Инструкция по сбору, хранению и транспортировке

биологического материала для лабораторных исследований

для выявления возбудителей заболеваний методом ПЦР

1.1.1. Взятие биоматериала производится из предполагаемого места обитания микроорганизмов и развития инфекции.

1.1.2. Количество забранного материала должно быть небольшим. Избыток отделяемого, слизь и гной отрицательно влияют на качество выделения ДНК и способствуют деградации ДНК при хранении и транспортировке.

1.1.3. При внесении биоматериала, взятого у пациента зондом с ватным тампоном или щеточкой, в пробирку типа эппендорф с буферным раствором, необходимо:

Соблюдать стерильность;

Прежде, чем погружать собранный на тампоне (щеточке) биоматериал в раствор, размазать его по сухой стенке пробирки, затем смочить тампон (щеточку) в растворе и, вращая зонд, тщательно смыть весь материал со стенки пробирки и тампона (щеточки);

По возможности отжать тампон о стенку пробирки, удалить зонд с тампоном (щеточкой) и закрыть пробирку.

1.2. Способы взятия биоматериала для исследований методом ПЦР

1.2.1. Соскобы. Для соскобов используются одноразовые стерильные зонды, имеющие ватный тампон с повышенной адсорбцией или «щеточки», реже - ложки Фолькмана, малые ушные ложки или аналогичные инструменты со слегка затупленными краями. Поскабливающими движениями собрать материал. Исследуемый материал должен содержать возможно большее количество эпителиальных клеток и минимальное количество слизи, примесей крови и экссудата. Внести материал в стерильную пробирку типа эппендорф с буферным раствором (см. раздел 1.1.).

Соскоб из цервикального канала: перед взятием соскоба необходимо удалить избыток слизи стерильным ватным тампоном, обработать шейку матки стерильным физиологическим раствором. Зонд ввести в цервикальный канал на глубину 0,5-1,5 см, избегая соприкосновения со стенками влагалища, и поскабливающим движением (не до крови) собрать материал. Небольшое количество эритроцитов в пробе не влияет на результат анализа. При наличии эрозии шейки матки материал берут с границы здоровой и измененной ткани.

Соскоб из уретры: зонд ввести в уретру (у мужчин - на глубину 2-4 см) и несколькими вращательными движениями собрать материал. Накануне перед взятием материала допускается провокация (острая пища, алкоголь и др.). Рекомендуется воздержаться от мочеиспускания в течение 1-2-х часов перед взятием пробы. При наличии обильных гнойных выделений соскоб надо брать не позже, чем через 15 минут после мочеиспускания.

Соскоб с конъюнктивы берут, предварительно проведя анестезию глаза 0,5% раствором дикаина. Вывернув веко, зондом с ватным тампоном (либо глазным скальпелем) собрать эпителиальные клетки с конъюнктивы.

Соскоб из прямой кишки: зонд ввести в анальное отверстие на глубину 3-4 см и вращательным движением собрать материал.

1.2.2. Мазки. Одноразовым стерильным зондом с ватным тампоном или щеточкой взять небольшое количество отделяемого (со сводов влагалища, из зева, носоглотки и др.) и перенести в стерильную пробирку типа эппендорф с буферным раствором (см. раздел 1.1.).

1.2.3. Кровь. Для исследований методом ПЦР кровь должна быть нативной (не свернувшейся).

Кровь собрать асептически, путем венопункции - в фирменную пробирку (2-3 мл) с антикоагулянтом ЭДТА (гепарин в качестве антикоагулянта использовать нельзя! ), аккуратно перемешать, плавно переворачивая пробирку.

Кровь с ЭДТА является биоматериалом для следующих групп исследований:

- генетические исследования (момент забора крови значения не имеет).

- выявление возбудителей инфекций (наиболее информативными являются пробы, взятые при ознобе, повышенной температуре, т. е. предположительно во время виремии или бактериемии).

1.2.4. Моча. В пустой стерильный контейнер с плотно завинчивающейся крышкой собирают утреннюю первую или среднюю порцию мочи в количестве минимум 10 мл. Если забор мочи проводят днем, то перед этим пациент не должен мочиться 1,5-3 часа.

1.2.5. Мокрота. Утром провести санацию ротовой полости и горла (прополоскать раствором питьевой соды). Собрать мокроту в пустой стерильный широкогорлый флакон.

1.2.6. Биоптат. Взятие материала осуществлять из зоны предполагаемого местонахождения возбудителя инфекции, из поврежденной ткани или пограничного с повреждением участка. Поместить биоптат в стерильную пробирку типа эппендорф с буферным раствором.

1.2.7. Слюна, желудочный сок, ликвор, синовиальная жидкость. Слюна (1-5 мл), желудочный сок (1-5 мл), ликвор (1-1,5 мл) - поместить в пустую стерильную пробирку (контейнер).

1.2.8. Сок предстательной железы. После массажа предстательной железы сок собирают в количестве 0,5-1 мл в пустую стерильную пробирку (контейнер). При невозможности получить сок, сразу после массажа собирают первую порцию мочи в количестве не более 10 мл (в этой порции содержится сок предстательной железы).

1.2.9. Смывы, бронхоальвеолярный лаваж (БАЛ). Стерильным ватным тампоном и 5-7 мл физиологического раствора проводят смыв, например, с наконечника эндоскопа или бронхоскопа, и помещают 0,5-5 мл смыва в пустую стерильную пробирку (контейнер).

1.2.10. Фекалии. Зонд с ватным тампоном помещают внутрь каловых масс и слегка проворачивают, захватывая небольшое количество материала. Затем материал помещают в стерильную пробирку типа эппендорф с буферным раствором.

1.3. Правила хранения биологического материала для исследований методом ПЦР

1.3.1. Мазки, соскобы :

В холодильной камере (+4ºС - +8ºС) до 7-и суток;

В морозильной камере (-20ºС) до 14 суток (допускается только однократное размораживание!).

1.3.2. Моча : в холодильной камере (+4ºС - +8ºС) не более 1-х суток;

1.3.3. Кровь с ЭДТА : в холодильной камере (+4ºС - +8ºС) - для определения возбудителей инфекций - не более 1-х суток; для генетических исследований – до 4-х суток. Замораживанию не подлежит.

1.3.4. Мокрота

1.3.5. Биоптаты :

В холодильной камере (+4ºС - +8ºС) не более 1-х суток,

В морозильной камере (-20ºС) до 2-х недель.

1.3.6. Сок предстательной железы : в холодильной камере (+4ºС - +8ºС) не более 1-х суток.

1.3.7. Синовиальная жидкость : в холодильной камере (+4ºС - +8ºС) не более 1-х суток.

2. Правила взятия, хранения и транспортировки крови

для иммунохимических исследований

2.1.1. Накануне взятия крови исключить физические нагрузки, стрессовые ситуации, физиотерапевтические процедуры, прием лекарственных средств (за исключением случаев медикаментозного лечения по назначению врача), оральных контрацептивов, прием спиртных напитков и жирной пищи. Непосредственно перед исследованием не курить.

2.1.2. При исследовании функции щитовидной железы в период лечения препаратами, содержащими гормоны ЩЖ, исследование проводится через 24 ч. после последнего приема препарата; за 2-3 дня до взятия крови исключить прием препаратов, содержащих йод.

2.1.3. При исследовании ПСА за неделю до анализа исключить любые манипуляции с предстательной железой.

2.1.4. Взятие крови производят утром, натощак (во избежание хилёзности, т. е. мутности сыворотки), в условиях физиологического покоя. Перед забором крови пациенту необходимо предоставить 15-минутный отдых.

2.1.5. Взятие крови осуществляют в процедурном кабинете ЛПУ, в положении пациента «сидя» или «лёжа», из локтевой вены с соблюдением правил асептики и антисептики . Кровь собирают в стерильную пробирку, шприц-моновет или cистему для взятия крови (Vacutainer®, Vacuette®).

2.1.6. Для получения сыворотки венозная кровь отстаивается до полного свертывания. После образования фибринового сгустка последний отделяют от стенок стерильной стеклянной палочкой, строго индивидуальной для каждой пробы, пробирку центрифугируют при 3000 об/мин в течение 15 мин* .

* Шприц-моновет и cистемы для взятия крови (Vacutainer®, Vacuette®) подвергаются центрифугированию без предварительных манипуляций.

2.1.7. Надосадочную жидкость желтого цвета (сыворотку) осторожно переносят пипеткой в пустую пробирку с крышкой (на 5 мл).

2.2. Правила хранения крови и сыворотки крови для иммунохимических исследований

2.2.1. К ровь: в холодильной камере (+40С - +80С) в течение 1-х суток.

2.2.2. Сыворотка крови:

В холодильной камере при температуре +40С - + 80С в течение 4-х суток;

В морозильной камере при температуре -200С в течение 2-х недель.

Допускается только однократное размораживание!

ВНИМАНИЕ! Исследованию подлежит сыворотка, не содержащая примеси эритроцитов, бактериальных проростов, хилёза, гемолиза. При наличии любого из указанных признаков сыворотка уничтожается и назначается повторное взятие крови.

2.3. Правила взятия и хранения крови для исследования волчаночного антикоагулянта

и коагулогических исследований

2.3.1. Взятие крови производится утром натощак из локтевой вены с соблюдением правил асептики и антисептики в день выполнения исследования. Для предотвращения активации свертывания крови компрессия вены не должна превышать 1 минуту.

2.3.2. Если исследование назначается на фоне приема препаратов, влияющих на свертывание крови, необходимо отметить это в направлении.

2.3.3. Кровь собирают в специальную пробирку, содержащую цитрат натрия , до отметки. При несоблюдении этого правила изменяется соотношение кровь/антикоагулянт, что может отрицательно сказаться на точности результата.

2.3.4. В течение 1 ч. после взятия крови пробирку необходимо отцентрифугировать при 3000 об/мин в течение 15 минут.

2.3.5. Хранение плазмы: до 6 часов при температуре +40С - +80С или до 2-х недель при температуре -200С.

2.4. Правила взятия и хранения крови для исследования гликированного (гликозилированного) гемоглобина

2.4.1. Взятие крови производится утром натощак из локтевой вены, соблюдая правила асептики и антисептики.

2.4.2. Кровь собирают в специальную пробирку, содержащую ЭДТА, плавно перемешивают. Не центрифугировать!

2.4.3. Доставка в Лабораторию в день взятия крови.

2.4.4. Хранение: до 2-х недель при температуре -200С.

2.5. Правила проведения пренатального скрининга

2.5.1. Оптимальные сроки проведения исследования: I триместр – 10-13 недель беременности; II триместр – 16-18 недель беременности.

2.5.2. При направлении на исследование заполняется специальное направление, в котором необходимо указать индивидуальные данные беременной женщины: возраст (число/месяц/год), вес, результаты УЗИ (КТР, БПР, количество плодов, срок беременности по УЗИ (недели+дни); если имеются - данные о величине шейной складки - NT) с обязательным указанием даты УЗИ и ФИО врача, проводившего УЗИ; наличие дополнительных факторов риска (курение, сахарный диабет, ЭКО), этническая принадлежность.

2.5.3. Для скрининга II триместра беременности можно использовать данные УЗИ, проведенного в I триместре.

3. Правила взятия, хранения и транспортировки биоматериала

для бактериологических исследований

3.1. Взятие биоматериала производят до применения курса антибактериальной терапии или не менее, чем через неделю после ее завершения.

3.2. Для предупреждения контаминации пробы микроорганизмами из внешней среды взятый биоматериал переносят в пустой контейнер или пробирку с транспортной средой с соблюдением стандартных правил стерильности: пробка пробирки (контейнера) открывается/закрывается так, чтобы внутренняя часть пробки осталась стерильной, стерильная посуда открытой держится недолго.

3.3. Взятие биоматериала для выявления микоплазм и уреаплазм, трихомонад, гонококков, неспецифической микрофлоры , культур анаэробных бактерий производится в фирменные пробирки с угольной транспортной средой:

Упаковку открыть в указанном месте согласно схеме;

Пробирку вынуть и открыть, крышку выбросить;

Зондом взять соскоб/мазок, биоптат или обмакнуть зонд в биологическую жидкость;

Зонд с биоматериалом сразу поместить в пробирку (ручка зонда является крышкой пробирки);

Пробирку пронумеровать, номер указать в направлении.

3.4. Виды биологического материала для взятия в транспортную угольную среду: мазки/соскобы, сок предстательной железы, ликвор, синовиальная жидкость, биоптат.

3.5. Хранение биоматериала в пробирках с транспортной средой для выявления микоплазм и уреаплазм, неспецифической микрофлоры до момента транспортировки -

Доставка в Лабораторию в течение одних суток.

3.6. Хранение биоматериала в пробирках с транспортной средой для выявления трихомонад, гонококков, культур анаэробных бактерий до момента транспортировки - при комнатной температуре.

3.7. Нативный биоматериал: мокроту, сок предстательной железы, синовиальную жидкость от 1 до 10 мл для выявления неспецифической микрофлоры, микоплазм и уреаплазм собирают в пустой стерильный контейнер.

Необходимо оповестить Лабораторию накануне или в день взятия биоматериала до 11:00.

Хранение нативного биоматериала до момента транспортировки - в холодильной камере (+4ºС - +8ºС).

Доставка в Лабораторию в день взятия материала.

3.8. Мочу для исследования на степень бактериурии (утренняя средняя порция, 10-20 мл) собирают в пустой стерильный контейнер с крышкой после тщательного туалета наружных половых органов.

Необходимо оповестить Лабораторию накануне или в день взятия биоматериала до 11:00.

Хранение биоматериала до момента транспортировки - в холодильной камере (+4ºС - +8ºС).

Доставка в Лабораторию в день взятия биоматериала.

3.9. Кровь на стерильность .

Наиболее информативной является проба крови, взятая во время подъема температуры.

Кровь собирают в фирменные флаконы с двухфазной транспортной средой (флакон для взрослых, флакон для детей). Пластмассовую крышку флакона аккуратно вскрыть, появившуюся часть резиновой пробки протереть 70%-м спиртом. В стерильных условиях шприцем взять кровь из вены и ввести через резиновую пробку во флакон (4 мл - во флакон для взрослых, 2 мл - во флакон для детей).

Необходимо оповестить Лабораторию накануне или в день взятия биоматериала до 11:00.

Хранение крови до момента транспортировки - при комнатной температуре.

Доставка в Лабораторию в день взятия биоматериала.

3.10. Грудное молоко для выявления неспецифической микрофлоры берется из каждой груди в отдельный стерильный герметично закрывающийся стаканчик. Подписать стаканчики: «левая грудь», «правая грудь».

Перед сбором биоматериала грудь помыть теплой водой с мылом, вытереть чистым полотенцем, тщательно обработать соски и околососковую область ватным тампоном, смоченным 70% раствором этилового спирта, просушить стерильной салфеткой (каждая железа обрабатывается отдельным тампоном). Первые 10-15 мл сцеженного молока для анализа не используются. Вторую порцию молока из каждой груди сцедить в подписанный стаканчик в количестве ~ 10 мл.

Необходимо оповестить Лабораторию накануне или в день взятия биоматериала до 11:00.

Доставка в Лабораторию в течение 2-х часов в день взятия материала.

3.11. Кал на дисбактериоз .

Перед взятием пробы запрещается употребление алкоголя в течение 3-х суток и прием антибиотиков в течение 2-х недель. Стул необходимо получить без клизм и слабительных. Детям при запорах можно использовать для раздражающего эффекта кусочек мыла. Фекалии собирают в индивидуальное судно, отмытое от дезинфектанта. Стерильной ложкой отбирают 3-5 г средней порции кала и помещают в стерильный контейнер.

Необходимо оповестить Лабораторию накануне или в день взятия биоматериала до 11:00.

Хранение до момента транспортировки - контейнер с биоматериалом для сохранения тепла хранить обернутым в вату и бумагу.

Доставка в Лабораторию в день взятия биоматериала.

4. Правила взятия, хранения и транспортировки биоматериала

для микроскопических исследований

4.1. От каждого пациента - 2 стекла (одно стекло – запасное). На каждом стекле - 3 точки: влагалище (V ), цервикальный канал (С ), уретра (U ). Наносить мазки так, чтобы матовая поверхность была слева, сверху, и от нее – слева направо: v, c, u.

4.2. Маркировка (№) на стекле не должна растворяться в спирте (можно подписывать на матовой части стекла простым карандашом). Мазки должны быть зафиксированы посредством высушивания на воздухе (30-60 мин).

4.3. Стекла должны быть промаркированы, сложены мазками друг к другу, упакованы в индивидуальный пакет с соответствующей сопроводительной надписью (ЛПУ, Ф. И.О. пациента, № на стекле).

4.4. Пакет и заполненное направление передаются в Лабораторию.

5. Правила взятия, хранения и транспортировки биоматериала

5.1. В течение 24-х часов перед исследованием необходимо исключить спринцевание, применение интравагинальной терапии и половые контакты. Нельзя брать материал во время менструации. Наиболее информативными являются пробы, взятые на 14-20 дни после начала менструации.

5.2. Материал берется до бимануального исследования, проведения различных диагностических проб, до взятия материала на ПЦР. Взятие материала осуществляется без предварительной обработки слизистой влагалища.

5.3. Соскоб со слизистой влагалища/цервикального канала берется нейлоновой щеточкой Cervex-Brush, шпателем или другим инструментом и равномерно распределяется по стеклу, оставляя один конец стекла чистым (для маркировки). На стекло берется одна точка, дублируется еще на одно запасное стекло (всего два стекла на одну точку). Мазки должны быть зафиксированы посредством высушивания на воздухе (30-60 мин).

5.4. Стекла должны быть промаркированы (№ и Ф. И.О. пациента), сложены мазками друг к другу, упакованы в индивидуальный пакет с соответствующей сопроводительной надписью (ЛПУ, Ф. И.О. пациента, № на стекле).

5.5. Хранить высушенные мазки можно до 6 дней при комнатной температуре.

5.6. Пакет и заполненное направление (на каждую точку свое направление с указанием вида биоматериала) передаются в Лабораторию.

Не вкладывать направление в пакет со стеклами, не заворачивать стекла в направление!

ГЛАВА 9 ПРАВИЛА СБОРА БИОЛОГИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА ДЛЯ ЛАБОРАТОРНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

Лабораторные методы исследования служат важным этапом обследования больного. Полученные данные помогают оценке состояния больного, постановке диагноза, осуществлению наблюдения за состоянием пациента в динамике и течением заболевания, контролю проводимого лечения.

Различают следующие виды лабораторных исследований.

Обязательные - их назначают всем больным без исключения, например общие анализы крови и мочи.

Дополнительные - их назначают строго по показаниям в зависимости от конкретного случая, например исследование желудочного сока для изучения секреторной функции желудка.

Плановые - их назначают через определённое количество дней после предыдущего исследования с целью наблюдения за больным в динамике и осуществления контроля лечения, например повторный общий анализ мочи больного с обострением хронического пиелонефрита.

Неотложные - их назначают в ургентной (неотложной) ситуации, когда от полученных результатов исследования может зависеть дальнейшая тактика лечения, например исследование содержания сердечных тропонинов* в крови больного с острым коронарным синдромом.

Материалом для лабораторного исследования может быть любой биологический субстрат.

Выделения человеческого организма - мокрота, моча, кал, слюна, пот, отделяемое из половых органов.

Жидкости, получаемые с помощью прокола или откачивания, - кровь, экссудаты и транссудаты, спинномозговая жидкость.

Жидкости, получаемые с помощью инструментально-диагностической аппаратуры, - содержимое желудка и двенадцатиперстной кишки, жёлчь, бронхиальное содержимое.

* Тропонины - высокочувствительные и высокоспецифичные биологические мар- кёры некроза мышцы сердца, развивающегося при инфаркте миокарда.

Ткани органов, получаемые методом биопсии*, - ткани печени, почек, селезёнки, костного мозга; содержимое кист, опухолей, желёз.

Палатная медицинская сестра делает выборку назначений из истории болезни (из листа назначений) и записывает необходимые лабораторные анализы в журнал учёта анализов. После получения биологического материала (мочи, кала, мокроты и др.) она должна организовать своевременную его доставку в лабораторию, оформив направление. В направлении должны быть указаны отделение, номер палаты, фамилия, имя, отчество пациента, его диагноз, дата и время забора пробы и фамилия медицинской сестры, проводившей отбор материала. Кровь из пальца берёт лаборант в соответствующих условиях, кровь из вены - процедурная медицинская сестра.

Правильность результатов лабораторного исследования обеспечивается тщательным соблюдением требований к технике сбора биологического материала, что зависит не только от грамотных действий медицинской сестры, но и от её умения наладить контакт с пациентом, должным образом проинструктировать его о порядке взятия материала. Если больной затрудняется запомнить и сразу выполнить указания, следует сделать для него короткую понятную запись.

Во избежание риска инфицирования вирусной и бактериальной инфекциями, передающимися через кровь и другие биологические материалы, следует соблюдать следующие меры предосторожности:

Избегать непосредственного контакта с биологическим материалом - работать только в резиновых перчатках;

Аккуратно обращаться с лабораторной посудой, а в случае её повреждения осторожно убрать осколки стекла;

Тщательно дезинфицировать ёмкости, используемые в процессе сбора биологического материала, - лабораторную посуду, судна и мочеприёмники и др.;

Перед сливом в канализацию обеззараживать выделения пациентов.

Если медицинской сестре всё же попал на кожу биологический материал пациента, следует немедленно обработать контактные участки 70% раствором спирта, протирая смоченным в нём тампоном кожу в течение 2 мин, через 5 мин необходимо ополоснуть кожу проточной водой.

* Биопсия (био- + греч. opsis - зрение) - прижизненное взятие небольшого объёма ткани для микроскопического исследования с диагностической целью.

ИССЛЕДОВАНИЕ КРОВИ

При исследовании крови необходимо помнить, что все процессы жизнедеятельности подвержены значительным вариациям под влиянием внешних факторов, таких как смена времени суток и года, приём пищи, изменение солнечной активности. Биохимический состав биологических жидкостей подвержен индивидуальным колебаниям у различных людей, отражая влияние пола, возраста, характера питания, образа жизни. Морфологический состав крови также колеблется на протяжении суток. Поэтому осуществлять забор крови целесообразно в одно и то же время - утром натощак.

При заборе крови из вены время наложения жгута должно быть по возможности минимальным, так как длительный стаз крови повышает содержание общего белка и его фракций, кальция, калия и других компонентов.

В зависимости от цели исследования забор крови для лабораторного анализа осуществляют из пальца (капиллярная кровь) и из вены (венозная кровь).

Кровь из пальца берёт лаборант; этот анализ необходим для количественного и качественного изучения форменных элементов крови (эритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов), определения количества в крови гемоглобина и скорости оседания эритроцитов (СОЭ). Такой анализ называют общим анализом крови или общеклиническим исследованием крови. Кроме того, в ряде случаев из пальца берут кровь* для определения содержания в крови глюкозы, а также свёртываемости крови и времени кровотечения.

Кровь из вены берёт процедурная медицинская сестра посредс-

* В настоящее время созданы аппараты (например, «Холестех», США), в которых на основе восковой матрицы осуществляется возможность из капли крови, взятой из пальца, определять содержание в крови общего холестерина, холестерина липопротеидов высокой, низкой и очень низкой плотности, триглицеридов и глюкозы, рассчитывать индекс атерогенности и риск развития ИБС.

твом пункции в большинстве случаев локтевой вены; кровь смешивается в пробирке с противосвёртывающим веществом (гепарин, натрия цитрат и пр.). Забор крови из вены осуществляют с целью количественного изучения биохимических показателей крови (так называемых печёночных проб, ревматологических проб, содержания глюкозы, фибриногена, мочевины, креатинина и пр.), обнаружения возбудителей инфекции (взятие крови на гемокультуру и определение чувствительности к антибиотикам) и антител к ВИЧ. Вид требуемого биологического материала зависит от цели исследования: цельную кровь с антикоагулянтом применяют для исследования равномерно распределённых между эритроцитами и плазмой веществ (мочевины, глюкозы и др.), сыворотку или плазму - для неравномерно распределён- ных (натрия, калия, билирубина, фосфатов и др.). Объём забираемой из вены крови зависит от количества определяемых компонентов - обычно из расчёта 1-2 мл на каждый вид анализа.

Взятие крови на исследование из вены

Противопоказания к процедуре определяет врач. К ним относят крайне тяжёлое состояние пациента, спавшиеся вены, судороги, воз- буждённое состояние пациента.

Весь использованный во время манипуляции материал необходимо продезинфицировать. Резиновый жгут и клеёнчатый валик протирают дважды ветошью, смоченной дезинфицирующим раствором (например, 3% раствором хлорамина Б), и промывают проточной водой. Использованный ватный шарик с кровью обязательно следует забрать у пациента и, прежде чем поместить его в отходы, замочить в дезинфицирующем растворе не менее чем на 60 мин. Дезинфицирующим раствором необходимо обработать также и рабочий стол.

Необходимое оснащение:

70% раствор спирта, чистые пробирки с пробочками в штативе;

Тонометр, фонендоскоп, противошоковый набор лекарственных средств.

Порядок выполнения процедуры:

2. Подготовиться к процедуре: пронумеровать пробирку и направление на анализ (одинаковым порядковым номером), вымыть и высушить руки, надеть спецодежду, обработать руки ватными шариками, смоченными 70% раствором спирта, надеть перчатки.

5. Наложить резиновый жгут в области средней трети плеча выше локтевого сгиба на 10 см (на салфетку или расправленный рукав рубашки, но таким образом, чтобы он не ущемил кожу при завязывании) и затянуть жгут, чтобы петля жгута была направлена вниз, а свободные его концы - вверх (чтобы концы жгута во время венопункции не попали на обработанное спиртом поле).

8. Попросить пациента сжать кулак и не разжимать до тех пор, пока медсестра не разрешит; при этом дважды обработать кожу в области локтевого сгиба ватными шариками, смоченными 70% раствором спирта, в одном направлении - сверху вниз, сначала широко (размер инъекционного поля составляет 4 χ 8 см), затем - непосредственно место пункции.

11. Провести венопункцию: держа иглу срезом вверх под углом 45°, ввести иглу под кожу; затем, уменьшив угол наклона и держа иглу почти параллельно кожной поверхности, продвинуть иглу немного вдоль вены и ввести её на треть её длины в вену (при соответствующем навыке можно одномоментно проколоть кожу над веной и стенку самой вены); при проколе вены возникает ощущение «провала» иглы в пустоту.

12. Убедиться, что игла находится в вене, слегка потянув поршень иглы на себя; при этом в шприце должна появиться кровь.

13. Не снимая жгут, продолжить тянуть поршень шприца на себя* для набора необходимого количества крови.

16. Предложить больному согнуть руку в локтевом сгибе вместе с ватным шариком и оставить так на 3-5 мин для остановки кровотечения.

17. Снять иглу со шприца (так как при выпуске крови из шприца через иглу могут быть повреждены эритроциты, что вызовет их гемолиз), медленно выпустить кровь в пробирку по её стенке (быстрое поступление крови в пробирку может привести к её вспениванию и, следовательно, гемолизу крови в пробирке) и закрыть пробирку пробочкой.

18. Сложить использованные материалы в специально приготовленный лоток, снять перчатки.

19. Спросить у пациента о его самочувствии, помочь ему встать или удобно лечь (в зависимости от тяжести его состояния).

20. Оформить направление в лабораторию, поместить штатив с пробирками в ёмкость для транспортировки биологических жидкостей (бикс) и отправить в лабораторию для исследования. При подозрении на гепатит или ВИЧ-инфекцию у больного ёмкость с кровью необходимо дополнительно парафинировать или закрыть лейкопластырем и поместить в герметичный контейнер.

Взятие крови из вены на гемокультуру (стерильность) и чувствительность к антибиотикам

Необходимое оснащение:

Стерильные флаконы со средами, полученные в бактериологической лаборатории к моменту забора крови;

Спиртовка, спички;

Одноразовые (стерильные) шприцы с иглами;

* В ряде случаев во избежание повреждения форменных элементов крови (например, при исследовании агрегационной функции тромбоцитов) кровь нельзя набирать шприцем. В такой ситуации следует набирать кровь «самотёком» - подставить под иглу (без шприца) пробирку и подождать, пока она заполнится необходимым количеством крови.

Стерильный лоток с ватными шариками и пинцетом;

Резиновый жгут, резиновый валик и салфетка;

70% раствор спирта, чистые пробирки с пробочками в штативе (или флаконы);

Спецодежда (халат, маска, стерильные перчатки);

Лоток для использованного материала;

Тонометр, фонендоскоп, противошоковый набор лекарств. Порядок выполнения процедуры:

1. Подготовить пациента - помочь ему занять удобное положение сидя или лёжа (в зависимости от тяжести его состояния).

2. Подготовиться к процедуре: пронумеровать пробирку (флакон) и направление на анализ (одинаковым порядковым номером), вымыть и высушить руки, надеть спецодежду, обработать руки ватными шариками, смоченными 70% раствором спирта, надеть перчатки, зажечь спиртовку.

3. Подложить под локоть пациента клеёнчатый валик для максимального разгибания локтевого сустава.

4. Освободить от одежды руку или поднять рукав рубашки до средней трети плеча таким образом, чтобы был обеспечен свободный доступ к области локтевого сгиба.

5. Наложить резиновый жгут в области средней трети плеча выше локтевого сгиба на 10 см (на салфетку или расправленный рукав рубашки таким образом, чтобы жгут не ущемил кожу при завязывании) и затянуть жгут, чтобы петля жгута была направлена вниз, а свободные его концы - вверх (чтобы концы жгута во время венопункции не попали на обработанное спиртом поле).

6. Обработать одетые в перчатки руки 70% раствором спирта.

7. Предложить пациенту «поработать кулаком» - несколько разжать и разжать кулак для хорошего наполнения вены.

8. Предложить пациенту сжать кулак и не разжимать до тех пор, пока медсестра не разрешит; при этом дважды обработать кожу в области локтевого сгиба ватными шариками, смоченными 70% раствором спирта, в одном направлении - сверху вниз, сначала широко (размер инъекционного поля 4 χ 8 см), затем - непосредственно место пункции.

9. Найти наиболее наполненную вену; затем кончиками пальцев левой руки оттянуть кожу локтевого сгиба в сторону предплечья и фиксировать вену.

10. В правую руку взять приготовленный для пункции шприц с иглой.

11. Провести венопункцию: держа иглу параллельно коже срезом вверх под углом 45°, одномоментно проколоть кожу над веной и стенку самой вены или провести прокол в два этапа - сначала проколоть кожу, затем иглу подвести к стенке вены и сделать её прокол.

12. Убедиться, что игла в вене, слегка потянув поршень иглы на себя; при этом в шприце должна появиться кровь.

13. Не снимая жгут, продолжать тянуть поршень шприца на себя для набора необходимого количества крови.

14. Развязать жгут и предложить больному разжать кулак.

15. Прижать ватный шарик, смоченный в 70% растворе спирта, к месту инъекции и быстро извлечь иглу.

16. Предложить больному согнуть руку в локтевом сгибе вместе с ватным шариком и подождать 3-5 мин для остановки кровотечения.

17. Соблюдая стерильность, открыть стерильный флакон левой рукой и обжечь его горлышко над пламенем спиртовки.

18. Медленно выпустить кровь из шприца в пробирку (флакон), не касаясь стенок ёмкости; обжечь над пламенем спиротовки пробку, удерживая её с помощью пинцета, и закрыть пробирку (флакон).

19. Сложить использованные материалы в специально приготовленный лоток, снять перчатки.

20. Спросить у пациента о его самочувствии, помочь ему встать или удобно лечь (в зависимости от тяжести его состояния).

21. Оформить направление в лабораторию, поместить штатив с пробирками (флаконы) в ёмкость для транспортировки биологических жидкостей (бикс) и отправить в бактериологическую лабораторию в течение часа. При подозрении на наличие у больного гепатита или ВИЧ-инфекции ёмкость с кровью необходимо дополнительно парафинировать или закрыть лейкопластырем и поместить в герметичный контейнер.

ИССЛЕДОВАНИЕ МОЧИ

Исследование мочи имеет большое диагностическое значение не только при заболеваниях почек и мочевыводящих путей, но и при болезнях других органов и систем.

Методы исследования мочи

Различают следующие основные методы исследования мочи.

1. Общий анализ мочи:

Определяют цвет, прозрачность, запах, реакцию, относительную плотность;

Проводят микроскопию осадка, составляющими которого выступают форменные элементы - эритроциты, лейкоциты, эпителиальные клетки, цилиндры, а также кристаллы и аморфные массы солей;

Осуществляют химический анализ на выявление белка, глюкозы, кетоновых тел, билирубина и уробилиновых тел, минеральных веществ.

2. Количественное определение форменных элементов в моче:

Проба Нечипоренко - подсчитывают количество форменных элементов в 1 мл мочи;

Проба Амбюрже - подсчёт клеточных элементов проводят в моче, собранной за 3 ч с пересчётом на минутный диурез;

Проба Каковского-Аддиса - подсчёт клеточных элементов проводят в моче, собранной за сутки.

3. Проба Зимницкого (для оценки концентрационной и выделительной функций почек): проводят сопоставление относительной плотности мочи в порциях, собранных в разные периоды одних суток (начиная с 6 ч утра каждые 3 ч в отдельные банки), и анализ соотношения дневного и ночного диуреза.

4. Бактериологическое исследование мочи - его проводят при инфекционных воспалительных заболеваниях почек и мочевыводящих путей.

5. Определение ряда параметров в моче, собранной за сутки: суточный диурез, содержание белка, глюкозы и др.

Подготовка больных к исследованию

Медицинская сестра должна обучить пациентов технике гигиенической процедуры и правилам сдачи мочи на анализ.

Больному следует объяснить, что утром накануне исследования необходимо подмыть наружные половые органы и промежность тёплой водой с мылом в определённой последовательности (область лобка, наружные половые органы, промежность, область заднего прохода) и вытереть насухо кожу в таком же порядке. Если у женщины в период сдачи анализа мочи имеется менструация, а отложить

исследование нельзя, нужно посоветовать ей закрыть влагалище ватным тампоном. В ряде ситуаций при соответствующих показаниях мочу на анализ берут катетером: у женщин во время менструации, у тяжелобольных и т.д.

Утром после гигиенической процедуры больной должен выпустить начальную порцию мочи в унитаз на счёт «1-2», а затем задержать мочеиспускание и, подставив банку, собрать в неё 150-200 мл мочи (так называемая средняя порция струи мочи), при необходимости завершив мочеиспускание в унитаз.

Ёмкости с крышкой для сбора мочи должны быть подготовлены заранее: вымыты раствором детергента или мылом, ополоснуты не менее 3 раз для удаления остатков моющего вещества и тщательно высушены. В противном случае при анализе мочи можно получить ложные результаты. Необходимо также объяснить пациенту, где он должен оставить ёмкость с мочой, закрытую крышкой.

Собранная для исследования моча должна быть отправлена в лабораторию не позднее чем через 1 ч после сбора. Хранение мочи до проведения анализа допускается только в холодильнике максимум в течение 1,5 ч. Применение консервантов для лучшей сохранности мочи нежелательно. Однако в ряде случаев (например, для предотвращения распада форменных элементов, происходящего под влиянием микроорганизмов при долгом стоянии мочи) при ее сборе для пробы Каковского-Аддиса в емкость, куда собирается моча, добавляют консервант (1 кристаллик тимола или 0,5 мл хлороформа на каждые 10 0 мл мочи).

Особенности сбора мочи при различных методах исследования:

Общий анализ мочи: после гигиенической процедуры в чистую ёмкость собирают «среднюю порцию» струи мочи (150-200 мл).

Проба по Нечипоренко: после гигиенической процедуры в чистую ёмкость собирают 5-10 мл из «средней порции» струи мочи.

Проба Амбюрже: больной должен в5ч утра помочиться в унитаз, затем тщательно подмыться, а в 8 ч утра помочиться в заранее подготовленную ёмкость (объёмом 0,5 л).

Проба Каковского-Аддиса: мочу собирают в отдельную емкость в течение суток (емкость с мочой следует держать в холодильнике!). Если же мочу собирают в течение 10 ч, больной должен в 10 ч вечера помочиться в унитаз, ночью постараться в туалет не ходить, а утром в 8 ч после гигиенической процедуры собрать всю мочу в подготовленную ёмкость (объёмом 0,5-1 л).

Проба Зимницкого: больной должен в 6 ч утра помочиться в унитаз, после этого последовательно собирать мочу в пронумерованные ёмкости, меняя их каждые 3 ч. Если мочи в течение 3 ч не оказывается, ёмкость остаётся пустой. Все восемь ёмкос- тей должны быть промаркированы с указанием номера порции и времени сбора мочи:

- № 1, 6.00-9.00;

- № 2, 9.00-12.00;

- № 3, 12.00-15.00;

- № 4, 15.00-18.00;

- № 5, 18.00-21.00;

- № 6, 21.00-24.00;

- № 7, 24.00-3.00;

- № 8, 3.00-6.00.

Бактериологическое исследование мочи: утром больной должен тщательно подмыться слабым раствором калия перманганата или нитрофурала, затем собрать 10-15 мл мочи из средней порции в стерильную пробирку и немедленно закрыть её пробкой.

Сбор суточной мочи: утром в 8 ч больной должен помочиться в унитаз, затем собирать мочу в градуированную ёмкость или трёхлитровую банку в течение суток до 8 ч утра следующего дня включительно. Если планируется анализ суточной мочи на глюкозу, белок и др., после сбора мочи медицинская сестра измеряет общее количество мочи и указывает его в направлении, затем тщательно размешивает деревянной палочкой всю мочу и отливает во флакон 100-150 мл мочи для лаборатории.

ИССЛЕДОВАНИЕ МОКРОТЫ

Мокрота представляет собой патологический секрет, выделяющийся из дыхательных путей при кашле. Исследование мокроты имеет большое диагностическое значение.

Различают следующие основные методы исследования мокроты.

1. Общий анализ мокроты:

Определяют количество, цвет, запах, консистенцию, характер мокроты;

Проводят микроскопическое исследование мокроты с целью обнаружения скопления клеточных элементов, кристаллов

Шарко-Ляйдена*, эластических волокон, спиралей Куршман- на**, элементов новообразований (атипичных клеток) и др.;

Осуществляют химический анализ для определения белка и его количества, определения билирубина.

2. Бактериологическое исследование мокроты:

Выявление в мокроте микрофлоры и определение её чувствительности к антибиотикам;

Анализ мокроты на наличие микобактерий туберкулёза. Чтобы собрать мокроту, больной должен в 8 ч утра натощак почистить

зубы и тщательно прополоскать рот кипячёной водой. Затем он должен сделать несколько глубоких вдохов или дождаться позыва на кашель, после чего откашлять мокроту (в объёме 3-5 мл) в заранее выданную ему чистую сухую градуированную банку и закрыть её крышкой. Для сбора мокроты с целью бактериологического исследования выдают стерильную ёмкость; в этом случае нужно предупредить больного, чтобы он не касался краёв посуды руками или ртом. После сбора мокроты пациенту следует оставить ёмкость с мокротой в санитарной комнате в специальном ящике. При сборе мокроты на атипичные клетки медицинская сестра должна немедленно доставить материал в лабораторию, так как опухолевые клетки быстро разрушаются.

ИССЛЕДОВАНИЕ КАЛА

Исследование кала - важная составная часть обследования пациентов, особенно с заболеваниями ЖКТ. Правильность результатов исследования кала во многом зависит от грамотной подготовки больного.

Различают следующие основные методы исследования кала.

1. Копрологическое исследование (греч. kopros - кал) - изучают переваривающую способность различных отделов пищеварительного тракта:

Определяют цвет, плотность (консистенцию), оформленность, запах, реакцию (pH) и наличие видимых примесей (остатки пищевых продуктов, гной, кровь, слизь, конкременты, гельминты);

* Кристаллы Шарко-Ляйдена - образования из белковых продуктов в результате распада эозинофилов. Обнаружение их в мокроте характерно для бронхиальной астмы.

** Спирали Куршманна - образования, состоящие из слизи, чаще всего обнаруживаются при бронхиальной астме.

Проводят микроскопическое исследование кала, позволяющее выявить остатки белковой (мышечные и соединительные волокна), углеводной (растительная клетчатка и крахмал) и жировой (нейтральный жир, жирные кислоты, мыла) пищи, клеточные элементы (лейкоциты, эритроциты, макрофаги, кишечный эпителий, клетки злокачественных опухолей), кристаллические образования (трипельфосфаты, оксалаты кальция, кристаллы холестерина, Шарко-Ляйдена, гематоидина), слизь;

Осуществляют химический анализ на определение пигментов крови, стеркобилина, аммиака и аминокислот, растворимой слизи.

2. Анализ кала на скрытую кровь - реакции Грегерсена, Вебера.

3. Анализ кала на наличие простейших и яиц гельминтов.

4. Бактериологическое исследование для выявления возбудителя инфекционного заболевания кишечника.

Подготовка пациента для сдачи кала состоит из следующих этапов.

Отмена медикаментов: за 2-3 дня до исследования больному следует отменить лекарственные средства, примеси которых могут влиять на внешний вид каловых масс, помешать микроскопическому исследованию и усилить перистальтику кишечника. К таким препаратам относят препараты висмута, железа, бария сульфат, пилокарпин, эфедрин, неостигмина метилсульфат, активированный уголь, слабительные средства, а также препараты, вводимые в ректальных свечах, приготовленных на жировой основе. Не применяют также масляные клизмы.

Коррекция пищевого режима: при копрологическом исследовании больному за 5 дней до сдачи кала назначают пробную диету, содержащую точно дозированный набор продуктов.

Обычно применяют диету Шмидта (2250 ккал) и/или диету Певзнера (3250 ккал). Диета Шмидта - щадящая, в её состав входят овсяная каша, нежирное мясо, картофельное пюре, яйцо, пшеничный хлеб и напитки (молоко, чай, какао). Диета Певзнера разработана по принципу максимальной для здорового человека пищевой нагрузки, в её состав входят поджаренное мясо, гречневая и рисовая каши, жареный картофель, салаты, квашеная капуста, масло, ржаной и пшеничный хлеб, свежие фрукты, компот. С помощью этих диет легче выявить степень усвоения пищи (степень недостаточности пищеварения). Например, при пробной диете

Шмидта у здорового человека пищевые остатки в кале не обнаруживают, при диете Певзнера же выявляют большое количество непереваренной клетчатки и небольшое количество мышечных волокон. - При анализе кала на скрытую кровь больному за 3 дня до сдачи кала назначают молочно-растительную диету и исключают железосодержащие продукты (мясо, печень, рыбу, яйца, томаты, зелёные овощи, гречневую кашу), так как они могут выступать катализаторами в реакциях, используемых для обнаружения крови. Во избежание получения ложноположительного результата необходимо убедиться в отсутствии у больного кровоточивости дёсен, носовых кровотечений и кровохарканья; больному запрещается чистить зубы. Непосредственная подготовка пациента к исследованию:

1. Больному выдают чистый сухой стеклянный флакон (можно из-под пенициллина) с пробкой и полоской лейкопластыря, стеклянную или деревянную палочку. Необходимо обучить больного технике сбора кала, следует объяснить, что он должен опорожнить кишечник в судно (без воды). Сразу после дефекации больной должен взять палочкой из нескольких разных участков испражнений 5-10 г кала, поместить собранные фекалии во флакон, который сразу следует закрыть крышкой, закрепив её полоской лейкопластыря, и вместе с направлением оставить в санитарной комнате в специально отведённом для этого месте.

2. При анализе кала на скрытую кровь, если дёсны больного кровоточат, необходимо предложить ему за 2-3 дня до исследования не чистить зубы щёткой и рекомендовать полоскать рот 3% раствором питьевой соды.

3. Для бактериологического исследования кала больному выдают стерильную пробирку с консервантом.

4. Использованные стеклянные палочки замачивают на 2 ч в дезинфицирующем растворе (например, в 3% растворе хлорамина Б или 3% растворе хлорной извести). Деревянные палочки сжигают.

5. Кал следует доставить в лабораторию в течение 8 ч после сбора (в условиях стационара - в течение 1 ч). Исследуют кал не позднее 8-12 ч после его выделения, а до этого его сохраняют при температуре от 3 до 5 °С. Наиболее точное представление о функциональном состоянии пищеварительного тракта даёт трёхкратное исследование фекалий.