrozyten und 1 Volumenteil 0,1-0,2 %ige Chromchloridlösung zu 8 Volumenteilen destilliertem Wasser hinzufügen. Die Mischung wird 10–15 Minuten bei Raumtemperatur belassen, dann werden die roten Blutkörperchen wie bei der passiven Hämagglutinationsreaktion behandelt.

Die Spezifität des Antikörperdiagnostikums wird in der Reaktion der Hemmung der passiven Hämagglutination durch ein homologes Antigen überprüft. Die Reaktion muss durch ein homologes Antigen mindestens 16-mal gehemmt werden und darf nicht durch ein heterologes Antigen gehemmt werden. Um sicherzustellen, dass keine spontane Hämagglutination auftritt, wird eine Kontrolle durchgeführt.

Mit dieser Reaktion werden Krankheitserreger in entnommenem Organmaterial nachgewiesen tote Menschen und Tiere, zum Beispiel aus Gehirn, Milz, Leber und Lunge. Bereiten Sie eine 10 %ige Suspension dieser Organe in einer isotonischen Natriumchloridlösung vor, zentrifugieren Sie sie 30–60 Minuten lang bei 10.000 U/min und verwenden Sie den Überstand als Antigen.

Methodik. Bereiten Sie 2-fache Verdünnungen des Testmaterials (Antigen) in einer Stabilisierungslösung vor. Geben Sie 1 Tropfen jeder Antigenverdünnung in drei benachbarte Vertiefungen des Mikropanels (die Reaktion nimmt 3 parallele Vertiefungsreihen ein). Geben Sie 1 Tropfen Stabilisierungslösung in jede Vertiefung der ersten Reihe, 1 Tropfen homologes Immunserum verdünnt 1:10 in die Vertiefungen der zweiten Reihe und 1 Tropfen heterologes Immunserum in die dritte Reihe. Die zweite und dritte Reihe dienen als Kontrollen für die Spezifität der Reaktion. Die Mischung wird 20 Minuten bei Raumtemperatur belassen.

1 Tropfen 1 %ige Suspension sensibilisierter Erythrozyten (Erythrozyten-Antikörper-Diagnostik) in alle Vertiefungen geben und die Platten gründlich schütteln. Die Reaktionsergebnisse werden nach 30-40 Minuten berücksichtigt. Bei Vorhandensein eines spezifischen Antigens wird Hämagglutination in der ersten und dritten Reihe (mit heterologem Serum) beobachtet und fehlt in der zweiten Reihe, wo das Antigen zuvor mit homologem Serum neutralisiert wurde.

Begleitet wird die Reaktion von Kontrollen sensibilisierter Erythrozyten zur spontanen Agglutination.

Umgekehrte indirekte Hämagglutinationshemmungsreaktion (RTONGA) ermöglicht die Bestimmung des Vorhandenseins von Antikörpern in den Seren von Menschen und Tieren.

Methodik. Die Seren werden 10-fach mit einer isotonischen Natriumchloridlösung verdünnt, 20 Minuten lang auf eine Temperatur von 65 °C erhitzt, um unspezifische Inhibitoren zu zerstören, und dann werden 2-fache Verdünnungen der Seren in einer Stabilisierungslösung und einer Arbeitsdosis hergestellt Antigen mit 4 agglutinierenden Einheiten. Geben Sie 1 Tropfen jeder Serumverdünnung in die Vertiefungen des Mikropanels und fügen Sie 1 Tropfen Antigen hinzu, dessen Verdünnung der Arbeitsdosis entspricht. Nach 20-minütigem Kontakt der Mischungsbestandteile bei Raumtemperatur 1 Tropfen Erythrozyten-Antikörper-Diagnostikum in alle Vertiefungen geben und gründlich schütteln. Nach 1,5–2 Stunden Inkubation bei Raumtemperatur werden die Reaktionsergebnisse für die Hämagglutination berücksichtigt. Der Serumtiter ist die höchste Verdünnung, die die Hämagglutinationsreaktion mit vier agglutinierenden Antigeneinheiten vollständig hemmt.

Die Reaktion wird begleitet von Kontrollen sensibilisierter Erythrozyten zur spontanen Agglutination in Gegenwart von: a) einer stabilisierenden Lösung; b) normales Antigen (aus Material, das kein Virus enthält); c) Testserum. Der Vorteil der Reaktion liegt in ihrer Vielseitigkeit und der Möglichkeit, damit verschiedene Antigene nachzuweisen.

Auswertung der Hämagglutinationsergebnisse. Die Ergebnisse von RNGA, RONGA und RTONGA werden entsprechend dem Grad der Erythrozytenagglutination berücksichtigt: (++++) – vollständige Agglutination; (+++) – weniger vollständige Agglutination; (++) – teilweise Agglutination; (+) – Spuren von Agglutination; (–) – keine Agglutination.

Die Reaktion gilt als positiv, wenn die Agglutination vollständig (++++) oder fast vollständig (+++) ist, das Diagnostikum in Gegenwart jeder Komponente der Reaktion keine spontane Agglutination ergibt und die Spezifität der Reaktion kontrolliert wird Antigen oder Antikörper ist positiv.

Direkte mikrobielle Agglutinationsreaktion (RA). Bei dieser Reaktion agglutinieren Antikörper (Agglutinine) direkt mit korpuskulären Antigenen (Agglutanogenen). Sie werden meist durch eine Suspension inaktivierter Mikroorganismen dargestellt (mikrobielle Agglutinationsreaktion). Anhand der Art des gebildeten Agglutinats wird zwischen körniger und flockiger Agglutination unterschieden. Granuläre Agglutination tritt auf, wenn Mikroben, die O-Antigen enthalten, zusammenkleben. Bakterien mit Flagellen (H-Antigen) agglutinieren zu großen Flocken.

Zur Bestimmung der Art der Mikroorganismen werden standardmäßige diagnostische Agglutinationsseren verwendet. Sie werden durch Hyperimmunisierung von Labortieren mit einer Bakteriensuspension gewonnen. Der Titer eines solchen Serums ist die höchste Verdünnung, bei der eine deutliche Agglutination des entsprechenden Antigens beobachtet wird. Aufgrund der Komplexität der Antigenstruktur von Bakterien enthalten agglutinierende Seren jedoch nicht nur Antikörper gegen artspezifische, sondern auch gegen Gruppenantigene und können zu einer Gruppenagglutination mit verwandten Bakterienarten führen. Die Antikörpertiter gegen artspezifische Antigene im Serum sind immer höher als gegen Gruppenantigene. Um gruppenspezifische Antikörper zu entfernen, werden dem Serum nacheinander Mikroorganismen zugesetzt, darunter: Gruppenantigene(Castellani-Methode). Bei dieser Methode entstehen adsorbierte Seren, die Antikörper gegen enthalten ein bestimmter Typ Mikrobe

Methoden der Agglutinationsreaktion. Am häufigsten sind lamelläre (ungefähre) und erweiterte RA.

Die Platte RA wird auf das Glas gelegt. Bei dieser Reaktion werden leicht verdünnte oder unverdünnte Seren verwendet. Benutze es als beschleunigte Methode Nachweis von Antikörpern oder Identifizierung von Mikroorganismen. Ein Tropfen Serum wird auf das Glas aufgetragen, in das eine unbekannte Bakterienkultur mit einer Öse eingeführt, gemischt und nach 2-3 Minuten das Auftreten einer feinkörnigen oder flockigen Agglutination beobachtet wird. Zur Kontrolle dient ein Tropfen Kochsalzlösung, bei dem nach dem Einbringen von Bakterien eine Trübung beobachtet wird. Bei der Verwendung nicht adsorbierter Seren ist die Reaktion auf Glas nur ein Hinweis.

Expandierte RA wird in Reagenzgläsern oder Plattenvertiefungen durchgeführt. In diesem Fall wird das diagnostische Serum auf den Titer verdünnt und gleiche Mengen Antigen hinzugefügt. Bei einem positiven Ergebnis bildet sich ein lockerer Bodensatz in Form eines „Regenschirms“ am Boden des Reagenzglases; bei einem negativen Ergebnis bildet sich ein Bodensatz in Form eines „Knopfes“. Da die Titer gruppenspezifischer Antikörper im Serum viel niedriger sind als die Titer speziesspezifischer Antikörper, werden Gruppenreaktionen nur in kleinen Serumverdünnungen beobachtet. Tritt eine Agglutination vor dem Titer oder bis zur Hälfte des Serumtiters auf, ist dies artspezifisch.

Zur Bestimmung von Antikörpern im Serum des Patienten (serologische Diagnostik) wird ein Standard-Mikrobendiagnostikum verwendet, das eine Suspension bekannter Mikroben oder deren Antigene enthält. In diesem Fall ist es auch möglich, Platte und entfaltetes RA zu installieren.

Direkte Zellagglutinationsreaktion. Zur Blutgruppenbestimmung werden Standard-Spenderblutseren verwendet, die bekannte Anti-A- oder Anti-B-Antikörper enthalten. Reaktionen werden auf Glas oder Platten durchgeführt. Wenn die Erythrozyten A (2. Blutgruppe), B (3. Blutgruppe) oder beide Antigene (4. Blutgruppe) aufweisen, verklumpen die entsprechenden Seren die Erythrozyten. Außerdem kommt ein Blutverträglichkeitstest zum Einsatz, bei dem Blutstropfen von Spender und Empfänger gemischt und die Agglutination beurteilt wird.

Kliniken nutzen die Agglutinationsreaktion von Leukozyten, Blutplättchen und anderen Zellen zur Identifizierung von Autoantikörpern sowie zur Bestimmung von Antigenen auf diesen Zellen.

Die Hämagglutinationsreaktion beruht auf dem Phänomen der Verklebung roter Blutkörperchen, die unter dem Einfluss verschiedener Faktoren auftritt. Es gibt direkte und indirekte Hämagglutination.
Bei der direkten Hämagglutinationsreaktion verkleben rote Blutkörperchen, wenn bestimmte Antigene, beispielsweise Viren, an ihnen adsorbieren.

Indirekte (passive) Hämagglutinationsreaktion (IRHA, RPHA) basiert auf der Verwendung von Erythrozyten (oder Latex) mit an ihrer Oberfläche adsorbierten Antigenen oder Antikörpern, deren Wechselwirkung mit den entsprechenden Antikörpern oder Antigenen des Blutserums des Patienten dazu führt, dass die Erythrozyten zusammenkleben und auf den Boden des Blutes fallen Reagenzglas oder Küvette in Form eines gewellten Sediments.

Komponenten. Zur Durchführung von RNGA können Erythrozyten von Schafen, Pferden, Kaninchen, Hühnern, Mäusen, Menschen und anderen verwendet werden, die durch Behandlung mit Formaldehyd oder Glutaraldehyd für die zukünftige Verwendung gespeichert werden. Die Adsorptionsfähigkeit von Erythrozyten erhöht sich, wenn sie mit Tannin- oder Chromchloridlösungen behandelt werden.

Antigene in RNGA können als Polysaccharid-Antigene von Mikroorganismen, Extrakte aus bakteriellen Impfstoffen, Antigene von Viren und Rickettsien sowie anderen Substanzen dienen.

Durch Bluthochdruck sensibilisierte rote Blutkörperchen werden Erythrozytendiagnostika genannt. Zur Herstellung von Erythrozytendiagnostika werden am häufigsten Schaferythrozyten verwendet, die eine hohe Adsorptionsaktivität aufweisen.

Anwendung. RNGA wird zur Diagnose von Infektionskrankheiten, zur Bestimmung des gonadotropen Hormons im Urin bei der Feststellung einer Schwangerschaft und zur Feststellung einer erhöhten Empfindlichkeit gegenüber verwendet Medikamente, Hormone und in einigen anderen Fällen.

In serologischen Studien wird eine direkte Hämagglutinationshemmungsreaktion eingesetzt, bei der das aus einem Patienten isolierte Virus mit spezifischem Immunserum neutralisiert und dann mit roten Blutkörperchen kombiniert wird. Das Fehlen einer Hämagglutination weist auf die Konsistenz des Virus und des verwendeten Immunserums hin.

Die indirekte Hämagglutinationsreaktion (passive Hämagglutination) wird beobachtet, wenn Immunserum oder Patientenserum, das entsprechende Antikörper enthält, roten Blutkörperchen zugesetzt wird, die zuvor mit verschiedenen Antigenen behandelt (sensibilisiert) wurden. Es kommt zu einer spezifischen Verklebung der roten Blutkörperchen, ihrer passiven Hämagglutination.

Die indirekte oder passive Hämagglutinationsreaktion ist anderen serologischen Methoden in Sensitivität und Spezifität überlegen und wird zur Diagnose von Infektionen durch Bakterien, Rickettsien und Protozoen eingesetzt.

Die Methode zur Durchführung einer indirekten Hämagglutinationsreaktion besteht aus mehreren Schritten.

· Zunächst werden die roten Blutkörperchen mit einer isotonischen Natriumchloridlösung gewaschen, anschließend bei Bedarf (bei Verwendung von Proteinantigenen) mit einer Tanninlösung 1:20.000 behandelt und mit löslichen Antigenen sensibilisiert.

· Nach dem Waschen mit einer gepufferten isotonischen Natriumchloridlösung ist das Erythrozytenantigen gebrauchsfertig.

· Die Testseren werden mit einer isotonischen Natriumchloridlösung in Reagenzgläsern oder speziellen Kunststoffplatten mit Vertiefungen verdünnt, anschließend wird jeder Verdünnung des Serums ein Erythrozytendiagnostikum zugesetzt.

· Die Ergebnisse der indirekten Hämagglutinationsreaktion werden durch die Art des Sediments der roten Blutkörperchen berücksichtigt, das sich am Boden des Reagenzglases bildet.

· Ein Reaktionsergebnis, bei dem rote Blutkörperchen gleichmäßig den gesamten Boden des Reagenzglases bedecken, gilt als positiv. Bei einer negativen Reaktion befinden sich rote Blutkörperchen in Form einer kleinen Scheibe oder eines „Knopfes“ in der Mitte des Bodens des Reagenzglases.

· Nach 2 Stunden Inkubation bei 37 °C werden die Ergebnisse berücksichtigt und ausgewertet Aussehen Sediment von Erythrozyten (ohne Schütteln): Bei einer negativen Reaktion erscheint ein Sediment in Form einer kompakten Scheibe oder eines Ringes am Boden der Vertiefung, mit positive Reaktion- charakteristisches Spitzensediment aus Erythrozyten, ein dünner Film mit unebenen Rändern

Koagglutinationsreaktion.

Diese Reaktion basiert auf einzigartiges Anwesen Staphylococcus aureus, dessen Zellwand Protein A enthält, bindet an die Fc-Fragmente von IgG und IgM.

In diesem Fall bleiben die aktiven Zentren der Antikörper frei und können mit spezifischen Determinanten von Antigenen interagieren. Ein Tropfen einer 2 %igen Staphylokokkensuspension, die mit geeigneten Antikörpern sensibilisiert ist, wird auf einen Glasobjektträger aufgetragen und mit einem Tropfen einer Suspension der untersuchten Bakterien versetzt. Bei Übereinstimmung des Antigens mit den Antikörpern kommt es innerhalb von 30-60 s zu einer deutlichen Agglutination der mit Antikörpern beladenen Staphylokokken.

Anforderungen an das zur Sensibilisierung von Staphylokokkenzellen verwendete Immunserum und die Durchführung des Sensibilisierungsprozesses. Um ein koagglutinierendes Reagenz zu erhalten, sollte eine Staphylokokkensuspension mit Immunserum gegen das gewünschte Antigen behandelt werden. Das Serum muss einem Tier entnommen werden, dessen IgG eine Affinität zu Protein A aufweist. Die größte Affinität dazu haben die Immunglobuline von Menschen, Schweinen, Hunden und Meerschweinchen, die geringste – Esel und Kaninchen, und das IgG von Schafen, Pferden, Ratten und Mäuse interagieren nur sehr schwach damit.

Zusätzlich zur strengen Spezifität für das gewünschte Antigen sollte das bei RCOA verwendete Serum keine Antikörper gegen Staphylokokken enthalten, um eine Agglutination des Staphylokokken-Reagenzes aufgrund der spezifischen Wirkung des Antigens und der Antikörper zu vermeiden, die im IgG-Protein ausgeschlossen werden sollten Ein System. Die Kontrolle erfolgt durch Mischen eines Tropfens Serum und einer 10 %igen Staphylokokken-Reagenssuspension auf einem Glas. Bilden sich nach 3...5 Minuten keine Agglutinatflocken, gilt das Serum als für die Reaktion geeignet.

Wenn die verfügbaren Serumproben dieses Antigens Staphylokokken agglutinieren, können sie von einer Suspension von Staphylokokkenzellen adsorbiert werden, die kein Protein A enthalten (z. B. Wood-46-Stämme). Auf diese Weise werden Antikörper entfernt, die aufgrund von Fab-Fragmenten mit Staphylokokken reagieren.

Daher muss das zur Herstellung des Gerinnungsreagenzes verwendete Serum die folgenden Anforderungen erfüllen:

• gewonnen von einem produzierenden Tier, dessen IgG eine Affinität zu Protein A aufweist;
• muss eine Spezifität für das gewünschte Antigen aufweisen;
• frei von Anti-Staphylokokken-Antikörpern sein.

· Vorbereitung des Diagnostums. Das vorbereitete 10 %ige Staphylokokken-Reagenz wird mit einem gleichen Volumen Immunserum in der zuvor ermittelten optimalen Arbeitsverdünnung kombiniert. Die Mischung wird 60 Minuten lang bei 40...42 °C in einer Shutgel-Apparatur mit 90 Vibrationen pro Minute geschüttelt. Anschließend werden sie nach 15 Minuten zweimal mit PBS gewaschen, zu einer 2 %igen Suspension resuspendiert und mit Natriummerthiolat (1:10.000) konserviert.

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Agglutinationsreaktionen basieren auf der Wechselwirkung eines Reagenzes (Antikörper) mit Antigenen, die sich auf der Oberfläche von Zellen oder Fremdpartikeln befinden. Dadurch bilden sich große Aggregate, die ausfallen und bereits mit bloßem Auge erkennbar sind. Auf diese Weise wird die Blutgruppe anhand des ABO-Systems, des Vorhandenseins des Rh-Faktors usw. bestimmt. Dies ist eine empfindlichere Diagnosemethode im Vergleich zu Fällungsreaktionen, da das Sedimentvolumen (Agglutinat) das Volumen von übersteigt Präzipitat.

Direkte Hämagglutination

Die direkte Hämagglutinationsreaktion (DHR) dient dem Nachweis von Oberflächenantigenen von Mikroorganismen und roten Blutkörperchen sowie von Antikörpern dagegen.
ZU Standard-Seren Antikörper enthalten, wird das Testmaterial (Blut) hinzugefügt. Die Geschwindigkeit der direkten Agglutinationsreaktion hängt von der Menge des zu testenden Materials, der Menge und Konzentration des Serums sowie der Umgebungstemperatur ab.

Indirekte Hämagglutination

Die indirekte Hämagglutinationsreaktion dient dem Nachweis von Antikörpern im Blut des Patienten mithilfe eines Erythrozytendiagnostikums. Das Reagenz besteht aus roten Blutkörperchen, auf deren Oberfläche sich ein Antigen (Proteine ​​von Mikroorganismen, Toxine, Allergene usw.) befindet.
Das Blutserum des Patienten wird mit 0,9 %iger Natriumchloridlösung verdünnt, anschließend wird Erythrozytendiagnostum zugegeben und das Ergebnis kontrolliert. Diese hochempfindliche Diagnosemethode weist Antigene bereits in geringen Konzentrationen nach.

Hämagglutinationsreaktion (HRA).

Im Labor kommen zwei Hämagglutinationsreaktionen mit unterschiedlichen Wirkmechanismen zum Einsatz.

Die erste RGA ist serologisch. Bei dieser Reaktion verklumpen rote Blutkörperchen, wenn sie mit entsprechenden Antikörpern (Hämagglutininen) interagieren. Die Reaktion wird häufig zur Bestimmung von Blutgruppen verwendet.

Die zweite RGA ist nicht serologisch. Dabei kommt es nicht zur Adhäsion roter Blutkörperchen

Antikörper, sondern spezielle, von Viren gebildete Stoffe. Beispielsweise verklumpt das Influenzavirus die roten Blutkörperchen von Hühnern und Meerschweinchen, Poliovirus – rote Blutkörperchen von Schafen. Diese Reaktion ermöglicht es, das Vorhandensein eines bestimmten Virus im untersuchten Material zu beurteilen.

Die Reaktion wird in Reagenzgläsern oder auf speziellen Platten mit Vertiefungen durchgeführt. Das auf das Vorhandensein des Virus getestete Material wird mit einer isotonischen Lösung von 1:10 bis 1:1280 verdünnt; 0,5 ml jeder Verdünnung werden mit einem gleichen Volumen einer 1–2 %igen Erythrozytensuspension gemischt. Bei der Kontrolle werden 0,5 ml Erythrozyten mit 0,5 ml gemischt isotonische Lösung. Die Reagenzgläser werden 30 Minuten lang in einen Thermostat gestellt und die Platten 45 Minuten lang bei Raumtemperatur belassen.

Bilanzierung von Ergebnissen. Wenn die Reaktion positiv ist, bildet sich am Boden des Reagenzglases oder der Vertiefung ein Sediment aus roten Blutkörperchen mit gewellten Rändern („Regenschirm“), das den gesamten Boden der Vertiefung bedeckt. Bei einem negativen Ergebnis bilden die roten Blutkörperchen ein dichtes Sediment mit glatten Rändern („Knopf“). In der Kontrolle sollte sich das gleiche Sediment befinden. Die Intensität der Reaktion wird durch „+“-Zeichen ausgedrückt.

Hämagglutinationsreaktion

Der Virustiter ist die maximale Verdünnung des Materials, in dem eine Agglutination auftritt.

Hämagglutinationshemmungsreaktion

Das serologische Reaktion, bei dem spezifische antivirale Antikörper, die mit dem Virus (Antigen) interagieren, es neutralisieren und ihm die Fähigkeit nehmen, rote Blutkörperchen zu agglutinieren, d. h. die Hämagglutinationsreaktion zu hemmen. Mit dieser Reaktion können Sie die Art und Art der Viren bestimmen.

Eine Reaktion einrichten. 0,25 ml antivirales Serum werden mit einem gleichen Volumen virushaltigem Material gemischt. Die Mischung wird geschüttelt und 30 Minuten lang in einen Thermostat gestellt. Anschließend werden 0,5 ml einer 1–2 %igen Suspension roter Blutkörperchen zugegeben.

Bilanzierung von Ergebnissen. Bei richtige Positionierung Erfahrung in der Überwachung von Serum und Erythrozyten, es sollte sich ein „Knopf“ bilden – es gibt keinen Erythrozyten-Agglutinationsfaktor; Bei der Antigenkontrolle wird ein „Schirm“ gebildet – das Virus verursacht eine Agglutination der roten Blutkörperchen. Wenn das Serum mit dem untersuchten Virus homolog ist, bildet sich ein „Knopf“ – das Serum hat das Virus neutralisiert.

Indirekte Hämagglutinationsreaktion

Die indirekte (passive) Hämagglutinationsreaktion (RIHA) basiert auf der Tatsache, dass rote Blutkörperchen, wenn ein lösliches Antigen an ihrer Oberfläche adsorbiert wird, durch die Interaktion mit Antikörpern gegen das adsorbierte Antigen die Fähigkeit zur Agglutination erlangen.

Eine Reaktion einrichten. Das Serum wird 30 Minuten lang auf 56 °C erhitzt, nacheinander im Verhältnis 1:10 – 1:1280 verdünnt und in 0,25 ml in Reagenzgläser oder Vertiefungen gegossen, wo sich dann 2 Tropfen rote Blutkörperchen mit daran adsorbierten Antigenen befinden hinzugefügt.

Kontrollen: eine Suspension von Erythrozyten mit daran adsorbierten Antigenen mit offensichtlichem Immunserum, eine Suspension von Erythrozyten mit daran adsorbierten Antigenen mit normalem Serum; Suspension normale rote Blutkörperchen mit dem Testserum. Bei der ersten Kontrolle sollte es zu einer Agglutination kommen, bei der zweiten und dritten Kontrolle sollte es nicht zu einer Agglutination kommen.

Kontrollfragen.

1. Was bedeutet ein positives Röntgenanalyseergebnis zwischen roten Blutkörperchen und dem Material, das auf das Vorhandensein des Virus getestet wird?

2. Kommt es zu einer Agglutinationsreaktion der roten Blutkörperchen, wenn ihnen ein Virus und das entsprechende Serum zugesetzt werden? Wie heißt die Reaktion, die dieses Phänomen offenbart?

PRAKTISCHE ARBEIT Nr. 12.

Komplementfixierungsreaktion.

Die Komplementfixierungsreaktion (FFR) basiert auf der Tatsache, dass ein spezifischer Antigen-Antikörper-Komplex immer Komplement an sich selbst adsorbiert (bindet).

Diese Reaktion wird häufig zur Identifizierung von Antigenen und zur Serodiagnose von Infektionen eingesetzt, insbesondere von Krankheiten, die durch Spirochäten (Wassermann-Reaktion), Rickettsien und Viren verursacht werden.

RKS ist eine komplexe serologische Reaktion. Es handelt sich um Komplement und zwei Antigen-Antikörper-Systeme. Im Wesentlichen handelt es sich dabei um zwei serologische Reaktionen.

Das rechte Hauptsystem besteht aus einem Antigen und einem Antikörper (einer ist bekannt, der andere nicht). Es wird eine gewisse Menge Komplement hinzugefügt. Wenn Antigen und Antikörper dieses Systems übereinstimmen, verbinden sie sich und binden ein Komplement. Der resultierende Komplex ist fein verteilt und nicht sichtbar.

Die Bildung dieses Komplexes wird über ein zweites Hämolyse- oder Indikatorsystem nachgewiesen. Es umfasst rote Blutkörperchen (Antigen) vom Schaf und das entsprechende hämolytische Serum (Antikörper), d. h. fertiger Immunkomplex. In diesem System kann die Lyse roter Blutkörperchen nur in Gegenwart von Komplement erfolgen. Wenn das Komplement vom ersten System gebunden wird, findet im zweiten System keine Hämolyse statt, weil keine kostenlose Ergänzung. Das Ausbleiben einer Hämolyse (der Inhalt des Röhrchens ist trüb oder am Boden befindet sich ein Sediment aus Erythrozyten) wird als positives RSC-Ergebnis erfasst.

Wenn im ersten System das Antigen nicht dem Antikörper entspricht, wird der Immunkomplex nicht gebildet und das Komplement bleibt frei. Da das Kompliment frei bleibt, beteiligt es sich am zweiten System und verursacht eine Hämolyse. Das RSC-Ergebnis ist negativ (der Inhalt der Röhrchen ist transparent – ​​„lackiertes Blut“).

Komponenten, Komplementfixierungsreaktionen:

1. Antigen – normalerweise Lysat, Extrakt, Hapten,

seltener eine Suspension von Mikroorganismen.

2. Antikörper – Serum des Patienten.

3. Komplement – ​​Meerschweinchenserum.

4. Antigen – Schaf-Erythrozyten.

5. Antikörper – Hämolysin gegen Schaferythrozyten.

6. Isotonische Lösung.

Aufgrund der Beteiligung der RSK große Menge komplexe Bauteile,

Sie müssen zunächst titriert und in genauen Mengen und gleichen Volumina in die Reaktion eingebracht werden: 0,5 oder 0,25, seltener 0,2, 1,25 oder 1,0 ml (größere Volumina ergeben ein genaueres Ergebnis). Die Titration der Reaktionskomponenten erfolgt im gleichen Volumen wie das Experiment, wobei die fehlenden Bestandteile durch eine isotonische Lösung ersetzt werden.

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Der indirekte oder passive Hämagglutinationstest (IRHA oder RPHA) ist empfindlicher und spezifischer als der Agglutinationstest. Diese Reaktion wird auch in zwei Richtungen genutzt.

1) Zum Nachweis von Antikörpern im Blutserum des Patienten wird die Erythrozytendiagnostik eingesetzt, bei der das Antigen an der Oberfläche von mit Tannin behandelten Erythrozyten adsorbiert wird. Im Zusammenhang mit dieser Reaktion wird häufiger der Begriff RPGA verwendet.

Das Testserum wird in den Vertiefungen von Kunststoffplatten verdünnt und mit Erythrozytendiagnostik versetzt. Bei einer positiven Reaktion bildet sich entlang der Lochwände ein dünner Film in Form eines „Spitzenschirms“, bei einer negativen Reaktion entsteht ein dichter Erythrozytensediment in Form eines „Knopfes“.

2) Zum Nachweis von Toxinen und bakteriellen Antigenen im Untersuchungsmaterial wird die Antikörper-Erythrozytendiagnostik eingesetzt, die durch Adsorption von Antikörpern an Erythrozyten gewonnen wird. Im Zusammenhang mit dieser Reaktion wird häufiger der Begriff RNGA verwendet. Mit Hilfe der Antikörperdiagnostik werden beispielsweise das Pestbazillus-Antigen, das Diphtherie-Exotoxin und das Botulinum-Exotoxin nachgewiesen.

Was ist ein Erythrozytendiagnostum? Was ist ein Antikörper-Erythrozyten-Diagnostikum?

Erythrozytendiagnostika sind rote Blutkörperchen (behandelt mit Tannin oder Formalin), auf denen aus Bakterien extrahierte Antigene adsorbiert sind, und werden bei RPHA (passive Hämagglutinationsreaktionen) verwendet. Wenn RPGA zum Nachweis von Antigenen in den Sekreten von Patienten, in Geweben usw. verwendet wird, werden „Antikörperdiagnostika“ verwendet, d. h. mit Antikörpern sensibilisierte rote Blutkörperchen.

Beim RNGA werden Blutserumantikörper mithilfe eines antigenen Erythrozytendiagnostums nachgewiesen, bei dem es sich um Erythrozyten mit daran adsorbierten Antigenen handelt.

Methodik zum Einrichten von Reaktionen. Koagglutinationsreaktion.

- Fixierung roter Blutkörperchen mit Formaldehyd oder Glutar- oder Acrylaldehyden. Solche behandelten roten Blutkörperchen werden lange gelagert. Häufiger werden hierfür Erythrozyten von Schafen, Menschen, Hühnern etc. verwendet;
— Behandlung fixierter Erythrozyten mit einer Tanninlösung. Dadurch erlangen rote Blutkörperchen die Fähigkeit, Proteine ​​(Viren und Antikörper) irreversibel an ihrer Oberfläche zu adsorbieren;
- Sensibilisierung tanisierter Erythrozyten durch Viren oder Antikörper.

Koagglutinationsreaktion (CAR)

Die Koagglutinationsreaktion dient der Bestimmung von Antigenen mithilfe von Antikörpern, die an Protein A von Staphylokokkenzellen adsorbiert sind (Antikörperdiagnostik).
Protein A hat eine Affinität zum Fc-Fragment von Immunglobulinen, daher adsorbieren solche mit immundiagnostischem Serum behandelten Bakterien unspezifisch Serumantikörper, die dann mit aktiven Zentren mit den entsprechenden aus Patienten isolierten Mikroben interagieren. Durch die Koagglutination entstehen Flocken bestehend aus Staphylokokken, diagnostischen Serumantikörpern und dem nachgewiesenen Mikroorganismus.

Agglutinierende Seren: was sie enthalten; wie sie gewonnen werden, wofür sie verwendet werden; Wie hoch ist der Titer des agglutinierenden Serums?

Agglutinierendes Serum wird durch Immunisierung von Kaninchen (intravenös, subkutan oder intraperitoneal) mit einer Suspension abgetöteter Bakterien gewonnen, beginnend mit einer Dosis von 200 Millionen, dann 500 Millionen, 1 Milliarde, 2 Milliarden Mikrobenkörperchen in 1 ml, in Abständen von 5 Tagen. 7-8 Tage nach der letzten Immunisierung wird Blut abgenommen und der Antikörpertiter bestimmt.

Der Titer eines agglutinierenden Serums ist die maximale Verdünnung des Serums, bei der eine Agglutination mit dem entsprechenden Mikroorganismus auftritt.

Agglutinierende Seren werden zur Identifizierung von Mikroben in einer umfassenden Agglutinationsreaktion verwendet.

Hämagglutinationsreaktion (HRA)

Wenn der untersuchte Mikroorganismus durch Serum bis zum Titer oder bis zum halben Titerwert agglutiniert, kann davon ausgegangen werden, dass er zu der Art gehört, deren Name auf dem Ampullenetikett angegeben ist.

Was sind die Unterschiede zwischen polyvalenten und monovalenten (Monorezeptor) agglutinierenden Seren? Warum produziert die Immunisierung eines Kaninchens mit Mikroben einer Art Serum, das Antikörper gegen mehrere Antigene enthält?

Monorezeptor-Seren sind Seren, die Antikörper gegen nur ein Antigen enthalten, und polyvalente Seren, die Agglutinationsreaktionen mit zwei oder drei verwandten Bakterien hervorrufen, die ein gemeinsames Antigen haben. Agglutinierende Seren werden zur Identifizierung von Mikroorganismen in einer Agglutinationsreaktion verwendet. Der Nachteil solcher Seren besteht darin, dass sie Gruppenagglutinationsreaktionen hervorrufen können, weil Sie enthalten Antikörper gegen Bakterien, die gemeinsame Antigene haben.

Hämagglutinationsreaktion. Beschreibung und Anwendung

Es basiert auf der Tatsache, dass rote Blutkörperchen, an denen zuvor Antigene adsorbiert wurden, in Gegenwart homologer Seren (Antikörper) die Fähigkeit zur Agglutination erlangen.

Dabei fungieren rote Blutkörperchen als Träger spezifischer Determinanten, deren Agglutination durch die Antigen-Antikörper-Reaktion erfolgt.

Rote Blutkörperchen, an deren Oberfläche Antigene fest haften, werden Erythrozyten-Antigen-Diagnostika oder mit Antigenen sensibilisierte Erythrozyten genannt.

Eine andere Art von RNGA – Antikörper werden an der Oberfläche von Erythrozyten adsorbiert und ihre anschließende Agglutination erfolgt in Gegenwart eines homologen Antigens. In diesem Fall werden solche Erythrozyten Erythrozyten-Antikörper-Diagnostika oder durch Antikörper sensibilisierte Erythrozyten genannt.

Basierend auf diesen beiden grundlegenden methodischen Ansätzen wurden viele Modifikationen des RNGA entwickelt und verwendet. Daher werden als Träger kleine Standardlatexpartikel verwendet. In diesem Fall wird die Reaktion als Latex-Agglutinationsreaktion (RLA) bezeichnet oder eingesetzt Staphylococcus aureus- Koagglutinationsreaktion usw. Normalerweise werden Erythrozytendiagnostika in Unternehmen der biologischen Industrie hergestellt, und die Haupterfahrung von RNGA wird in diagnostischen Labors durchgeführt.

Die Erstellung eines Erythrozyten-Diagnostikums umfasst folgende Schritte:

• Fixierung roter Blutkörperchen mit Formaldehyd oder Glutar- oder Acrylaldehyden. Solche behandelten roten Blutkörperchen werden lange gelagert. Häufiger werden hierfür Erythrozyten von Schafen, Menschen, Hühnern etc. verwendet;
• Behandlung fixierter Erythrozyten mit Tanninlösung. Dadurch erlangen rote Blutkörperchen die Fähigkeit, Proteine ​​(Viren und Antikörper) irreversibel an ihrer Oberfläche zu adsorbieren;
• Sensibilisierung tanisierter Erythrozyten durch Viren oder Antikörper.

Zu beachten ist, dass die Methoden zur Erstellung der Erythrozytendiagnostik bei Virusinfektionen unterschiedlich sind.

Das Verfahren zur Durchführung von RNGA zum Nachweis und zur Bestimmung des Antikörpertiters ist wie folgt:

• Gleiche Dosen von mit Antigen sensibilisierten Erythrozyten werden zu aufeinanderfolgenden zweifachen Serumverdünnungen gegeben.
• die Mischung wird 2–3 Stunden bei Raumtemperatur oder 16–18 Stunden bei 4 °C stehen gelassen;
• Berücksichtigen Sie die Ergebnisse. Enthält das Serum Antikörper gegen das Virus, mit dem die roten Blutkörperchen sensibilisiert wurden, wird eine Hämagglutination beobachtet, die in Kreuzen beurteilt wird.

Als Antikörpertiter im Serum wird die höchste Serumverdünnung angenommen, die noch eine Hämagglutination von mindestens zwei Kreuzen bewirkt.

RNGA wird von allen relevanten Kontrollen begleitet. Normalerweise wird die Reaktion nach der Mikromethode durchgeführt.

Mit RNGA können Sie die folgenden Diagnoseprobleme lösen:

• Nachweis von Antikörpern und Bestimmung ihres Titers im Blutserum unter Verwendung eines bekannten Erythrozyten-Antigen-Diagnostikums;
• Erkennen und identifizieren Sie ein unbekanntes Virus mithilfe eines bekannten Erythrozyten-Antikörper-Diagnostikums.

Vorteile von RNGA: hohe Empfindlichkeit, einfache Platzierungstechnik und Reaktionsgeschwindigkeit. Es ist jedoch wichtig zu beachten, dass bei der Erstellung einer stabilen Erythrozytendiagnostik große Schwierigkeiten auftreten ( große Abhängigkeit von der Reinheit der verwendeten Komponenten, der Notwendigkeit, für jeden Virustyp eine Art der Fixierung, Tanisierung und Sensibilisierung der Erythrozyten auszuwählen).

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