Mmenyuko wa kizuizi cha hemagglutination katika virology. Mmenyuko wa kuzuia Hemagglutination (HRT)

RHA inategemea uwezo wa chembe nyekundu za damu kushikamana pamoja wakati antijeni fulani zinapowekwa juu yake. Maji ya allantoic na amniotic, kusimamishwa kwa utando wa chorioallantoic wa viini vya kuku, kusimamishwa na dondoo kutoka kwa tamaduni au viungo vya wanyama walioambukizwa na virusi, na nyenzo asilia ya kuambukiza hutumiwa kama nyenzo za mtihani wa hemagglutination. RGA sio serological, kwani hutokea bila ushiriki wa serum ya kinga na hutumiwa kuchagua dilution ya kazi ya antijeni kwa kufanya RGA au kuwepo kwa antijeni (virusi) katika nyenzo za mtihani (kwa mfano, kwa mafua). Mwitikio hutumia seli nyekundu za damu za wanyama, ndege, na wanadamu wa kundi la damu la I (0).

Ili kuanzisha takriban RGA, tone la kusimamishwa kwa 5% ya seli nyekundu za damu na tone la nyenzo za mtihani hutumiwa kwenye slide ya kioo na kuchanganywa vizuri. Ikiwa matokeo ni chanya, baada ya dakika 1-2 kuonekana kwa agglutination ya flocculent ya erythrocytes huzingatiwa macroscopically.

Kuweka RGA katika safu iliyofunuliwa kwenye visima vya sahani za polystyrene, dilutions zinazoongezeka mara mbili za nyenzo za mtihani huandaliwa katika suluhisho la kisaikolojia kwa kiasi cha 0.5 ml. 0.5 ml ya 0.25 - 1% kusimamishwa kwa seli nyekundu za damu huongezwa kwa zilizopo zote za mtihani. Matokeo yanazingatiwa baada ya sedimentation kamili ya erythrocytes katika udhibiti (seli nyekundu za damu + ufumbuzi wa salini). Mmenyuko huzingatiwa na asili ya sediment ya erythrocyte. Katika hali nzuri, kiwango cha agglutination ni alama na pluses. Mmenyuko ambao unaonekana kama filamu nyembamba ya seli nyekundu za damu zinazofunika chini ya bomba la mtihani (mwavuli) hupimwa na athari nne na mapengo kwenye filamu ni alama ya uwepo wa filamu iliyo na lacy iliyokatwa; kingo za chembechembe nyekundu za damu zina alama mbili za pamoja; Sediment ya erythrocyte iliyofafanuliwa kwa ukali isiyoweza kutofautishwa na udhibiti inaonyesha kutokuwepo kwa agglutination. Titer inachukuliwa kuwa dilution ya juu ya nyenzo za mtihani ambazo zilisababisha agglutination ya erythrocytes na pluses mbili.

Ikiwa matokeo ya RGA ni chanya, utafiti unaendelea, kuamua aina ya virusi vilivyotengwa kwa kutumia mmenyuko wa kuzuia hemagglutination na sera maalum ya aina.

RTGA inategemea mali ya antiserum kukandamiza hemagglutination ya virusi, kwani virusi vilivyotengwa na antibodies maalum hupoteza uwezo wa kukusanya seli nyekundu za damu. Kwa kuandika kwa majaribio ya virusi, njia ya droplet kwenye kioo hutumiwa. Ili kubaini kwa uhakika aina ya virusi vilivyotengwa na kutiririsha kingamwili kwenye sera, RTGA iliyopanuliwa huwekwa kwenye mirija ya majaribio au visima. Kwa kusudi hili, dilutions mara mbili ya sera huandaliwa katika suluhisho la kisaikolojia na hutolewa kwa 0.25 ml. Kwa dilutions za serum huongeza tone moja la nyenzo zilizo na virusi na tone moja la kusimamishwa kwa 1% ya seli nyekundu za damu.

Wakati wa kutumia RTGA kuamua aina ya virusi, sera ya aina maalum hutumiwa, ambayo huongezwa kwa kiasi sawa cha dilution ya kazi ya antijeni. Aina ya virusi vilivyotengwa imedhamiriwa na seramu maalum ya kinga ambayo ilionyesha kiwango cha juu zaidi cha antibodies kwa virusi hivi.

RGA na RTGA hutumiwa sana kugundua maambukizo ya virusi. encephalitis inayosababishwa na kupe, mafua, nk) ili kugundua antibodies maalum na kutambua virusi vingi kwa antijeni zao.

Kanuni ya RTGA linajumuisha kuchanganya kiasi sawa cha seramu ya damu na kusimamishwa kwa virusi kwenye tube ya mtihani na, baada ya kufidhiwa, kuamua ikiwa virusi hubakia kwenye mchanganyiko kwa kuongeza kusimamishwa kwa seli nyekundu za damu. Agglutination ya erythrocytes inaonyesha kuwepo, na kutokuwepo kwa hemagglutination kunaonyesha kutokuwepo kwa virusi katika mchanganyiko. Kutoweka kwa virusi kutoka kwa mchanganyiko wa virusi + wa seramu inachukuliwa kuwa ishara ya mwingiliano kati ya antibodies ya serum na virusi.

Lakini kingamwili huingiliana na antijeni kwa uwiano uliobainishwa madhubuti wa kiasi. Kwa hiyo, ili kiasi fulani cha virusi kunyimwa uwezo wake wa hemagglutinating, kiwango cha chini cha kingamwili kinahitajika, na kwa kuwa moja ya vipengele vya RTHA haijulikani daima, majibu yanapaswa kuwekwa katika mfululizo wa mirija ya majaribio yenye vipimo tofauti vya kingamwili na vipimo sawa vya virusi, au kinyume chake. Hii inafanikiwa kwa kuchukua au dilutions tofauti seramu na dilution sawa ya virusi, au dilutions tofauti ya virusi na dilution sawa ya serum.

RTGA inakuwezesha kutatua matatizo yafuatayo: kuamua titer ya antibodies kwa virusi vya hemagglutinating katika seramu; kutambua virusi vya hemagglutinating isiyojulikana kutoka kwa sera inayojulikana; kuanzisha kiwango cha uhusiano wa antijeni wa virusi viwili.

Manufaa ya RTGA: unyenyekevu wa mbinu, kasi, hakuna kazi tasa inahitajika, maalum, gharama nafuu. Hasara: RTGA inawezekana tu kwa virusi vya hemagglutinating.

Kanuni ya titration ya kingamwili katika RTGA ni kama ifuatavyo:

- tayarisha mfululizo wa dilutions za mfululizo (kawaida mara 2) za seramu ya mtihani kwa kiasi sawa (kawaida 0.25 au 0.2 ml);

- kwa kila dilution ongeza kiasi sawa cha virusi vya homologous katika titer ya 4 HAE;

- michanganyiko huwekwa kwa muda fulani kwa joto fulani (kwa virusi vya ugonjwa wa Newcastle dakika 40-60 kwenye joto la kawaida);

- kiasi sawa cha kusimamishwa kwa 1% ya erythrocytes iliyoosha huongezwa kwa mchanganyiko wote;

- baada ya kufichuliwa, hemagglutination katika kila mchanganyiko hupimwa katika misalaba.

Mmenyuko ni pamoja na udhibiti wa seramu, virusi na seli nyekundu za damu.

Myeyusho wa juu zaidi wa seramu ambao bado huzuia kabisa uvujaji damu huchukuliwa kama kiashiria cha kiwango cha kingamwili kwenye seramu hii.

Matumizi ya mmenyuko wa hemadsorption katika virology.

RGAd. Hemadsorption - uhusiano wa erythrocytes na uso wa seli zilizoathiriwa na virusi - iligunduliwa kwanza na Vogel na Shchelokov (1957) kwenye utamaduni wa tishu ulioambukizwa na virusi vya mafua. Jambo hili linatokana na mshikamano wa vipokezi vya virusi vilivyo kwenye uso wa seli iliyoathiriwa na vipokezi vya erithrositi, ambayo inaongoza kwa kushikamana kwao kwa pamoja sawa na mmenyuko wa hemagglutination. Faida ya mmenyuko huu ni kwamba inakuwa chanya hata kabla ya kuonekana kwa mabadiliko tofauti ya cytopathic katika seli zilizoambukizwa.

Mbinu ya RGAd ni kama ifuatavyo. Siku ya 3-4 baada ya kuambukizwa kwa seli, zilizopo mbili zilizo na utamaduni sawa wa seli huchukuliwa, moja ambayo imeambukizwa na nyenzo zenye virusi, na pili ni udhibiti. Kioevu cha kitamaduni hutolewa kutoka kwa zilizopo zote mbili na matone 2-3 ya kusimamishwa kwa 0.5% ya erythrocytes iliyoosha huongezwa kwa wote wawili. Mirija yote miwili huachwa kwa dakika 5-10 ili seli nyekundu za damu ziwe juu ya uso wa seli (zilizowekwa kwa usawa kwenye meza), na kisha kuoshwa kidogo na salini na kuchunguzwa chini ya darubini (ukuzaji wa chini). Katika bomba la kudhibiti, seli nyekundu za damu huondolewa kabisa na suluhisho la salini, na baadhi ya iliyobaki huelea pamoja na kioevu. Ikiwa seli nyekundu za damu katika tube iliyoambukizwa hazijaondolewa kwa ufumbuzi wa salini na hazielea, lakini zimeunganishwa kwenye uso wa seli, RGAd inapaswa kuchukuliwa kuwa chanya.

Kulingana na virusi na aina ya seli, mpangilio wa seli nyekundu za damu unaweza kuwa mara tatu:

- seli nyekundu za damu zinatangazwa tu kando ya safu ya seli kwa namna ya "mkufu" (virusi). janga la Kiafrika nguruwe);

- seli nyekundu za damu ziko kwenye safu ya seli katika foci au makundi (virusi vya mafua);

seli nyekundu za damu ziko kwenye safu ya seli (virusi vya parainfluenza).

Kila virusi ina uwezo wa kutangaza seli nyekundu za damu za aina fulani za wanyama.

Utambuzi wa serological wa magonjwa ya virusi kwa kuongezeka kwa titer ya antibody katika sera ya paired ya damu.

Mmenyuko wa Hemagglutination (HRA) na mmenyuko wa kuzuia hemagglutination (HIR), utaratibu, vipengele na matumizi ya athari.

Mmenyuko wa hemagglutination inategemea uzushi wa gluing ya seli nyekundu za damu, ambayo hutokea chini ya ushawishi wa mambo mbalimbali. Kuna hemagglutination ya moja kwa moja na isiyo ya moja kwa moja.

Kwanza, seli nyekundu za damu huoshawa na suluhisho la kloridi ya sodiamu ya isotonic, basi, ikiwa ni lazima (wakati wa kutumia antijeni za protini), hutibiwa na suluhisho la tanini la 1: 20,000 na kuhamasishwa na antijeni za mumunyifu. Baada ya kuosha na suluhisho la kloridi ya sodiamu ya isotonic, antijeni ya erithrositi iko tayari kutumika.

Sera ya mtihani hupunguzwa na ufumbuzi wa isotonic wa kloridi ya sodiamu katika zilizopo za mtihani au sahani maalum za plastiki zilizo na visima, kisha uchunguzi wa erythrocyte huongezwa kwa kila dilution ya seramu. Matokeo ya mmenyuko wa hemagglutination isiyo ya moja kwa moja huzingatiwa na asili ya sediment ya seli nyekundu ya damu inayoundwa chini ya tube ya mtihani. Matokeo ya mmenyuko ambayo seli nyekundu za damu hufunika kwa usawa sehemu ya chini ya bomba la mtihani huchukuliwa kuwa chanya. Katika kesi ya majibu hasi, seli nyekundu za damu katika mfumo wa diski ndogo au "kifungo" ziko katikati ya sehemu ya chini ya bomba la mtihani.

Sehemu kuu za RP:

A) antijeni mumunyifu,

B) Kingamwili maalum (serum)

(RTGA) ni njia ya kutambua virusi au kugundua kingamwili za kuzuia virusi katika seramu ya damu ya mgonjwa, kwa kuzingatia hali ya kutokuwepo kwa mkusanyiko wa seli nyekundu za damu na dawa iliyo na virusi mbele ya seramu ya damu inayokinga nayo.
ni msingi wa blockade, ukandamizaji wa antijeni za virusi na antibodies ya serum ya kinga, kama matokeo ya ambayo virusi hupoteza uwezo wao wa kuongeza seli nyekundu za damu.

RTGA hutumiwa kutambua magonjwa mengi ya virusi, mawakala wa causative ambayo (virusi vya mafua, surua, rubela, encephalitis inayosababishwa na tick, nk) inaweza kuongeza erythrocytes ya wanyama mbalimbali.
Utaratibu. Kuandika kwa virusi hufanywa kwa kutumia athari ya kuzuia hemagglutination (HAI) na seti ya sera maalum ya aina. Matokeo ya mmenyuko huzingatiwa kwa kutokuwepo kwa hemagglutination. Aina ndogo za virusi A na antijeni H0N1, H1N1, H2N2, H3N2, nk.

inaweza kutofautishwa katika RTGA na seti ya sera mahususi ya aina moja.

Katika msingi athari za hemagglutination uongo uzushi wa kujitoa kwa seli nyekundu za damu, ambayo hutokea chini ya ushawishi wa mambo mbalimbali.

Kuna hemagglutination ya moja kwa moja na isiyo ya moja kwa moja.
Katika mmenyuko wa moja kwa moja wa hemagglutination, chembe nyekundu za damu hushikamana wakati antijeni fulani, kama vile virusi, zinapowekwa kwenye hizo.
Katika masomo ya serological, mmenyuko wa moja kwa moja wa kuzuia hemagglutination hutumiwa, wakati virusi vinavyotengwa na mgonjwa hupunguzwa na serum maalum ya kinga na kisha kuunganishwa na seli nyekundu za damu.

Kutokuwepo kwa hemagglutination kunaonyesha uwiano wa virusi na serum ya kinga inayotumiwa.

Mmenyuko usio wa moja kwa moja wa hemagglutination (passive hemagglutination) huzingatiwa katika hali ambapo seramu ya kinga au seramu ya mgonjwa iliyo na antibodies zinazofaa huongezwa kwa seli nyekundu za damu ambazo zimetibiwa hapo awali (zimehamasishwa) na antijeni mbalimbali.

Gluing maalum ya seli nyekundu za damu hutokea, hemagglutination yao ya passive.

Mmenyuko wa hemagglutination usio wa moja kwa moja au tulivu ni bora katika unyeti na umaalumu kwa njia zingine za serolojia, na hutumiwa katika utambuzi wa maambukizo yanayosababishwa na bakteria, rickettsia na protozoa.

Njia ya kufanya mmenyuko wa hemagglutination isiyo ya moja kwa moja ina hatua kadhaa.

Kwanza, seli nyekundu za damu huoshawa na suluhisho la kloridi ya sodiamu ya isotonic, basi, ikiwa ni lazima (wakati wa kutumia antijeni za protini), hutibiwa na suluhisho la tanini la 1: 20,000 na kuhamasishwa na antijeni za mumunyifu.

Baada ya kuosha na suluhisho la kloridi ya sodiamu ya isotonic, antijeni ya erythrocyte iko tayari kutumika. Sera ya mtihani hupunguzwa na ufumbuzi wa isotonic wa kloridi ya sodiamu katika zilizopo za mtihani au sahani maalum za plastiki zilizo na visima, kisha uchunguzi wa erythrocyte huongezwa kwa kila dilution ya seramu.

Matokeo ya mmenyuko wa hemagglutination isiyo ya moja kwa moja huzingatiwa na asili ya sediment ya seli nyekundu ya damu inayoundwa chini ya tube ya mtihani. Matokeo ya mmenyuko ambayo seli nyekundu za damu hufunika kwa usawa sehemu ya chini ya bomba la mtihani huchukuliwa kuwa chanya. Katika mmenyuko mbaya, seli nyekundu za damu kwa namna ya diski ndogo au "kifungo" ziko katikati ya chini ya tube ya mtihani.

Mmenyuko wa kizuizi cha hemagglutination - mmenyuko wa serological, kwa kuzingatia uwezo wa antibodies ili kuzuia agglutination ya erythrocytes na aina ya hemagglutinating ya virusi (adenoviruses, arboviruses, enteroviruses fulani, virusi vya mafua na parainfluenza, surua, reoviruses).

Kingamwili maalum za kuzuia virusi huingiliana na molekuli za uso za hemagglutinini za virioni za virusi hivi na kuzuia kumfunga kwao kwa molekuli za ziada za membrane ya erithrositi.

KATIKA hivi majuzi mmenyuko hutumiwa sana katika maabara ya kliniki ya virology kuamua titers ya kingamwili maalum kwa virusi fulani, na pia kwa ajili ya kitambulisho cha serological na chapa ya hutenganisha virusi kutoka kwa nyenzo za kliniki kutoka kwa wagonjwa.

Matumizi yao ni mdogo kwa sababu ya uwepo katika seramu ya damu ya binadamu ya inhibitors zisizo maalum za virusi, pamoja na antibodies asili - agglutinins.

Mmenyuko wa neutralization ni mmenyuko wa kuzuia hemagglutination (HAI).

RTGA inatumika:
- kwa virusi vya serotyping;
- kwa serodiagnosis ya maambukizi.
Kuna njia mbili za kuweka:
- njia ya matone kwenye glasi ( majibu ya dalili), kutumika kwa virusi vya serocopying;
- kupanuliwa katika mirija ya majaribio.

Utaratibu.

Virusi vingine (kama vile mafua) vina hemagglutinin, ambayo husababisha kuunganishwa kwa seli nyekundu za damu za wanyama mbalimbali, kulingana na aina ya virusi.

Katika uwepo wa antibodies katika serum - antihemagglutinins, kuzuia shughuli za virusi huzingatiwa.
RTGA.
Kusudi: serotyping ya virusi vya mafua A

Vipengele:
1. Nyenzo zinazochunguzwa ni majimaji ya allantoic ya kiinitete cha kuku,
2. Sera ya uchunguzi wa aina mahususi ya kupambana na mafua,
3. 5% kusimamishwa kwa erythrocytes ya kuku.
4.

Suluhisho la saline.

Mmenyuko unafanywa kwenye glasi kwa kutumia njia ya kushuka. Omba tone 1 la sera ya uchunguzi na nyenzo za majaribio kwenye glasi, changanya, kisha ongeza tone 1 la kusimamishwa kwa seli nyekundu za damu. Kwa mmenyuko mzuri, uwekundu wa homogeneous huzingatiwa, na kwa athari mbaya, flakes nyekundu huanguka (hemagglutination).

Iliyotangulia31323334353637383940414243444546Inayofuata

Tabia za virusi vya mafua. Epidemiolojia na utambuzi wa mafua. Matumizi ya RTGA kwa serotyping ya virusi vya mafua. Maandalizi ya kuzuia na matibabu maalum.

Mafua au mafua - papo hapo ugonjwa wa kuambukiza, inayojulikana na uharibifu wa utando wa mucous wa juu njia ya upumuaji, homa, ulevi wa jumla, usumbufu wa mifumo ya moyo na mishipa na neva.

Influenza inakabiliwa na janga na kuenea kwa janga kutokana na maambukizi ya juu na kutofautiana kwa pathojeni.

Tabia za pathogens. Pathogens - virusi vya mafua ni ya familia. Orthomyxoviridae, genera Influenzavirus A, B na Influenzavirus C. Virusi vya mafua ni virusi vya RNA. Virusi vya homa ya aina A ilitengwa mwaka wa 1933 na W. Smith, K. Andrews, na P. Laidlaw. Mnamo 1940 T.

Utumiaji wa njia ya hemagglutination katika virology.

Francis na R. Magill walitenga virusi vya mafua ya aina B, mwaka wa 1949 R. Taylor - aina C. Katika Urusi, virusi vya mafua ya kwanza yalitengwa mwaka wa 1936 na A. A. Smorodintsev na kuainishwa kama aina A. Morphology. Virusi vya mafua vina sura ya spherical (umbo la mpira) - 80 - 120 nm, mara nyingi huwa na sura ya filamentous. Inajumuisha: 1) msingi - nucleocapsid ya aina ya helical ya ulinganifu (linear moja-stranded "-" strand ya RNA + capsid protini); 2) membrane ya chini - membrane ya nje ya lipoprotein - supercapsid.

Juu ya uso wa shell kuna glycoproteins (kwa namna ya spikes na villi) ya aina 2: 1) hemagglutinin - inakuza attachment kwa receptors kiini; 2) neuraminidase - inakuza kutolewa kwa virusi kutoka kwa seli. Kilimo. Kwa kilimo, viinitete vya kuku, tamaduni za seli za trypsinized, na wakati mwingine wanyama wa maabara hutumiwa.

Mfano unaofaa zaidi ni viini vya kuku 10-12 - siku za umri. Inakuwezesha kupata kiasi kikubwa cha virusi, ambayo ni muhimu katika uzalishaji wa chanjo na dawa za antibacterial.

Kuambukizwa hufanyika kwenye cavity ya allontoic, kwenye membrane ya chorion-allontoic, kwenye cavity ya amniotic, ndani ya amnion. Uwepo wa virusi katika kiinitete cha kuku hugunduliwa na mmenyuko wa hemagglutination. Muundo wa antijeni. Virusi vina antijeni ya ndani - S na antijeni za uso: HA-hemagglutinin na NA-neuraminidase. S-antigen ni maalum ya kikundi, ya kawaida kwa aina nzima, virusi vya mafua hugawanywa katika aina A, B na C. Hii ni antijeni inayosaidia, imara (isiyobadilika).

Antijeni za HA na NA ni antijeni maalum. Antijeni ya HA husababisha uundaji wa antibodies-neutralizing ya virusi na kushikamana kwa seli nyekundu za damu.

Antijeni ya NA husababisha uundaji wa kingamwili ambazo hupunguza kwa kiasi virusi.

Virusi vya aina B hazibadiliki sana, ilhali aina C ni thabiti sana.

Tabia za sumu. Athari ya sumu ya virusi kwenye mwili ( maumivu ya kichwa, maumivu ya misuli, joto, dalili za catarrha) husababishwa na protini za virusi (chembe ya virusi yenyewe). Kitendo hiki ni mahususi kabisa na hakijabadilishwa tu na seramu ya kinga ya aina inayofaa au aina ndogo au seramu ya wale ambao wamepona ugonjwa huo. Upinzani. Virusi vya mafua ni nyeti kwa mionzi ya UV, disinfectants (formalin, pombe, phenol, kloramine) na vimumunyisho vya mafuta.

Katika mazingira ya kioevu hufa kwa joto la 50 - 60 ° C kwa dakika kadhaa. Kwa joto la kawaida katika hewa, virusi huhifadhi mali ya kuambukiza kwa saa kadhaa. Wao hudumu kwa muda mrefu wakati wa kukaushwa, na wakati waliohifadhiwa (-70 ° C) sio tu kwa muda mrefu, lakini pia hawapotezi virulence.

Unyeti wa wanyama. Chini ya hali ya asili, virusi vya aina A huambukiza wanadamu na wanyama (farasi na nguruwe huathiriwa), wakati virusi vya aina B na C huambukiza wanadamu tu. Miongoni mwa wanyama wa maabara, panya nyeupe, feri za Kiafrika, hamster za Syria na nyani ni nyeti kwa virusi.

Ugonjwa huo katika wanyama una sifa ya uharibifu wa mapafu, hali ya homa na inaweza kusababisha kifo cha wanyama. Epidemiolojia ya ugonjwa huo. Chanzo cha maambukizi ni mtu mgonjwa na fomu ya kliniki inayotamkwa au isiyo na dalili. Mtu mgonjwa hutoa virusi ndani mazingira wakati wa kukohoa, kuzungumza, kupiga chafya na matone ya mate, kamasi, sputum tayari wakati wa incubation.

Mgonjwa huambukiza masaa 24 kabla ya kuanza kwa dalili kuu na husababisha hatari ya janga ndani ya masaa 48 baada ya kutoweka.

Utaratibu wa maambukizi ni aerogenic. Njia ya maambukizi ni ya anga. Uwezekano wa watu kwa mafua ni juu sana. Kila mtu anaugua makundi ya umri, hasa katika majira ya baridi. Watoto na wazee wanahusika zaidi. Jina la ugonjwa huonyesha upekee wa ugonjwa wa magonjwa: mafua kutoka kwa Kifaransa. gripper - kunyakua, mafua - kutoka kwa Italia. Influenza di freddo - ushawishi wa baridi.

Kati ya zote zenye viungo magonjwa ya kupumua homa ya mafua ndiyo iliyoenea zaidi na ugonjwa mbaya. Magonjwa ya milipuko na mafua hufunika hadi 30-50% au zaidi ya idadi ya watu. dunia, na kusababisha uharibifu mkubwa kwa afya na uchumi wa nchi. Maelezo ya kwanza ya magonjwa ya mafua yalianza karne ya 12-14. Tukio la magonjwa ya milipuko na magonjwa makubwa ya milipuko husababishwa na virusi vya mafua ya aina A, ambayo ni kwa sababu ya tofauti kubwa ya virusi na inahusishwa na kuibuka kwa aina mpya kama matokeo ya mabadiliko ya antijeni.

Kati ya magonjwa ya milipuko, milipuko ya janga hutokea kila baada ya miaka 1.5-2, ambayo inahusishwa na drift antijeni ya virusi. Mnamo 1918, janga la homa ya Uhispania (watu bilioni 1.5 waliugua, watu milioni 20 walikufa) ilisababishwa na virusi vya mafua ya A1 Hapo awali ilisajiliwa nchini Uhispania, janga hili lilifunika karibu watu wote wa Dunia; ugonjwa huo ulikuwa na sifa ya maendeleo ya pneumonia kali sana ya hemorrhagic na kiwango cha vifo vya rekodi (hadi 1% ya kesi zote).

Mnamo 1957, janga la "Asia" (watu bilioni 2 waliugua) lilisababishwa na aina mpya - subtype A2. Mnamo 1968, janga la "Hong Kong" (watu bilioni 1 waliugua) lilisababishwa na aina mpya ya aina mpya - A3. Kwa kawaida, lahaja mpya ya virusi huondoa lahaja iliyokuwa ikizunguka hapo awali kutoka kwa idadi ya watu.

Lakini mwaka wa 1977, baada ya mapumziko ya miaka 20, aina ya A1 bila kutarajia "ilirudi," ambayo ilisababisha janga kubwa. Kwa hivyo, lahaja zilizohamishwa za virusi vya mafua zinaendelea na, kwa vipindi fulani, zinaweza kusababisha tena janga. Virusi vya aina B husababisha magonjwa ya milipuko ya ndani, lakini aina C haisababishi magonjwa ya mlipuko. Pathogenesis na picha ya kliniki ya ugonjwa huo. Lango la kuingilia ni njia ya juu ya kupumua. Virusi huingilia seli za epithelial za membrane ya mucous na huzidisha ndani yao.

Athari za virusi kwenye seli za epithelial husababisha necrosis yao na desquamation (kukataliwa) ya epithelium, kama matokeo ya ambayo membrane ya mucous inakuwa ya kupenya kwa virusi na bakteria. Hupenya ndani ya damu na kusambaa katika mwili wote.”

KATIKA kesi kali Kutokwa na damu nyingi huzingatiwa kwenye mapafu, myocardiamu, na viungo vya parenchymal. Bidhaa za uharibifu wa seli zilizoharibiwa na protini za virusi zina athari ya sumu kwenye viungo na mifumo mbalimbali ya viungo. Sumu za virusi hukandamiza sana mfumo mkuu wa neva, na ingawa mchakato hauchukui muda mrefu (siku 3-5), mgonjwa hubaki dhaifu kwa muda mrefu na maambukizo mengine ya sekondari hujiunga na mwili dhaifu na shida huibuka: pneumonia ya mafua. , edema ya mapafu ya papo hapo, uharibifu wa figo , moyo, bronchi.

Matatizo ya kawaida ya mafua ni pneumonia ya bakteria (kundi B streptococci). Wakati wa janga la homa ya Uhispania, watu walikufa haswa kutokana na nimonia ya pili ya bakteria.

Katika pathogenesis ya mafua, si tu ulevi ni muhimu, lakini pia allergy, pamoja na ukiukwaji wa mali ya kazi ya seli immunocompetent na maendeleo ya immunodeficiency. Kipindi cha kuatema- masaa kadhaa - siku 1-3. Inaonyeshwa na mwanzo wa papo hapo, ongezeko la joto hadi 37.5 - 38 ° C, ulevi wa jumla, unaoonyeshwa na malaise, maumivu ya kichwa, maumivu katika tumbo. mboni za macho, michakato ya uchochezi njia ya kupumua ya ukali tofauti (rhinitis, laryngitis, tracheitis, pharyngitis).

Hali ya homa ya mafua bila matatizo hudumu siku 5-6. Kinga. Baada ya ugonjwa, kinga ya aina maalum na ya aina maalum huundwa, ambayo hutolewa na sababu maalum na zisizo maalum za seli na humoral. Thamani kubwa kuwa na antibodies ya Ig A haiendelei baada ya kuteseka na aina ya mafua A1, unaweza kupata aina ya mafua A2, nk. Baada ya virusi vya aina B, kinga hudumu miaka 1-2, baada ya virusi vya aina B - miaka 3-5.

Kinga ya asili ya passiv - kwa watoto chini ya miezi 8 - 11. Kutokana na tofauti kubwa ya antijeni ya virusi, urejesho hauongoi maendeleo ya kinga imara kwa maambukizi ya mara kwa mara.

Uchunguzi wa maabara. Nyenzo zinazochunguzwa: smears-imprints kutoka kwa membrane ya mucous ya cavity ya pua, kutokwa kwa nasopharyngeal, vipande vya mapafu, ubongo katika kesi ya kifo.

Njia za uchunguzi: 1) njia ya cytorinoscopy - kugundua inclusions za intracellular maalum kwa virusi - wakati unasababishwa na pyoctanini chini ya darubini, inclusions nyekundu nyekundu ya virusi vya mafua huonekana kwenye seli za epithelium ya ciliary; 2) njia ya virusi - kutengwa kwa virusi vya mafua kutoka kwa mwili wa binadamu kwa kuambukiza viini vya kuku na swab kutoka kwa nasopharynx ya mgonjwa; dalili (uwepo) wa virusi unafanywa kwa kutumia RGA (virusi vya mafua agglutinate erythrocytes ya binadamu na wanyama mbalimbali), kitambulisho cha virusi hufanyika kwa hatua: aina imedhamiriwa katika RSC, aina ndogo ya hemagglutinin imedhamiriwa. RGA, na aina ndogo ya neuraminidase imedhamiriwa katika mmenyuko wa kuzuia shughuli za enzyme; 3) njia ya serological - kugundua ongezeko la titer (mara 4) ya antibodies maalum katika seramu ya damu ya mgonjwa kwa kutumia RSK, RTGA, RN katika utamaduni wa seli, mmenyuko wa mvua katika gel, ELISA; 4) njia ya kibiolojia - maambukizi ya intranasal ya panya - sindano ya nyenzo kwenye mapafu chini ya anesthesia ya ether; panya hufa baada ya siku 2-3 kama matokeo ya pneumonia; 5) uchunguzi wa haraka - kugundua antijeni ya virusi kwa kutumia RIF.

Matibabu na kuzuia.

Kwa kuzuia na matibabu katika siku za kwanza za ugonjwa huo, interferon ya leukocyte ya binadamu hutumiwa (intranasally). KATIKA madhumuni ya dawa kutumia dawa za kuzuia virusi- remantadine (aina ya mafua A), adapromine, virazole na dawa za kinga - dibazole, prodigiosan, levamisole.

Saa kozi kali kwa mafua, hasa kwa watoto, immunoglobulin ya wafadhili ya kupambana na mafua hutumiwa, pamoja na madawa ya kulevya - inhibitors ya proteases ya seli (Gordox, Contrical, aminocaproic acid).

Kuzuia maalum. Dawa zifuatazo za antiviral na immunomodulators hutumiwa, pamoja na chanjo - hai na inactivated: 1) kuishi monovaccines kwa ajili ya matumizi ya mdomo - attenuated aina ya virusi sasa zinazozunguka (A1, A3 na B); kuonyesha immunogenicity kubwa; 2) chanjo ya virion nzima kutoka kwa matatizo ya virusi isiyofanywa na formaldehyde au mionzi ya UV; 3) chanjo za mafua ya subunit tu kutoka kwa antijeni za uso - antijeni za HA na NA (zina reactogenicity ndogo).

Ili kupata chanjo, virusi hupandwa kwenye viinitete vya kuku na katika tamaduni za seli za kiinitete cha kuku.

Wakati chanjo inasimamiwa, ndani na kinga ya humoral. Chanjo hufanywa wakati wa hatari kubwa ya magonjwa ya milipuko. Mara nyingi huonyeshwa kwa vijana na wazee. Matumizi ya chanjo zilizouawa inahitaji revaccination ya kila mwaka; ufanisi wao hauzidi 60 - 70%.

Kwa sababu Kwa kuwa tofauti za antijeni za pathojeni mara nyingi huzingatiwa, seti ya antigens ya virusi inayofanana kwa ajili ya chanjo inaweza kuamua tu baada ya kuzuka kwa ugonjwa huo kuanza.

Tikiti 15.

Mmenyuko wa Hemagglutination (HRA).

Katika maabara, athari mbili za hemagglutination na mifumo tofauti ya hatua hutumiwa.

RGA ya kwanza ni serological. Katika mmenyuko huu, seli nyekundu za damu zinaunganishwa wakati wa kuingiliana na antibodies zinazofaa (hemagglutinins).

Mmenyuko hutumiwa sana kuamua vikundi vya damu.

RGA ya pili sio serological. Ndani yake, kujitoa kwa seli nyekundu za damu hakusababishwa na

antibodies, lakini vitu maalum vinavyotengenezwa na virusi. Kwa mfano, virusi vya mafua huzidisha seli nyekundu za damu ya kuku na nguruwe za Guinea, virusi vya polio - seli nyekundu za damu za kondoo. Mmenyuko huu hufanya iwezekanavyo kuhukumu uwepo wa virusi fulani katika nyenzo zinazojifunza.

Mmenyuko unafanywa katika zilizopo za mtihani au kwenye sahani maalum zilizo na visima.

Nyenzo zilizojaribiwa kwa uwepo wa virusi hupunguzwa na suluhisho la isotonic kutoka 1:10 hadi 1:1280; 0.5 ml ya kila dilution imechanganywa na kiasi sawa cha 1-2% ya kusimamishwa kwa seli nyekundu za damu. Katika udhibiti, 0.5 ml ya erythrocytes huchanganywa na 0.5 ml ya suluhisho la isotonic. Mirija ya majaribio huwekwa kwenye thermostat kwa dakika 30, na sahani huachwa kwenye joto la kawaida kwa dakika 45.

Uhasibu kwa matokeo. Ikiwa majibu ni chanya, mashapo ya seli nyekundu za damu na kingo zilizopigwa ("mwavuli") huonekana chini ya bomba la mtihani au kisima, kinachofunika sehemu yote ya chini ya kisima.

Mmenyuko wa kizuizi cha hemagglutination

Ikiwa matokeo ni hasi, seli nyekundu za damu huunda sediment mnene na kingo laini ("kifungo"). Sediment sawa inapaswa kuwa katika udhibiti.

Nguvu ya athari inaonyeshwa na ishara "+". Titer ya virusi ni dilution ya juu ya nyenzo ambayo agglutination hutokea.

Mmenyuko wa kizuizi cha hemagglutination

Hii ni mmenyuko wa serological ambayo antibodies maalum ya antiviral, kuingiliana na virusi (antigen), kuipunguza na kuizuia uwezo wa agglutinate seli nyekundu za damu, i.e.

e. kuzuia mmenyuko wa hemagglutination. Mmenyuko huu hukuruhusu kuamua aina na aina ya virusi.

Kuanzisha majibu. 0.25 ml ya seramu ya antiviral imechanganywa na kiasi sawa cha nyenzo zilizo na virusi. Mchanganyiko huo hutikiswa na kuwekwa kwenye thermostat kwa dakika 30, baada ya hapo 0.5 ml ya 1-2% ya kusimamishwa kwa seli nyekundu za damu huongezwa.

Uhasibu kwa matokeo. Saa nafasi sahihi uzoefu katika ufuatiliaji wa seramu na erythrocytes, "kifungo" kinapaswa kuunda - hakuna sababu ya erythrocyte agglutinating; katika udhibiti wa antijeni, "mwavuli" huundwa - virusi vilisababisha mkusanyiko wa seli nyekundu za damu.

Ikiwa seramu ni sawa na virusi vinavyosomwa, "kifungo" huundwa - seramu imepunguza virusi.

Mmenyuko wa hemagglutination isiyo ya moja kwa moja

Mmenyuko usio wa moja kwa moja (passive) wa hemagglutination (RIHA) unatokana na ukweli kwamba seli nyekundu za damu, ikiwa antijeni ya mumunyifu imetangazwa kwenye uso wao, hupata uwezo wa kujilimbikiza wakati wa kuingiliana na antibodies kwa antijeni ya adsorbed.

Kuanzisha majibu.

Seramu huwashwa kwa dakika 30 kwa 56 ° C, diluted sequentially katika uwiano wa 1:10 - 1:1280 na hutiwa ndani ya mirija 0.25 ml au visima, ambapo matone 2 ya seli nyekundu za damu na antijeni adsorbed juu yao ni kisha aliongeza.

Vidhibiti: kusimamishwa kwa erythrocytes na antijeni zilizowekwa juu yao na seramu ya kinga ya wazi, kusimamishwa kwa erythrocytes na antijeni zilizowekwa juu yao na serum ya kawaida; kusimamishwa kwa seli nyekundu za damu za kawaida na serum ya mtihani.

Katika udhibiti wa kwanza, agglutination inapaswa kutokea, katika pili na ya tatu haipaswi kutokea.

Maswali ya mtihani.

1. Matokeo chanya ya uchambuzi wa X-ray yanaonyesha nini kati ya seli nyekundu za damu na nyenzo zinazojaribiwa kwa uwepo wa virusi?

2. Je, mmenyuko wa agglutination wa seli nyekundu za damu utatokea ikiwa virusi na serum yake inayofanana huongezwa kwao?

Ni nini jina la majibu ambayo yanaonyesha jambo hili?

KAZI YA VITENDO Na. 12.

Inayosaidia mmenyuko wa kurekebisha.

Mmenyuko wa urekebishaji kikamilisho (CFR) unatokana na ukweli kwamba changamano maalum ya antijeni-antibody daima hujitangaza (hufunga) inayosaidia yenyewe.

Mmenyuko huu hutumiwa sana katika utambuzi wa antijeni na katika utambuzi wa maambukizo, haswa magonjwa yanayosababishwa na spirochetes (majibu ya Wassermann), rickettsia na virusi.

RKS ni mmenyuko changamano wa kiserolojia.

Inahusisha inayosaidia na mifumo miwili ya antijeni-antibody. Kimsingi, hizi ni athari mbili za serolojia.

Mfumo mkuu wa kulia una antijeni na antibody (moja inajulikana, nyingine sio). Kiasi fulani cha nyongeza huongezwa kwake. Ikiwa antijeni na kingamwili za mfumo huu zinalingana, zitaunganisha na kuunganisha pongezi. Mchanganyiko unaosababishwa hutawanywa vizuri na hauonekani.

Uundaji wa tata hii hugunduliwa kwa kutumia mfumo wa pili wa hemolytic au kiashiria.

Inajumuisha seli nyekundu za damu za kondoo (antigen) na serum ya hemolytic inayofanana (antibody), i.e. tata ya kinga iliyo tayari. Katika mfumo huu, lysis ya seli nyekundu za damu inaweza kutokea tu mbele ya inayosaidia. Ikiwa inayosaidia imefungwa na mfumo wa kwanza, basi katika mfumo wa pili hakutakuwa na hemolysis, kwa sababu

hakuna nyongeza ya bure. Kutokuwepo kwa hemolysis (yaliyomo kwenye bomba ni mawingu au kuna sediment ya erythrocytes chini) ni kumbukumbu kama matokeo mazuri ya RSC.

Ikiwa katika mfumo wa kwanza antijeni hailingani na antibody, basi tata ya kinga haitaunda na inayosaidia itabaki bure. Kubaki bure, pongezi inashiriki katika mfumo wa pili, na kusababisha hemolysis, matokeo ya RSC ni hasi (yaliyomo kwenye mirija ni wazi - "damu ya lacquered").

Vipengele, inayosaidia athari za urekebishaji:

Antijeni - kawaida lysate, dondoo, hapten,

chini ya mara nyingi kusimamishwa kwa microorganisms.

2. Antibody - serum ya mgonjwa.

3. Kusaidia - serum ya nguruwe ya Guinea.

Antijeni - seli nyekundu za damu za kondoo.

5. Antibody - hemolysin kwa erythrocytes kondoo.

6. Suluhisho la isotonic.

Kutokana na ukweli kwamba RSK inashiriki idadi kubwa vipengele tata,

lazima kwanza ziainishwe na zichukuliwe katika majibu kwa idadi kamili na kwa viwango sawa: 0.5 au 0.25, chini ya 0.2, 1.25 au 1.0 ml (kiasi kikubwa hutoa matokeo sahihi zaidi). Titration ya vipengele vya majibu hufanyika kwa kiasi sawa na jaribio, na kuchukua nafasi ya viungo vilivyokosekana na suluhisho la isotonic.

Taarifa zinazohusiana:

Tafuta kwenye tovuti:

Inategemea ukweli kwamba seli nyekundu za damu, ambazo antijeni zilitangazwa hapo awali, hupata uwezo wa kuongezeka mbele ya sera ya homologous (antibodies).

Katika kesi hii, seli nyekundu za damu hufanya kama wabebaji wa viashiria maalum, mkusanyiko wa ambayo hutokea kama matokeo ya mmenyuko wa antijeni + antibody.

Seli nyekundu za damu kwenye uso ambao antijeni zimeunganishwa kwa nguvu huitwa uchunguzi wa antijeni ya erithrositi, au erithrositi zinazohamasishwa na antijeni.

Aina nyingine ya RNGA - antibodies ni adsorbed juu ya uso wa erythrocytes na agglutination yao baadae hutokea mbele ya antijeni homologous.

Katika kesi hiyo, erythrocytes vile huitwa erythrocyte antibody diagnosticum, au erythrocytes kuhamasishwa na antibodies.

Kulingana na mbinu hizi mbili za kimsingi za mbinu, marekebisho mengi ya RNGA yametengenezwa na kutumika. Kwa hivyo, chembe ndogo za kawaida za mpira hutumiwa kama wabebaji.

Mmenyuko wa kuzuia Hemagglutination (HAI)

Katika kesi hii, majibu huitwa latex agglutination reaction (RLA) au hutumiwa Staphylococcus aureus- mmenyuko wa coagglutination, nk Kawaida, uchunguzi wa erythrocyte huandaliwa katika makampuni ya biashara ya kibiolojia, na uzoefu kuu wa RNGA unafanywa katika maabara ya uchunguzi.

Maandalizi ya uchunguzi wa erythrocyte ni pamoja na hatua zifuatazo:

• fixation ya seli nyekundu za damu na formaldehyde au glutaric au aldehydes akriliki.

  Seli nyekundu za damu kama hizo huhifadhiwa kwa muda mrefu. Mara nyingi, erythrocytes kutoka kwa kondoo, wanadamu, kuku, nk hutumiwa kwa kusudi hili;

• matibabu ya erythrocytes fasta na ufumbuzi wa tannin. Kama matokeo, seli nyekundu za damu hupata uwezo wa kutangaza protini (virusi na antibodies) kwenye uso wao;
• uhamasishaji wa erythrocytes tanized na virusi au antibodies.

Ikumbukwe kwamba mbinu za kuandaa uchunguzi wa erythrocyte kwa maambukizi ya virusi ni tofauti.

Utaratibu wa kufanya RNGA kugundua na kuamua titer ya kingamwili ni kama ifuatavyo.

• dozi sawa za erythrocytes zilizohamasishwa na antijeni huongezwa kwa dilutions mara 2 mfululizo ya seramu;
• mchanganyiko umesalia kwa masaa 2-3 kwa joto la kawaida au kwa masaa 16-18 saa 4 ° C;
• kuzingatia matokeo.

  Ikiwa seramu ina antibodies kwa virusi ambayo seli nyekundu za damu zilihamasishwa, hemagglutination inazingatiwa, ambayo inapimwa katika misalaba.

Tita ya kingamwili katika seramu inachukuliwa kuwa myeyusho wa juu zaidi wa seramu ambayo bado hutoa hemagglutination kwa angalau misalaba miwili.

RGA inaambatana na vidhibiti vyote vinavyohusika. Kawaida mmenyuko unafanywa kwa kutumia micromethod.

RGA hukuruhusu kutatua shida zifuatazo za utambuzi:

• kuchunguza antibodies na kuamua titer yao katika serum ya damu kwa kutumia diagnosticum ya antijeni ya erythrocyte;
• kugundua na kutambua virusi visivyojulikana kwa kutumia uchunguzi unaojulikana wa kingamwili ya erithrositi.

Faida za RNGA: unyeti mkubwa, unyenyekevu wa mbinu ya uwekaji na kasi ya majibu.

Hata hivyo, ni muhimu kutambua kwamba matatizo makubwa hutokea katika maandalizi ya uchunguzi wa seli nyekundu za damu ( utegemezi mkubwa juu ya usafi wa vipengele vilivyotumiwa, haja ya kuchagua njia ya kurekebisha, tanization na uhamasishaji wa erythrocytes kwa kila aina ya virusi).

Ukipata hitilafu, tafadhali chagua kipande cha maandishi na ubofye Ctrl+Enter.

Wanafunzi wenzako

Inatumia seli nyekundu za damu au vifaa vya synthetic vya neutral (kwa mfano, chembe za mpira), juu ya uso ambao antijeni (bakteria, virusi, tishu) au antibodies hupigwa.

Agglutination yao hutokea wakati sera sahihi au antijeni zinaongezwa. Seli nyekundu za damu zinazohamasishwa na antijeni huitwa uchunguzi wa erithrositi ya antijeni na hutumiwa kugundua na kutikisa kingamwili. Erythrocytes huhamasishwa na antibodies. huitwa uchunguzi wa immunoglobulin erithrositi na hutumiwa kugundua antijeni.

Mwitikio hemagglutination passiv hutumika kugundua magonjwa yanayosababishwa na bakteria ( homa ya matumbo na homa ya paratyphoid, kuhara damu, brucellosis, tauni, kipindupindu, nk), protozoa (malaria) na virusi (mafua, maambukizo ya adenoviral, hepatitis B ya virusi, surua, encephalitis inayosababishwa na tick, Crimean homa ya damu nk), na pia kwa kuamua baadhi ya homoni, kutambua hypersensitivity mgonjwa kwa dawa na homoni, kama vile penicillin na insulini.

Mmenyuko wa hemagglutination (RPHA).

Mtihani wa hemagglutination wa passiv ni njia nyeti ya uchunguzi wa serological na hutumiwa kwa uchunguzi wa mapema na wa nyuma, na pia kuamua hali ya immunopogic ya watu walio chanjo. Kwa wagonjwa walio na tularemia, antibodies kawaida hugunduliwa mwishoni mwa wiki ya 1 au 2 ya ugonjwa huo baada ya miezi 1-1.5, viwango vya RPHA hufikia viwango vya juu (1: 100,000-1: 20,000, chini ya mara nyingi zaidi), baada ya hapo hufikia kiwango cha juu; kupungua kwa kiwango cha 1: 100-1: 200 huhifadhiwa kwa muda mrefu.

Katika watu walio chanjo, antibodies pia hugunduliwa mara kwa mara, hata hivyo, katika viwango vya chini, sio zaidi ya 1: 2000-1: 5000 miezi 1-1.5 baada ya chanjo, na kubaki kwa miaka kadhaa kwa kiwango cha chini cha 1:20-1:80.

Antijeni ya kufanya RPHA ni tularemia erithrositi diagnosticum (antijeni).

Dawa ya kulevya ni seli nyekundu za damu za kondoo, zimehamasishwa na antijeni ya tularemia, inapatikana katika fomu ya kioevu na kavu. Maandalizi ya kioevu - kusimamishwa kwa 10% ya seli nyekundu za damu katika suluhisho la formaldehyde la mkusanyiko wa 10%. Maandalizi ya lyophilized kavu ni kusimamishwa kwa utupu kwa 10% ya seli nyekundu za damu bila kihifadhi. Kabla ya matumizi, hupunguzwa kulingana na maelekezo kwenye lebo. Ili kutekeleza majibu katika sahani za polystyrene, dawa zote mbili hutumiwa katika mkusanyiko wa 2.5%, na wakati wa kufanya majibu katika microvolumes - katika mkusanyiko wa 0.5%.

Mbinu ya kusanidi RPGA.

Sera ya majaribio imepunguzwa suluhisho la saline 1:5 (1:10) na joto kwa nyuzi 56 C kwa dakika 30.

Mmenyuko wa Hemagglutination (HRA) na

Baada ya hayo, ili kuondoa antibodies tofauti kwa erythrocytes ya kondoo, sera inatibiwa na kusimamishwa kwa 50% ya erythrocytes ya kondoo rasmi. Ili kufanya hivyo, ongeza seli nyekundu za damu kwa kiwango cha matone 2 (0.05 ml) kwa 1 ml ya seramu na kuchanganya vizuri kwa kutetemeka.

Seramu imesalia mpaka erythrocytes imekaa kabisa, au ni centrifuged baada ya saa moja kwenye joto la kawaida, baada ya hapo iko tayari kwa uchunguzi.

Kioevu cha dilution hutiwa kwa kiasi cha 0.5 ml kwenye safu ya visima kwenye sahani ya polystyrene.

Saa utafiti wa awali Inashauriwa kupima sera kwa kuanzisha majibu katika safu fupi ya sahani (6-visima). Ikiwa kingamwili hugunduliwa katika mfululizo mfupi, sera hiyo inajaribiwa tena katika mfululizo mrefu wa dilutions (visima 12).

Baada ya kumwaga kioevu cha dilution, ongeza 0.5 ml ya sera ya majaribio katika dilution ya 1: 5 kwenye kisima cha kwanza cha kila safu (fupi au ndefu). Kisha kiasi sawa cha seramu hupunguzwa na dilutions mbili. Kwa hivyo, dilutions ya serum hupatikana katika mfululizo mfupi kutoka 1:10 hadi 1:320, na katika mfululizo mrefu kutoka 1:10 hadi 1:20480. Baada ya titration ya sera, tone moja (0.05 ml) ya kusimamishwa kazi 2.5% ya erythrocytes kuhamasishwa huongezwa kwa kila kisima.

Yaliyomo ya sahani yanatikiswa kabisa hadi kusimamishwa kwa homogeneous kunapatikana. Sahani zimeachwa kwenye joto la kawaida kwenye uso wa meza ya stationary. Rekodi ya awali ya majibu hufanyika baada ya masaa 2-3, uamuzi wa mwisho wa titer unafanywa baada ya sedimentation kamili ya seli nyekundu za damu kwenye visima. Udhibiti wafuatayo hutolewa kwa mmenyuko: 1) seramu ya mtihani diluted 1:10 kwa kiasi cha 0.5 ml + 1 tone la kusimamishwa kwa 2.5% ya erythrocytes zisizo na unyeti; 2) kioevu cha dilution kwa kiasi cha 0.5 ml + tone 1 la kusimamishwa kwa 2.5% ya erythrocytes isiyo na unyeti; 3) kioevu cha dilution kwa kiasi cha 0.5 ml + tone 1 la kusimamishwa kwa 2.5% ya erythrocytes iliyohamasishwa.

Vidhibiti vyote vinapaswa kutoa majibu hasi wazi.

Uhasibu na tathmini ya RPGA. Majibu yanapimwa kulingana na mpango ufuatao:

1) kwa kasi majibu chanya(++++) - seli nyekundu za damu huanguka chini ya shimo kwenye safu hata kwa namna ya "mwavuli", ambayo mara nyingi huwa na kuyeyuka kwa kingo;

2) mmenyuko mzuri (+++) - seli nyekundu za damu hufunika angalau 2/3 ya chini ya kisima;

3) athari chanya dhaifu (++) - agglutinate ni ndogo na iko katikati ya kisima;

4) majibu ya shaka (+) - karibu na mchanga wa erythrocytes katikati ya kisima kuna nafaka za kibinafsi za agglutinate;

5) hasi (-) - chini ya shimo, seli nyekundu za damu hukaa kwa namna ya "kifungo" au pete ndogo yenye kingo laini, kilichoelezwa kwa ukali.

Titer ya serum inazingatiwa kulingana na dilution ya mwisho ya seramu, ambayo ilitoa majibu ya wazi sana (angalau pluses tatu).

Dilution ya 1:100 au zaidi inachukuliwa kuwa titer ya uchunguzi; hata hivyo, kama ilivyo kwa RA, ni muhimu kufuatilia ongezeko lake.

RPHA ya tularemia ni mahususi kabisa na hutambua baadhi ya miitikio mtambuka kwa kutumia sera ya brucellosis. Utambuzi tofauti iwezekanavyo kwa urefu wa titers katika RPGA, ambayo ni ya juu zaidi na antijeni ya homologous.

Mbinu ya kusanidi RPHA katika kiasi kidogo.

RPGA inaweza kufanywa kwa kiasi kidogo kwa kutumia microtitrator ya aina ya Takachi (au microplates za pande zote zilizo na micropipettes), ambayo inaruhusu titration ya nyenzo kwa kiasi cha 25 μl na 50 μl. Mbinu ya majibu na mlolongo wa shughuli zote ni sawa na wakati wa kusoma katika sahani za polystyrene. Ikumbukwe, hata hivyo, kwamba unyeti wa micromethod kawaida ni dilution moja (yaani.

Mara 2) chini kuliko macromethod.

Ili kusanidi majibu katika microtitrator, kioevu cha dilution katika kiasi cha 50 µl huongezwa kwa kila kisima kwa kutumia dropper ya pipette. Kisha, kwa kutumia titrators yenye kichwa cha 50 μl, seramu ya mtihani inakusanywa kwa kuzama kichwa ndani yake.

Hakikisha kwamba kioevu kimejaza kichwa cha titrator. Titrator iliyo na seramu huhamishiwa kwenye kisima cha kwanza na, ikishikilia ndani nafasi ya wima, fanya harakati kadhaa za mzunguko katika pande zote mbili. Kisha titrator huhamishiwa kwenye kisima kinachofuata na kudanganywa hurudiwa. Titration inaweza kufanyika wakati huo huo katika safu kadhaa. Baada ya kuweka safu nzima, mtangazaji huosha na maji yaliyosafishwa (kubadilisha sehemu 2) kwa harakati zinazozunguka, maji hutolewa kutoka kwa kichwa kwa kutumia swab na kuchomwa moto kwenye moto wa kuchoma.

Baada ya titration, ongeza 25 μl ya maji ya uchunguzi wa erythrocyte kwenye visima.

Mkusanyiko wa uchunguzi wa RPHA katika microvolumes unapaswa kuwa 0.5% (yaani, kusimamishwa kwa 2.5% ya seli nyekundu za damu kunapunguzwa mara 5). Baada ya kuongeza seli nyekundu za damu, sahani zinapaswa kutikiswa kidogo hadi kusimamishwa kwa homogeneous kunapatikana. Matokeo yanaweza kurekodi ndani ya masaa 1-1.5, ambayo ni faida kubwa ya RPGA katika microtiter.

Kwa kuongeza, mbinu hii inahitaji kiasi kidogo cha viungo vyote vya majibu na sera ya mtihani.

Majibu yanazingatiwa kulingana na mpango ufuatao:

1) "+" - hemagglutination kamili, ambayo seli nyekundu za damu huanguka chini ya kisima katika safu hata kwa namna ya "mwavuli", inachukua angalau 2/3 ya chini;

2) "+-" - hemagglutination ya sehemu, ambayo seli nyekundu za damu huanguka chini kwa namna ya pete huru ya ukubwa mdogo;

3) "-" - kutokuwepo kwa hemagglutination, wakati seli nyekundu za damu zinaanguka chini kwa namna ya kifungo kidogo au pete yenye makali laini.

Umuhimu wa matokeo mazuri yaliyopatikana katika RPHA yanaweza kujaribiwa kwa kutumia majibu ya vipengele vitatu - mmenyuko wa kuzuia hemagglutination (PHA).

Mbinu ya kusanidi RTPGA.

Mwitikio huu hutumika kuthibitisha umahususi wa matokeo chanya ya RPGA wakati yana shaka au yana maslahi mahususi ya magonjwa. Utaratibu wa mmenyuko ni kizuizi maalum cha hemagglutination wakati kusimamishwa kwa bakteria ya tularemia iliyouawa inaongezwa kwenye seramu ya mtihani. Vipengele vitatu vinaingiliana katika majibu: seramu ya mtihani, antijeni maalum ya tularemia na uchunguzi wa erithrositi ya antijeni RTPHA kawaida huwekwa kwenye safu ya visima 7-8.

Inashauriwa kusakinisha RPGA inayorudiwa sambamba na RTPGA. 0.25 ml ya kioevu cha dilution hutiwa ndani ya safu mbili za visima, kisha seramu ya mtihani kwa kiasi cha 0.25 ml huongezwa kwenye visima vya kwanza vya safu zote mbili na safu mbili zinazofanana za dilutions za serum hupatikana. Ongeza 0.25 ml ya kioevu cha dilution kwenye visima vyote vya mstari wa pili, na 0.25 ml ya kusimamishwa kwa bakteria ya tularemia kwenye visima vya mstari wa kwanza.

Uchunguzi wa Tularemia hutumiwa (iliyo na bakteria ya tularemia bilioni 25 katika 1 ml), iliyopunguzwa hapo awali mara 50.

Kusimamishwa huku kuna bakteria milioni 500 katika 1 ml au milioni 125 kwa kiasi cha 0.25 ml. Baada ya kuongeza antijeni, sahani imesalia kwa saa 1 kwa joto la kawaida, baada ya hapo tone moja (0.05 ml) ya uchunguzi wa erythrocyte huongezwa kwenye visima vyote vya safu zote mbili, sahani inatikiswa na kushoto kwenye uso wa meza ya gorofa.

Uhasibu unafanywa baada ya masaa 2-3.

Uhasibu na tathmini ya RTPGA. Ikiwa seramu ya majaribio ina kingamwili maalum za tularemia, hazitabadilishwa na antijeni iliyoongezwa na hemagglutination haitatokea kwenye safu ya kwanza ya visima, au, kwa kiwango cha juu cha serum, hemagglutination itazingatiwa katika idadi ndogo (2-4) ya. visima kuliko kwenye safu na RPHA. Katika kesi hii, maalum ya matokeo ilithibitishwa.

Ikiwa hemagglutination inajulikana katika safu zote mbili, i.e. Ikiwa matokeo ya RTPGA na RPGA yanapatana, hii inaonyesha kutokuwepo kwa antibodies ya tularemia katika seramu ya mtihani. Katika kesi hii, matokeo ya msingi ya RPGA inachukuliwa kuwa sio maalum.

Mbinu ya kuweka RTHG katika vijisaidizi vidogo. RTPGA, kama RPGA, inaweza kufanywa kwa sauti ndogo kwa kutumia microtiter ya aina ya Takachi.

Ili kufanya hivyo, ongeza 0.25 μl ya kioevu cha diluting ndani ya visima vya microplates katika safu mbili za visima 7-8 kila mmoja. Kisha, kwa kutumia titrator, 0.25 μl ya seramu ya mtihani huongezwa na kuweka alama katika safu zote mbili. Baada ya hayo, 25 μl ya antijeni ya tularemia (mkusanyiko ambao ni milioni 500 bakteria ya tularemia katika 1 ml) huongezwa kwa kila kisima katika mstari wa kwanza, na 25 μl ya kioevu cha dilution huongezwa kwenye safu ya pili.

Sahani zimesalia kwa saa 1 kwa joto la kawaida, baada ya hapo 25 μl ya uchunguzi wa antigenic zritrocytic (mkusanyiko wa 0.5%) huongezwa kwa visima vyote vya safu zote mbili.

Uhasibu na tathmini ya matokeo hufanyika sawa na athari katika macrovolumes.

Tarehe ya kuchapishwa: 2015-02-03; Soma: 3176 | Ukiukaji wa hakimiliki ya ukurasa

studopedia.org - Studopedia.Org - 2014-2018 (sek.0.003)…

Kuna njia nyingi za ubora na quantification antibodies maalum ya virusi. Kutumia njia hizi, unaweza kugundua IgM na IgG zote mbili wakati huo huo, na immunoglobulins tofauti za kila darasa. Kama sheria, IgG maalum ya virusi pekee hugunduliwa katika mmenyuko wa kurekebisha inayosaidia. Hata hivyo, wakati wa kupima antijeni za microbiological kwa njia hii, inawezekana wakati huo huo kuamua IgM maalum na IgG.

Mbinu za kinga hutumiwa hasa kwa madhumuni mawili: kwanza, kutambua maambukizi ya virusi ya sasa, iliyokamilishwa au ya kuzaliwa na, pili, kuchunguza antibodies maalum, uwepo wa ambayo inaonyesha maambukizi ya zamani na, kwa hiyo, kinga ya iwezekanavyo. kuambukizwa tena. Watu hutofautiana sana katika nguvu ya majibu yao ya kinga kwa maambukizi ya virusi. Katika Mtini. Mchoro wa 3 unaonyesha mkunjo wa kawaida wa titer

antibodies katika kukabiliana na maambukizi ya msingi ya rubella. Ni rahisi kutambua kwamba uchunguzi wa rubella inawezekana kwa kuongeza titer ya IgG maalum na kutambua IgM maalum. Uwepo wa IgM maalum katika damu ya mtoto mchanga unaonyesha maambukizi ya intrauterine, kwani IgM ya uzazi, tofauti na IgG, inahifadhiwa na placenta. IgG maalum inayozalishwa kama matokeo ya maambukizi ya msingi kawaida huendelea katika maisha yote. Kwa hiyo, kuwepo kwa antibodies ya darasa hili katika serum ya damu inaonyesha kinga kwa maambukizi yanayofanana ya mara kwa mara.

Chini ni mbinu za immunological za kuchunguza antibodies maalum kwa virusi vya rubela, ambazo zinafaa hasa kwa kutambua ugonjwa wa fetasi na kuamua titer ya antibodies maalum katika seramu ya damu. Maelezo ya Kina njia zinazotumiwa kutambua rubella zinaweza kupatikana katika kitaalam na Pattison na Morgan-Kapner.

Mmenyuko wa kizuizi cha hemagglutination

Virusi vya Rubella husababisha hemagglutination ya seli nyekundu za damu katika aina nyingi za wanyama. Mara nyingi, erythrocytes kutoka kwa vifaranga vya siku moja hutumiwa katika RTGA. Antijeni ya hemagglutinating ya virusi vya rubela katika mmenyuko huu ni virusi vilivyokuzwa katika utamaduni na kutibiwa na Kati ya 80 na etha. Matibabu ya awali huongeza kiwango cha GA cha virusi.

5.1.1 Udhibiti wa virusi vya rubella HA antijeni

1. 1 ml ya kusimamishwa kwa 50% ya erythrocytes ya kuku huoshawa mara tatu katika buffer ya veronal na dextran na gelatin kwa centrifugation na kusimamishwa kwa sediment katika tube ya 15-ml iliyohitimu centrifuge. Seli zilizooshwa husimamishwa tena katika bafa ya DGV ili kupata kusimamishwa kwa 30%.

Jedwali 3. Maandalizi ya buffer ya veronal na dextran na gelatin

2. Punguza maandalizi ya lyophilized ya antijeni ya GA ya virusi vya rubella kwa kiasi cha maji yaliyotumiwa yanayotakiwa kulingana na maelekezo.

3. Ongeza ujazo 1 wa DGV kwa kila visima nane vya safu mbili za karibu za sahani ndogo ya polystyrene yenye visima 96 yenye visima vya umbo la U.

4. Kiasi kimoja cha virusi vya rubella GA antigen huongezwa kwenye visima vya kwanza vya safu mbili.

5. Tayarisha dilutions za serial mara mbili za antijeni ya rubela GA, kuanzia 1:2 hadi 1:256, kwa kutumia microtiter 0.025-ml. Kabla ya matumizi, kichwa cha microtitrator kinapaswa kuwashwa moto-nyekundu kwenye moto, kisha kilichopozwa kwa sekunde chache, kuwekwa kwenye maji yaliyotengenezwa na kufutwa na karatasi ya chujio.

6. Ongeza ujazo mmoja wa ziada wa bafa ya DGV kwa kila kisima kilichojazwa. Kama kidhibiti, juzuu mbili za bafa ya DGV huongezwa kwenye visima 12 kati ya safu mlalo mbili za kwanza.

7. Kusimamishwa kwa erythrocytes ya kuku iliyoosha hupunguzwa mara 100 na buffer ya DGV, hivyo kupata kusimamishwa kwa 0.03%.

8. Ongeza juzuu mbili za 0.03% ya kusimamishwa kwa seli nyekundu za damu kwenye visima vyote 18, funika sahani iliyokamilishwa na sahani nyingine, isiyotumiwa na uangaze kwa saa 1 kwa 4 °C.

9. "Jalada" mnene la erythrocytes zisizo na agglutinated huunda chini ya visima vya udhibiti. Seli nyekundu za damu zilizojaa hukaa sawasawa. Titer ya GA inachukuliwa kuwa ni sawa na dilution ya juu zaidi ya antijeni ya GA ya virusi vya rubella, ambayo agglutination kamili bado hutokea. Dilution hii ina kitengo 1 cha hemagglutinating.

Ili kupima sera, vitengo 4 vya GA vya antijeni ya virusi vya rubella hutumiwa. Kwa hivyo, ikiwa GA titer ya antijeni ni 32, basi kugundua antibodies kwa virusi vya rubella hupunguzwa na DGV mara nane. Antijeni iliyochemshwa ni thabiti kwa masaa 25-48 kwa 4 ° C.

5.1.2 Matibabu ya awali ya whey

Sera zote zina vizuizi visivyo maalum vya hemagglutination ambavyo vinapaswa kuondolewa. Vizuizi vya GA visivyo maalum ni lipoproteini, ambayo hutolewa kwa kutibu whey na kaolini. Kwa kuongeza, agglutinins zisizo maalum za erythrocytes ya kuku zinaweza kuwepo katika sera ya binadamu. Hata hivyo, utangazaji wa awali wa sera ya majaribio na erithrositi si lazima, kwa kuwa hemagglutinins zote zisizo maalum zilizopo kwenye sera hugunduliwa katika udhibiti.

1. Ongeza 0.2 ml ya seramu kwenye mirija ya kioo yenye nambari. Mbali na sera ya majaribio, udhibiti chanya na hasi unahitajika katika kila jaribio.

2. Ongeza 0.8 ml ya 25% ya kaolini katika salini iliyo na borate kwa kila bomba la majaribio.

3. Yaliyomo kwenye mirija ya majaribio yanatikiswa na kushoto kwa joto la kawaida kwa dakika 20.

4. Kaolini iliyotumiwa hudumishwa na upenyezaji katikati kwenye sehemu ya katikati ya meza kwa kasi ya 2000 rpm kwa dakika 20.

5. Dawa ya juu huhamishiwa kwenye mirija safi yenye nambari. Kama matokeo ya utakaso, seramu zilizopunguzwa mara nne hupatikana. Wao hutumiwa kufanya mmenyuko wa kuzuia hemagglutination. Seramu zinaweza kuhifadhiwa kwa 4 ° C usiku mmoja.

5.1.3 Mmenyuko wa kuzuia Hemagglutination

1. Ili kupima sampuli moja ya seramu, ongeza ujazo mmoja wa DGV kwenye safu mlalo ya visima.

2. Ongeza kiasi kimoja cha seramu iliyopunguzwa mara nne kwa visima vya kwanza na vya mwisho.

3. Serial dilutions mara mbili ya serum ni tayari kwa kutumia microtitrator.

4. Kiasi kimoja cha antijeni ya rubella HA yenye 4 HAE huongezwa kwa visima 1-10. Antijeni ya Rubella HA haijaongezwa kwenye kisima 12.

5. Kiasi kimoja cha dilution ya kazi ya antijeni ya rubela GA huongezwa kwenye visima 1-8 vya sahani nyingine, na kisha dilutions mara mbili mfululizo ya antijeni ya GA huandaliwa katika visima nane. Kiasi kimoja cha DGV kinaongezwa kwenye visima hivi 16. Titration hii ni kipimo cha antijeni ya rubela HA. Kwa udhibiti, kiasi cha mbili cha DGV huongezwa kwenye visima 12 vya safu ya kwanza na ya pili.

6. Sahani zilizofungwa huachwa kwa saa 1 kwa joto la kawaida au mara moja kwa 4 °C.

7. Kiasi cha mbili cha kusimamishwa kwa 0.03% ya erythrocytes ya kuku huongezwa kwa visima vyote vilivyojaa na sahani zinaachwa kwa saa 1 - 1.5 kwa 4 ° C.

8. Kuangalia kupitia sahani, tambua titer ya antijeni ya rubella GA. Hakuna agglutination inapaswa kutokea katika visima vya kudhibiti.

9. Ikiwa serum imekusanya seli nyekundu za damu kwa kukosekana kwa antijeni ya rubela HA, ni muhimu kupima upya dilution ya awali ya seramu. Kabla ya hili, seramu inatangazwa na tone moja la kusimamishwa kwa 30% ya erythrocytes ya kuku kwa saa 1 kwa joto la kawaida, na kisha erythrocytes hupigwa na centrifugation.

10. Titer ya antibodies maalum katika serum ya mtihani inachukuliwa kuwa thamani ya kubadilishana ya dilution ambayo hemagglutination imefungwa kabisa.

5.1.4 Tafsiri ya matokeo

Kwa titer ya chini, ni vigumu kutafsiri matokeo, kwa kuwa kwa dilution ndogo uwepo wa mabaki ya inhibitors zisizo maalum inawezekana. Uwepo wa antibodies maalum ya virusi huzingatiwa kuthibitishwa wakati titer ni 16 au zaidi.

Hii ni mmenyuko wa serological ambayo antibodies maalum ya antiviral, kuingiliana na virusi (antigen), kuipunguza na kuizuia uwezo wa agglutinate seli nyekundu za damu, i.e. kuzuia mmenyuko wa hemagglutination (HRTHA), ambayo inakuwezesha kuitumia kuamua aina na hata aina ya virusi vinavyogunduliwa wakati wa HRA.

Ugavi majibu. 0.25 ml ya seramu ya antiviral katika dilutions mara mbili mfululizo kutoka 1:10 hadi 1:2560 imechanganywa na kiasi sawa cha nyenzo zilizo na virusi, diluted mara 4 chini ya titer imara katika RGA. Mchanganyiko huo hutikiswa na kuwekwa kwenye thermostat kwa dakika 30, baada ya hapo 0.5 ml ya kusimamishwa kwa 1-2% ya seli nyekundu za damu huongezwa.

Mwitikio unaambatana na vidhibiti 3.

Matokeo yanarekodi baada ya incubation ya pili katika thermostat kwa dakika 30 au 45 kwa joto la kawaida. Ikiwa jaribio linafanywa kwa usahihi, "kifungo" kinapaswa kuundwa katika udhibiti wa seramu na erythrocytes - hakuna sababu inayoongeza erythrocytes; katika udhibiti wa antijeni, "mwavuli" huundwa - virusi vilisababisha mkusanyiko wa seli nyekundu za damu.

Katika jaribio, ikiwa seramu ni sawa na virusi vinavyosomwa, "kifungo" huundwa - seramu imepunguza virusi. Titer ya serum ni dilution ya juu ambayo hemagglutination imechelewa.

Mmenyuko wa hemagglutination isiyo ya moja kwa moja

Mmenyuko usio wa moja kwa moja (passive) wa hemagglutination (IRHA) unatokana na ukweli kwamba seli nyekundu za damu, ikiwa antijeni ya mumunyifu imetangazwa kwenye uso wao, hupata uwezo wa kujilimbikiza wakati wa kuingiliana na antibodies kwa antijeni ya adsorbed. RNGA hutumiwa sana katika utambuzi wa idadi ya maambukizo.

Kuanzisha majibu. Seramu ya mtihani huwashwa kwa dakika 30 kwa 56 ° C, diluted sequentially katika uwiano wa 1:10-1: 1280 na hutiwa ndani ya 0.25 ml kwenye mirija ya mtihani au visima, ambapo matone 2 ya uchunguzi wa erithrositi (erythrocytes na antijeni adsorbed juu yao. ) basi huongezwa.

Mtini. 70 Mpango wa mmenyuko wa hemagglutination wa passiv (RPHA).

A - kupata uchunguzi wa erythrocyte; B -RPGA: 1-erythrocyte: 2 - antigen chini ya utafiti: 3 - erythrocyte diagnosticum; 4 - antibody kwa antijeni inayosomwa; 5 - agglutinate.

Udhibiti: kusimamishwa kwa uchunguzi wa erythrocyte na seramu ya kinga inayojulikana; kusimamishwa kwa uchunguzi na serum ya kawaida; kusimamishwa kwa seli nyekundu za damu za kawaida na serum ya mtihani. Katika udhibiti wa kwanza, agglutination inapaswa kutokea, katika pili na ya tatu haipaswi kutokea.

Kwa kutumia RNGA, inawezekana kuamua antijeni isiyojulikana ikiwa antibodies zinazojulikana zinatangazwa kwenye erythrocytes.

Mmenyuko wa hemagglutination unaweza kufanywa kwa kiasi cha 0.025 ml (micromethod) kwa kutumia microtitrator ya Takachi.

MWITIKIO WA KUNYESHA

Katika mmenyuko wa mvua, dutu fulani hutangulia tata ya kinga, inayojumuisha antijeni mumunyifu (lysate, dondoo, (apten) na antibody maalum mbele ya elektroliti.

Pete ya mawingu au mvua inayotengenezwa kutokana na mmenyuko huu inaitwa precipitate. Mwitikio huu hutofautiana hasa na mmenyuko wa agglutination katika ukubwa wa chembe za antijeni.

Mmenyuko wa mvua kawaida hutumiwa kuamua antijeni katika utambuzi wa maambukizo kadhaa. kimeta, meningitis, nk); katika dawa ya mahakama - kuamua aina ya damu, manii, nk; katika masomo ya usafi na usafi - wakati wa kuanzisha uwongo wa bidhaa; kwa msaada wake, uhusiano wa phylogenetic wa wanyama na mimea imedhamiriwa. Kwa majibu unahitaji:

1. Antibodies (precipitins) - serum ya kinga yenye titer ya juu ya antibodies (si chini ya 1: 100,000). Kichwa cha seramu ya umwagiliaji imedhamiriwa na dilution ya juu zaidi ya antijeni ambayo humenyuka.
Seramu kawaida hutumiwa bila kuchanganywa au katika dilution ya 1: 5-1:10.

2. Antigen - kufutwa protini au
asili ya polysaccharide ya lipoid (antijeni kamili na
haptens).

3. Suluhisho la isotonic.

Mbinu kuu za kutekeleza mmenyuko wa mvua ni: mmenyuko wa mvua ya pete na mmenyuko wa mvua katika agar (gel).

Tahadhari! Vipengele vyote vinavyohusika katika mmenyuko wa mvua lazima viwe wazi kabisa.

Mtini.71 mmenyuko wa mvua: A - mmenyuko wa mvua kwenye pete; B - Majibu ya mvua ya Ouchterlony

Mwitikio wa mvua ya pete. Kwa kutumia pipette ya Pasteur, ongeza 0.2 - 0.3 ml (matone 5-6) ya seramu kwenye bomba la mvua (serum haipaswi kuingia kwenye kuta za bomba). Antijeni kwa kiasi sawa imewekwa kwa uangalifu kwenye seramu, ikimimina na pipette nyembamba ya Pasteur kando ya ukuta wa tube ya mtihani. Bomba la mtihani huwekwa katika nafasi ya kutega. Inapowekwa vizuri, lazima kuwe na mpaka wazi kati ya seramu na antijeni. Kwa uangalifu, ili usichanganye kioevu, weka tube ya mtihani kwenye msimamo. Ikiwa majibu ni chanya, "pete" ya mawingu huundwa kwenye interface ya antijeni na antibody - precipitate (ona Mchoro 48).

Mwitikio unaambatana na idadi ya udhibiti (Jedwali 18). Mlolongo wa kuongeza viungo vya majibu kwenye bomba la mtihani ni muhimu sana. Hauwezi kuweka seramu kwenye antijeni (katika kudhibiti - imewashwa suluhisho la isotonic), kwa kuwa wiani wa jamaa wa seramu ni mkubwa zaidi, itazama chini ya bomba la mtihani, na mpaka kati ya vinywaji hautagunduliwa.

Mpango wa kusanidi majibu ya mvua ya pete

Jedwali Na. 13

Kumbuka. + uwepo wa "pete"; - kutokuwepo kwa "pete".

Matokeo yanarekodiwa baada ya dakika 5-30, katika hali nyingine baada ya saa moja, kama kawaida kuanzia na vidhibiti. "Pete" katika tube ya mtihani wa 2 inaonyesha uwezo wa seramu ya kinga kuingia katika mmenyuko maalum na antijeni inayofanana. Haipaswi kuwa na "pete" kwenye mirija ya majaribio 3-5 - hakuna kingamwili na antijeni zinazolingana. "Pete" kwenye bomba la 1 - matokeo chanya ya mmenyuko - inaonyesha kuwa antijeni ya jaribio inalingana na seramu ya kinga iliyochukuliwa, kutokuwepo kwa "pete" ("pete" tu kwenye bomba la 2) kunaonyesha kutokwenda kwao - athari mbaya. matokeo.

Mmenyuko wa mvua katika agar (gel). Upekee wa mmenyuko ni kwamba mwingiliano wa antijeni na antibody hutokea ndani mazingira mnene, yaani katika jeli. Mvua inayotokana inatoa mfululizo wa machafuko katika unene wa kati. Kutokuwepo kwa bendi kunaonyesha tofauti kati ya vipengele vya majibu. Mmenyuko huu hutumiwa sana katika utafiti wa matibabu, haswa katika utafiti wa malezi ya sumu katika wakala wa causative wa diphtheria.

Jifunze asili ya mwingiliano wa antijeni na kingamwili katika majibu
mvua katika agar, chora matokeo (pata kikombe kutoka kwa mwalimu wako).

Awamu imara ELISA- tofauti ya mtihani wakati moja ya vipengele vya mmenyuko wa kinga (antijeni au antibody) hupigwa kwenye carrier imara, kwa mfano, katika visima vya sahani za polystyrene. Vipengele hugunduliwa kwa kuongeza kingamwili zilizo na lebo au antijeni. Ikiwa matokeo ni chanya, rangi ya chromogen inabadilika. Kila wakati baada ya kuongeza sehemu nyingine, vitendanishi visivyofungwa huondolewa kwenye visima kwa kuosha;

I. Wakati wa kuamua antibodies (takwimu ya kushoto), seramu ya damu ya mgonjwa, seramu ya antiglobulini iliyoandikwa na enzyme, na substrate / chromojeni ya enzyme huongezwa kwa sequentially kwenye visima vya sahani na antijeni ya sorbed.

II. Wakati wa kuamua antijeni (takwimu ya kulia), antijeni huongezwa kwenye visima vilivyo na kingamwili (kwa mfano, seramu ya damu iliyo na antijeni inayotaka), seramu ya utambuzi dhidi yake na kingamwili za sekondari (dhidi ya seramu ya utambuzi), iliyoandikwa na kimeng'enya. , huongezwa, na kisha substrate/chromojeni kwa enzyme.

ELISA ya Ushindani kutambua antijeni: antijeni ya kuvutia na antijeni yenye lebo ya kimeng'enya hushindana kwa kufungana. kiasi kidogo antibodies ya serum ya kinga.

Jaribio lingine ni ELISA ya Ushindani kwa ajili ya kubainisha kingamwili: kingamwili zinazohitajika na kingamwili zilizo na lebo ya enzyme hushindana kwa antijeni zinazotangazwa kwenye awamu dhabiti.

Kuzuia kinga mwilini- njia nyeti sana ya kugundua protini, kulingana na mchanganyiko wa electrophoresis na ELISA au RIA. Immunoblotting hutumiwa kama njia ya uchunguzi wa maambukizi ya VVU, nk.

Antijeni za pathojeni hutenganishwa kwa kutumia electrophoresis ya gel ya Polyacrylamide, kisha kuhamishwa kutoka kwa gel hadi kwenye karatasi iliyoamilishwa au membrane ya nitrocellulose na kuendelezwa kwa kutumia ELISA. Makampuni huzalisha vipande vile na "blots" za antijeni. Seramu ya mgonjwa hutumiwa kwa vipande hivi. . Kisha, baada ya incubation, mgonjwa huoshwa kutoka kwa kingamwili zisizofungwa na seramu dhidi ya immunoglobulini ya binadamu iliyoandikwa na kimeng'enya inawekwa. . Mchanganyiko unaoundwa kwenye utepe [antijeni + kingamwili ya mgonjwa + kingamwili dhidi ya binadamu Ig] hugunduliwa kwa kuongeza sehemu ndogo ya kromojeni ambayo hubadilisha rangi chini ya kitendo cha kimeng’enya.