Utafiti wa samaki. SAMAKI - utafiti kwa utambuzi tofauti

Saratani ya matiti (BC) ni aina ya kawaida ya oncology na, kwa bahati mbaya, hakuna njia moja ya matibabu bado imetengenezwa ambayo hutoa dhamana kamili ya tiba. Ndiyo maana njia bora ya kutoka kwa mgonjwa - kuzuia na utambuzi wa wakati RMJ. Uchambuzi wa samaki kwa saratani ya matiti ni njia ya kisasa zaidi ya utafiti ambayo hukuruhusu kuelekeza matibabu ya mgonjwa kwenye njia sahihi zaidi.

Licha ya uzoefu mkubwa wa kusanyiko katika utafiti na matibabu ya ugonjwa huu, dawa bado haiwezi kuonyesha mambo ya nje, na kusababisha tumor mbaya ya gland ya mammary. Hakuna hata kansajeni inayojulikana inaweza kuhusishwa kwa uaminifu na tukio la ugonjwa huu. Mbinu za kisasa uchunguzi kwa ujumla hutoa matokeo mazuri na kuruhusu mtu kuamua kwa usahihi wa juu uwepo au kutokuwepo kwa ugonjwa huo na hatua ya maendeleo. Hata hivyo, si wote hutoa taarifa ya kina ambayo inakuwezesha kuagiza matibabu kwa usahihi.

1. Hesabu kamili ya damu - hundi kiwango cha seli nyeupe za damu, kiwango cha mchanga wa erythrocyte na hemoglobin. Viashiria viwili vya kwanza huongezeka kwa oncology, mwisho, kinyume chake, hupungua. Hata hivyo, uchambuzi huu unatuwezesha kuhukumu tu kuwepo kwa matatizo fulani katika mwili. Weka utambuzi sahihi"Saratani tezi ya mammary"Huwezi kuitumia, haswa katika hatua ya mwanzo ya ukuaji wa tumor.
2. Biochemistry - huamua kiwango cha enzymes na electrolytes, ambayo inaruhusu sisi kuhukumu uwepo wa metastases. Walakini, data hizi sio lengo kila wakati. Utafiti huu pia unaonyesha kuwepo kwa alama fulani za tumor katika damu, ambayo husaidia kufuatilia uwepo wa tumor ya saratani na eneo lake.
3. Uchambuzi wa Spectral hukuruhusu kuamua uwepo wa saratani na uwezekano wa zaidi ya 90%, pamoja na katika hatua ya mwanzo Njia hiyo inategemea kusoma damu chini ya mionzi ya infrared, ambayo hukuruhusu kuamua muundo wake wa Masi.
4. Biopsy - inafanywa kwa kuchukua sampuli ya tishu kutoka kwa matiti na uchambuzi zaidi wa cytological, ambayo huamua kuwepo kwa seli za saratani na idadi yao, ambayo inategemea kiwango cha maendeleo ya ugonjwa huo.
5. Uchunguzi wa vinasaba huamua uwezekano wa mgonjwa kupata saratani ya matiti.

Walakini, mpya zaidi na njia ya ufanisi Utafiti leo ni kile kinachoitwa SAMAKI (samaki) mtihani. Kifupi kilichotafsiriwa kutoka kwa Kiingereza kinasikika kama "mseto wa umeme wa ndani ya seli."

Upimaji wa hadaa ni njia mpya - imekuwa ikitumika tangu 1980. Walakini, licha ya ugumu na bei ya juu, iliweza kupata maoni chanya kutoka kwa madaktari na wagonjwa ambao, shukrani kwake, walifanikiwa kuondoa saratani.

Kwa ukuaji wa seli za matiti ndani mwili wa binadamu Jeni inayoitwa HER2 hujibu. Jina lililotafsiriwa kutoka kwa Kiingereza linamaanisha Receptor ya Estrogen ya Binadamu - 2. Kwa kawaida, vipokezi vya jeni hili huzalisha HER2, protini ambayo inasimamia mgawanyiko wa seli za gland. Tumor ya saratani (kawaida carcinoma) wakati wa kuanzishwa kwake "hudanganya" jeni hili, na kulazimisha kukua tishu za ziada, ambazo zitatumiwa na tumor kwa maendeleo yake. Hitilafu hii hutokea katika takriban 30% ya matukio na ina sifa ya neno "kuzaa."

Kwa njia hii, mwili wa mgonjwa yenyewe husaidia kansa kuendeleza. Ikiwa mchakato huu haujasimamishwa, basi hata njia za kisasa na za nguvu za matibabu haziwezi kumsaidia mgonjwa.

Upimaji wa ukuzaji wa jeni la HER2 kawaida hufanywa katika hatua mbili:

• IHC (mtihani wa immunohistochemical);
• uchambuzi wa moja kwa moja wa SAMAKI (mseto wa fluorescent).

Chini ya anesthesia ya ndani Mgonjwa hupitia biopsy - sampuli za tishu huchukuliwa, ambazo hupelekwa kwenye maabara maalumu.

Hatua ya kwanza ni kawaida immunohistochemistry, uchambuzi wa microscopic wa sampuli ya tishu za saratani. Huamua uwepo wa kimsingi wa jeni la HER2 katika tishu za uvimbe. Utafiti huu ni wa bei nafuu zaidi kuliko mtihani wa samaki, na pia ni rahisi na haraka kutekeleza. Walakini, haitoi habari sahihi kama hiyo, matokeo yamedhamiriwa kwa nambari kutoka sifuri hadi alama tatu. Ikiwa matokeo ni chini ya au sawa na moja, basi jeni la HER2 haipo kwenye tumor na hakuna haja ya utafiti zaidi. Kutoka kwa pointi mbili hadi tatu - hali ya mpaka, zaidi ya tatu - malezi mabaya ni katika mchakato wa ukuaji na ni muhimu kuendelea na hatua ya pili ya uchunguzi.

Mtihani wa samaki kwa saratani ya matiti hufanywa kama ifuatavyo: vitu vya molekuli za DNA (deoxyribonucleic acid) zilizo na alama ya rangi maalum huletwa ndani ya damu. Alama hizi huingizwa kwenye molekuli za DNA za mgonjwa na kubaini kama na ni kiwango gani cha ukuzaji wa HER2 kinatokea. Uchambuzi unafanywa kwa wakati halisi, daktari analinganisha kiwango cha mgawanyiko wa jeni kwenye tovuti ya tumor inayoshukiwa na kiwango cha mgawanyiko wa eneo la kawaida la matiti.

Kwa saratani ya matiti, uchunguzi wa SAMAKI unaweza kutoa matokeo yafuatayo:

• mmenyuko ni chanya - kiwango cha mgawanyiko wa jeni la HER2 katika tishu za tumor ni mara mbili zaidi ya kawaida au ya juu, katika hali ambayo tiba ya ziada ni muhimu;
• mmenyuko ni hasi - HER2 haishiriki katika mchakato wa mgawanyiko wa seli za saratani na, ikiwa tumor bado iko, jeni hii haitachochea maendeleo yake.

Kwa hivyo, uchambuzi hufanya iwezekanavyo kuamua tabia isiyo ya kawaida ya jeni la HER2 na kurekebisha matibabu, kwa kutumia tiba sambamba inayolenga kukandamiza jeni hili. Hivi sasa, dawa ya Herceptin hutumiwa kwa hili.

Ikiwa hutafanya mtihani wa samaki kwa wakati unaofaa au usizingatie matokeo yake, daktari hatakuwa na data juu ya tabia ya HER2. Katika kesi hiyo, matibabu yataagizwa bila kuzingatia shughuli zinazowezekana za fujo za jeni hili. Uwezekano mkubwa zaidi, tiba hiyo haitaleta matokeo - tumor itaendelea kuendeleza kwa ukali.

Mbali na kile kilichoelezwa hapo juu, ufuatiliaji wa tabia ya jeni la HER2 huwapa wataalamu wa oncologists kuelewa kiwango cha ukali wa tumor na uwezo wa kutabiri kiwango cha ukuaji na kuenea kwake. Hii ina jukumu muhimu sana katika kubuni matibabu ya mgonjwa. Huamua kama kuna hitaji la miadi matibabu kali(kwa mfano, mionzi au kemia), au itakuwa ya kutosha tiba ya homoni inaleta maana upasuaji au ni hiari.

Faida na hasara za uchambuzi wa samaki

Kama njia nyingine yoyote ya uchunguzi, utafiti wa SAMAKI una pande chanya na hasi.

1. Utafiti unafanywa haraka - matokeo ni tayari ndani ya siku chache, wakati mbinu nyingine za uchunguzi huchukua hadi wiki kadhaa. Hatua hii ni muhimu sana katika mapambano dhidi ya saratani.
2. Mbali na kusoma saratani ya matiti, uchambuzi hukuruhusu kujua utabiri wa mgonjwa fulani kwa oncology ya chombo chochote. cavity ya tumbo. Mgonjwa hupewa ripoti ya kina, kulingana na ambayo anaweza kufanyiwa uchunguzi wa kuzuia. uwezekano wa maendeleo saratani.
3. Kutokana na maelezo mahususi ya uchanganuzi wa samaki, inaweza kutumika kugundua kasoro ndogo zaidi za kimaumbile ambazo haziwezi kutambuliwa kwa njia nyinginezo.
4. Tofauti na aina zingine za vipimo, kipimo cha samaki ni salama kwa mgonjwa. Mbali na biopsy, hauhitaji madhara yoyote ya ziada ya kiwewe.

Baadhi ya oncologists wanaona ufanisi wa mtihani wa samaki kuwa wa utata. Wanategemea tafiti ambazo hazijafichua faida kubwa ya njia hii juu ya utafiti wa bei nafuu wa IHC.

• gharama kubwa ya utafiti;
• kwa sababu ya ukweli kwamba alama zilizoletwa kwenye DNA ni maalum, haziwezi kutumika kwenye sehemu fulani za kromosomu;
• uchambuzi hauoni uharibifu wote wa maumbile, ambayo inaweza kusababisha makosa ya uchunguzi.

Kwa ujumla, licha ya ukosoaji, uchambuzi wa samaki ndio njia ya haraka na sahihi zaidi ya kugundua saratani ya matiti. Pia ni muhimu kwamba inaruhusu mtu kutabiri maendeleo ya aina nyingine za oncology.

Saratani yoyote inatibiwa kwa urahisi zaidi hatua za mwanzo maendeleo. Kwa bahati mbaya, kwa kushangaza, wengi aina zinazojulikana tumors mbaya ni vigumu sana kutambua katika hatua za mwanzo. Kwa kuongeza, njia nyingi za uchunguzi zinazotumiwa ni za muda na hazitoi picha ya lengo kabisa. Mchanganuo wa samaki sio tu unatoa picha sahihi zaidi ya hali ya tumor, lakini pia hukuruhusu kumlinda mgonjwa kutokana na aina za matibabu ambazo ni hatari kwa mwili (kwa mfano, chemotherapy), kwani kiwango cha ukali wa tumor ni. kuamua na, ipasavyo, uwezekano wa metastases.

Uamuzi wa hali ya tumor ya HER-2 na FISH- utafiti wa utabiri wa maendeleo ya tumor na uteuzi wa wakati matibabu ya kutosha kwa saratani ya matiti (BC) au saratani ya tumbo (GC).

HER-2 (HER-2/neu)- kipokezi cha kipengele cha ukuaji wa epidermal-2 ni protini ambayo inaweza kuathiri ukuaji wa seli za saratani. Imeundwa na jeni maalum inayoitwa HER-2/neu gene. HER-2 ni kipokezi cha sababu fulani ya ukuaji inayoitwa ukuaji wa epidermal ya binadamu ambayo hutokea kiasili kwa binadamu. Wakati sababu ya ukuaji wa epidermal ya binadamu inafunga kwa vipokezi vya HER-2 seli za saratani matiti, inaweza kuchochea ukuaji na mgawanyiko wa seli hizi. Katika tishu zenye afya, HER-2 hutuma ishara zinazodhibiti kuenea kwa seli na kuendelea kuishi, lakini kujieleza kupita kiasi kwa HER-2 kunaweza kusababisha mabadiliko mabaya ya seli.

Kujieleza kupita kiasi kwa HER-2 katika baadhi ya aina ndogo za saratani ya matiti husababisha kuongezeka kwa kuenea na angiojenesisi, kuharibika kwa apoptosis (uharibifu wa seli uliopangwa kijeni). Imeonekana kuwa katika saratani ya matiti, kuzidisha kwa kipokezi hiki katika tishu za tumor huhusishwa na kozi kali zaidi ya ugonjwa huo, kuongezeka kwa uwezo wa metastatic wa tumor na kidogo. ubashiri mzuri. Ugunduzi wa uhusiano kati ya HER-2 overexpression na ubashiri usiofaa wa saratani ya matiti umesababisha utaftaji wa mbinu za matibabu ambazo zinalenga kuzuia haswa HER-2/neu onkogene (tiba inayolengwa ya anti-HER2).

Saratani ya matiti (BC)- tumor mbaya ya tishu ya glandular ya gland ya mammary. Saratani ya matiti inachukua nafasi ya kwanza kati ya magonjwa yote mabaya kwa wanawake.

Kulingana na uwepo wa alama za kibaolojia za tumor - usemi wa vipokezi vya homoni (estrogeni na/au progesterone), usemi wa HER-2 - receptor-chanya ya homoni, saratani ya matiti ya HER-2-chanya na tatu hasi hutofautishwa.

HER-2/neu-positive (HER-2+) aina za saratani ya matiti zina sifa ya kujieleza kwa juu kwa protini ya HER-2/neu.
HER=2/neu-negative (HER-2-) aina za saratani ya matiti zina sifa ya kujieleza chini au kutokuwepo kwa protini ya HER-2/neu.
Mmoja kati ya wanawake watano walio na saratani ya matiti anafikiriwa kuwa na uvimbe chanya wa HER-2. Wengi uvimbe wa saratani tezi za mammary zinategemea homoni: estrojeni na progesterone zina athari ya kuchochea juu yao (proliferative na neoplastic). Katika saratani ya matiti yenye HER-2-chanya, kuna ziada ya vipokezi vya HER-2 kwenye uso wa seli za tumor. Hali hii inaitwa "hali chanya ya HER-2" na hugunduliwa katika 15-20% ya wanawake wanaougua saratani ya matiti.

HER-2- kipokezi cha aina ya 2 ya ukuaji wa epidermal ya binadamu, ambayo iko kwenye tishu kawaida, inashiriki katika udhibiti wa mgawanyiko wa seli na utofautishaji. Kuzidi kwake juu ya uso wa seli za tumor (overexpression) huamua ukuaji wa haraka usio na udhibiti wa tumor, hatari kubwa ya metastasis, na ufanisi mdogo wa aina fulani za matibabu. Saratani ya matiti chanya ya HER-2 ni aina kali sana ya ugonjwa huu Kwa hiyo, uamuzi sahihi wa hali ya HER-2 ni muhimu kwa kuchagua mbinu za matibabu.

Saratani ya tumbo (GC)- tumor mbaya inayotokana na epithelium ya mucosa ya tumbo.

GC inashika nafasi ya 4 katika muundo wa matukio ya saratani na nafasi ya 2 katika muundo wa vifo vya saratani ulimwenguni. Matukio ya saratani ya tumbo kwa wanaume ni mara 2 zaidi kuliko kwa wanawake. Urusi ni ya mikoa yenye kiwango cha juu Matukio ya GC na vifo kutokana na ugonjwa huu. Utambuzi wa GC katika hatua za mwanzo ni vigumu kutokana na muda mrefu isiyo na dalili magonjwa. GC mara nyingi hugunduliwa hatua za marehemu, wakati kiwango cha kuishi cha miaka 5 hakizidi 5-10%, na chemotherapy inabakia njia pekee ya matibabu.

Njia kuu ya matibabu ya saratani ya tumbo ni upasuaji. Hata hivyo, kwa wagonjwa wengi, wakati wa uchunguzi, mchakato wa tumor ulioenea umeamua, ambayo inafanya kuwa haiwezekani kufanya upasuaji mkali na inahitaji utaratibu tiba ya madawa ya kulevya. Tiba ya chemotherapy kitakwimu huongeza maisha ya jumla ya wagonjwa walio na saratani ya metastatic, kuboresha ubora wa maisha yao.

Oncogene ya HER-2 (erbB-2) ilitambuliwa hapo awali katika uvimbe wa matiti. Kukuza na kujieleza kupita kiasi kwa jeni hili ni tukio maalum kwa saratani ya matiti na kwa kweli haitokei katika uvimbe wa maeneo mengine. Saratani ya tumbo inaonekana kuwa mojawapo ya vighairi vichache, huku uanzishaji wa HER-2 ukizingatiwa katika takriban 10-15% neoplasms mbaya ya chombo hiki na inahusiana na kozi ya ukali ya ugonjwa huo.

Kujieleza kupita kiasi kwa HER-2 ni sababu ya ubashiri mbaya. Kulingana na tafiti mbalimbali, ukuzaji wa jeni la HER-2 kwa wagonjwa walio na saratani huhusiana na utendaji wa chini kuishi kwa ujumla.

Ili kutathmini hali ya HER-2 katika saratani na saratani ya matiti, njia ya SAMAKI hutumiwa.

SAMAKI- utafiti unakuwezesha kuamua mabadiliko ya ubora na kiasi katika chromosomes kwa ajili ya uchunguzi wa magonjwa mabaya ya damu na tumors imara.

Leo, masomo ya SAMAKI yanatumika sana ulimwenguni kote.

Mbinu ya SAMAKI (fluorescent in situ hybridization) ni utafiti wa idadi ya jeni za HER-2/neu ndani ya seli za saratani.

Viashiria:

• saratani ya matiti - kwa madhumuni ya ubashiri na uteuzi wa tiba;
• saratani ya tumbo - kwa madhumuni ya ubashiri na uteuzi wa tiba.

Itifaki ya histological na itifaki ya immunohistochemical, kioo cha IHC inahitajika.

Ufafanuzi wa matokeo
Matokeo ya mtihani wa FISH yanaonyeshwa kama ifuatavyo:

1. Chanya ( maudhui yaliyoongezeka, kuna ukuzaji wa jeni la HER-2):

• HER-2 saratani ya matiti chanya;

• HER-2 saratani ya matiti hasi.

Njia ya kisasa ya uchambuzi wa cytogenetic ambayo inafanya uwezekano wa kuamua mabadiliko ya ubora na kiasi katika chromosomes (pamoja na uhamishaji na uondoaji mdogo) na hutumiwa kwa utambuzi tofauti magonjwa mabaya ya damu na tumors imara.

Visawe Kirusi

Fluorescence in situ mseto

Uchambuzi wa SAMAKI

Visawe vya Kiingereza

Fluorescence katika-situ mseto

Mbinu ya utafiti

Fluorescence in situ mseto.

Ni biomaterial gani inaweza kutumika kwa utafiti?

Sampuli ya tishu, sampuli ya tishu katika kizuizi cha parafini.

Jinsi ya kujiandaa vizuri kwa utafiti?

Hakuna maandalizi yanayohitajika.

Maelezo ya jumla kuhusu utafiti

Mchanganyiko wa Fluorescence in situ (FISH, kutoka kwa Kiingereza fluorescence katika- mahali mseto) ni mojawapo ya wengi mbinu za kisasa utambuzi wa upungufu wa chromosomal. Inategemea matumizi ya vichunguzi vya DNA vilivyo na alama ya umeme. Vichunguzi vya DNA ni vipande vya DNA vilivyoundwa mahsusi, mlolongo wake ambao unasaidiana na mlolongo wa DNA wa kromosomu mbovu zinazochunguzwa. Kwa hivyo, vipimo vya DNA vinatofautiana katika utungaji: tofauti, vipimo maalum vya DNA hutumiwa kuchunguza tofauti tofauti za chromosomal. Uchunguzi wa DNA pia hutofautiana kwa ukubwa: baadhi yanaweza kuelekezwa kwa kromosomu nzima, wengine kwa locus maalum.

Wakati wa mchakato wa mseto, ikiwa kromosomu zisizo sahihi zipo kwenye sampuli inayochunguzwa, hufunga kwenye uchunguzi wa DNA, ambao, unapochunguzwa kwa kutumia darubini ya fluorescence, hubainishwa kama ishara ya umeme. matokeo chanya Mtihani wa SAMAKI). Kwa kukosekana kwa chromosomes zisizo sahihi, uchunguzi wa DNA ambao haujafungwa "huoshwa" wakati wa majibu, ambayo, inapochunguzwa kwa kutumia darubini ya fluorescence, inafafanuliwa kama kutokuwepo kwa ishara ya umeme (matokeo hasi ya mtihani wa FISH). Njia hiyo inakuwezesha kutathmini sio tu kuwepo kwa ishara ya fluorescent, lakini pia kiwango chake na ujanibishaji. Kwa hivyo, mtihani wa SAMAKI sio tu wa ubora, bali pia ni njia ya kiasi.

Jaribio la FISH lina faida kadhaa juu ya mbinu zingine za cytogenetic. Kwanza kabisa, utafiti wa FISH unaweza kutumika kwa nuclei zote mbili za metaphase na interphase, yaani, kwa seli zisizogawanyika. Hii ndiyo faida kuu ya SAMAKI ikilinganishwa na mbinu za kitaalamu za karyotyping (kwa mfano, rangi ya kromosomu ya Romanowsky-Giemsa), ambayo hutumiwa tu kwa viini vya metaphase. Hii hufanya FISH kuwa mbinu sahihi zaidi ya kutambua kasoro za kromosomu katika tishu zilizo na shughuli ndogo ya kuenea, ikiwa ni pamoja na uvimbe dhabiti.

Kwa kuwa jaribio la FISH hutumia DNA thabiti ya nuclei za interphase, aina mbalimbali za nyenzo za kibayolojia zinaweza kutumika kwa ajili ya utafiti - aspirates zenye angle nzuri. aspiration biopsy, smears, aspirates uboho, vielelezo vya biopsy na, muhimu zaidi, vipande vya tishu vilivyohifadhiwa, kama vile vitalu vya histological. Kwa mfano, mtihani wa SAMAKI unaweza kufanywa kwa ufanisi kwenye maandalizi ya kuiga yaliyopatikana kutoka kizuizi cha kihistoria biopsy ya matiti ili kuthibitisha utambuzi wa adenocarcinoma ya matiti na haja ya kuamua hali ya HER2/neu ya uvimbe. Inapaswa kusisitizwa hasa kwamba katika kwa sasa Utafiti wa SAMAKI unapendekezwa kama kipimo cha uthibitisho wakati matokeo yasiyobainishwa ya uchunguzi wa kingamwili wa uvimbe kwa alama ya uvimbe HER2/neu (IHC 2+) inapopatikana.

Faida nyingine ya FISH ni uwezo wake wa kuchunguza microdeletions ambayo haipatikani na karyotyping classical au PCR. Hii ni muhimu sana ikiwa ugonjwa wa DiGeorge na ugonjwa wa velocardiofacial unashukiwa.

Uchunguzi wa FISH hutumiwa sana katika utambuzi tofauti wa magonjwa mabaya, hasa katika oncohematology. Upungufu wa kromosomu pamoja na picha ya kliniki na data kutoka kwa masomo ya immunohistochemical ni msingi wa uainishaji, uamuzi wa mbinu za matibabu na ubashiri wa magonjwa ya lympho- na myeloproliferative. Mifano ya awali ni leukemia ya muda mrefu ya myeloid - t (9;22), leukemia ya papo hapo ya promyelocytic - t (15;17), leukemia ya muda mrefu ya lymphocytic- trisomy 12 na wengine. Kama ilivyo kwa tumors ngumu, upimaji wa SAMAKI hutumiwa mara nyingi katika utambuzi wa saratani ya matiti, kibofu cha mkojo, koloni, neuroblastoma, retinoblastoma na wengine.

Upimaji wa SAMAKI unaweza pia kutumika katika utambuzi wa kabla ya kujifungua na kabla ya kupandikizwa.

Jaribio la SAMAKI mara nyingi hufanywa pamoja na njia zingine za molekuli na cytological. uchunguzi wa kijeni. Matokeo ya utafiti huu yanatathminiwa kwa kushirikiana na matokeo ya data ya ziada ya maabara na ala.

Utafiti unatumika kwa nini?

• Kwa utambuzi tofauti wa magonjwa mabaya (damu na viungo imara).

Utafiti umepangwa lini?

• Ikiwa unashuku uwepo ugonjwa mbaya damu au tumors imara, mbinu za matibabu na ubashiri ambao hutegemea muundo wa chromosomal wa clone ya tumor.

Je, matokeo yanamaanisha nini?

Matokeo chanya:

• Uwepo wa kromosomu zisizo sahihi katika sampuli ya majaribio.

Matokeo hasi:

• Kutokuwepo kwa kromosomu potofu katika sampuli inayochunguzwa.

Ni nini kinachoweza kuathiri matokeo?

• Idadi ya kromosomu zisizo sahihi.

• Utafiti wa Immunohistochemical wa nyenzo za kliniki (kwa kutumia kingamwili 1)
• Utafiti wa Immunohistochemical wa nyenzo za kliniki (kwa kutumia kingamwili 4 au zaidi)
• Uamuzi wa hali ya tumor HER2 na SAMAKI
• Uamuzi wa hali ya uvimbe wa HER2 kwa kutumia mbinu ya CISH

Nani anaamuru utafiti?

Oncologist, daktari wa watoto, daktari wa uzazi-gynecologist, geneticist.

Fasihi

• Wan TS, Ma ES. Cytogenetics ya molekuli: chombo cha lazima cha utambuzi wa saratani. Res ya Anticancer. 2005 Jul-Agosti;25(4):2979-83.
• Kolialexi A, Tsangaris GT, Kitsiou S, Kanavakis E, Mavrou A. Athari za masomo ya cytojenetiki na molekuli ya cytogenetic ya ugonjwa wa damu. Chang Gung Med J. 2012 Mar-Apr;35(2):96-110.
• Mühlmann M. Cytogenetics ya Masi katika seli za metaphase na interphase kwa saratani na utafiti wa maumbile, utambuzi na ubashiri. Maombi katika sehemu za tishu na kusimamishwa kwa seli. Genet Mol Res. 2002 Jun 30;1(2):117-27.

Mbinu ya mseto situ* (in situ, lat.) inategemea uwezo wa DNA au RNA kuunda molekuli za mseto thabiti zilizo na uchunguzi wa DNA/RNA moja kwa moja kwenye utayarishaji wa kromosomu zisizobadilika na viini vya interphase. Kwa kutumia njia hii, inawezekana kubainisha eneo kamili la karibu mfuatano wowote wa DNA au RNA moja kwa moja kwenye seli, kiini cha seli, au kromosomu.

Kufanya mseto katika situ Maandalizi ya cytological au histological ya seli za tishu au chombo chochote, kilichoandaliwa kulingana na mbinu za kawaida, zinafaa. Katika maabara ya kliniki ya cytogenetic, maandalizi ya lymphocyte ya damu ya pembeni, seli za cytotrophoblast za chorionic epithelial, seli za maji ya amniotic zilizopandwa na zisizo na utamaduni, tishu mbalimbali kutoka kwa nyenzo za utoaji mimba, pamoja na smears ya seli za epithelial za buccal na damu hutumiwa.

Mbinu ya mseto katika situ ni ya umuhimu mahususi kwa cytojenetiki ya vitendo, kutokana na kutengenezwa kwa lahaja isiyo ya isotopiki kulingana na matumizi ya vichunguzi vilivyo na alama za nyukleotidi zilizorekebishwa zisizo na mionzi. Chaguzi zisizo za isotopiki za mseto kwenye maandalizi (haswa fluorescent) zina faida kadhaa ikilinganishwa na zile za isotopiki: azimio kubwa, ambalo ni sawa na azimio la darubini (0.1 - 0.2 microns), hakuna haja ya usindikaji wa takwimu wa matokeo, kasi. na usalama kwa watafiti wa afya

Aidha, mchanganyiko wa sampuli mbalimbali iliyopita wanaona kwa kutumia mifumo tofauti kugundua, hukuruhusu kuamua wakati huo huo eneo la mlolongo wa DNA mbili au zaidi katika seli moja au kwenye sahani moja ya metaphase. Na utumiaji wa mlolongo wa kurudia unaoitwa fluorochromes kama uchunguzi wa DNA hupunguza muda wa utaratibu hadi saa 7 - 9 (toleo la mseto lisilo la isotopiki la mseto huchukua siku mbili, lahaja za isotopiki kutoka kwa wiki hadi mwezi), ambayo ni muhimu sana kwa utambuzi wa ujauzito. Matumizi Mbinu ya SAMAKI katika uchunguzi wa cytogenetic huruhusu mtu kutambua upangaji upya wa kromosomu ya kimuundo, kuanzisha asili ya kromosomu za alama, na kuchanganua ukiukaji wa nambari za seti ya kromosomu, kama katika chromosomes ya metaphase, na katika viini vya interphase.

Kanuni ya njia ya SAMAKI

Katika msingi Mbinu ya SAMAKI lipo mwitikio wa mseto kati ya uchunguzi wa DNA ulioundwa kiholela na mfuatano wa nyukleotidi wa DNA ya nyuklia. Molekuli ya DNA ina minyororo miwili ya nyukleotidi iliyounganishwa kwa heli, na mseto unawezekana tu ikiwa minyororo itatengana. Ili kutenganisha minyororo ya nyukleotidi ya DNA, wao huamua kugeuza denaturation (kwa mseto unaofuata, DNA katika viini vya sampuli ya jaribio na uchunguzi wa DNA yenyewe lazima ubadilishwe). Baada ya kubadilika, uchunguzi wa DNA huchanganywa hadi mfuatano wake wa nyukleotidi na unaweza kutambuliwa kwa kutumia darubini ya fluorescence.

Hivyo, mtazamo wa jumla itifaki ya kuweka SAMAKI inaweza kuwakilishwa katika fomu ifuatayo:

1. Maandalizi ya specimen ya histological au cytological.
Maandalizi ya specimen ya histological hufanyika kulingana na utaratibu wa kawaida: kukata, kuashiria, wiring, kujaza, microtomy, kuweka sehemu kwenye slide ya kioo na dewaxing. Wakati wa kuandaa maandalizi ya cytological, ufumbuzi maalum wa precipitating na centrifugation hutumiwa, ambayo inafanya uwezekano wa kupata kusimamishwa kwa kiini kilichojilimbikizia.

2. Matibabu ya awali (ikiwa ni lazima).
Dawa hiyo inatibiwa na proteases ili kuondoa uwepo wa protini zinazozuia mseto.

3. Utumiaji wa uchunguzi wa DNA kwa utayarishaji na urekebishaji unaofuata.
Ili kubadilisha uchunguzi na sampuli ya DNA, hutibiwa kwa formamide na kupashwa joto hadi nyuzi joto 85-90°C.

4. Mseto.
Baada ya denaturation, madawa ya kulevya hupozwa kwa joto fulani (37 ° C katika kesi ya majaribio ya kliniki) na kuingizwa kwenye chumba cha unyevu kwa saa kadhaa (muda wa incubation ni maalum katika kila itifaki maalum). Hivi sasa, hybridizers otomatiki hutumiwa kwa denaturation na mseto.

5. Kuosha.
Baada ya mseto kukamilika, ni muhimu kuosha probes zisizofungwa, ambazo zingeweza kuunda historia ambayo itafanya kuwa vigumu kutathmini matokeo ya uchambuzi wa SAMAKI. Suluhisho iliyo na citrate ya sodiamu na kloridi (SSC) hutumiwa kwa suuza.

6. Counter-madoa.
Kwa kutumia rangi za fluorescent (DAPI - 4,6-diamidin-2-phenylindole; propidium iodidi), DNA zote za nyuklia zimetiwa rangi.

7. Uchambuzi wa matokeo kwa kutumia darubini ya fluorescent. Kufanya shughuli za kawaida (dewaxing, usindikaji wa awali, kuosha) inaweza kuwa otomatiki.

* - Nyenzo zilitayarishwa kulingana na habari kutoka kwa vyanzo wazi.

Njia za uvamizi za utambuzi wa ujauzito huruhusu sio tu kutazama siku zijazo na kutabiri kwa uhakika ikiwa mtoto ambaye hajazaliwa atakabiliwa na magonjwa yanayohusiana na ulemavu wa intrauterine, lakini pia kujua asili na sababu za ugonjwa wa kuzaliwa.

Hata hivyo, habari yoyote ni ya thamani tu ikiwa ni wakati. Kama tunazungumzia kuhusu hali ya ukuaji wa fetasi, kasi ya kupata matokeo ya mtihani inakuwa muhimu sana.

Kwa hiyo, njia ya SAMAKI, ambayo inaruhusu mtu kutathmini uwepo wa matatizo ya kawaida ya maendeleo katika kiinitete kwa muda mfupi iwezekanavyo, inahitajika sana katika uchunguzi wa maumbile.

FISH ni muhtasari unaofafanua kiini cha teknolojia ya kugundua kasoro za kromosomu - mseto wa fluorescence in situ - mseto wa fluorescent katika mazingira ya "nyumbani".

Mbinu hii, iliyopendekezwa mwishoni mwa miaka ya 70 ya karne iliyopita na J. Goll na M.-L. Pardew, kwa kuzingatia uwezekano wa kurejesha mlolongo wa vipande asidi ya nucleic(DNA au RNA) baada ya kuwa denatured.

Waandishi wameunda njia inayoruhusu, kwa kutumia mseto wa in situ wa vichunguzi vya DNA vilivyoundwa kwa njia bandia (vichunguzi) na nyenzo za cytogenetic zilizochukuliwa kwa uchambuzi, kubaini kupotoka kwa kiasi na ubora wa kromosomu zinazovutia.

Mwishoni mwa karne iliyopita, baada ya maombi yenye mafanikio kwa kuchafua vichunguzi vya DNA kwa rangi za fluorescent, mbinu ya FISH ilipata jina lake na tangu wakati huo imeboreshwa sana na kubadilishwa.

Mbinu za kisasa za uchambuzi wa SAMAKI hujitahidi kuhakikisha kuwa kiwango cha juu kinachowezekana habari kamili kuchambua nyenzo za kijeni zilizokusanywa katika utaratibu mmoja wa mseto.

Ukweli ni kwamba mara moja baada ya mseto, ni idadi ndogo tu ya chromosomes ya nyenzo sawa ya cytogenetic inaweza kutathminiwa. Uwezo wa kuchanganya tena minyororo ya DNA hupungua mara kwa mara.

Kwa hivyo, kwa sasa katika utambuzi wa maumbile, njia ya mseto wa in situ hutumiwa mara nyingi kujibu maswali haraka kuhusu aneuploidies zilizopo, za kawaida kwenye chromosomes 21, 13, 18, na vile vile kwenye kromosomu za ngono X, Y.

Sampuli yoyote ya tishu au seli inafaa kwa uchanganuzi wa SAMAKI.

Katika uchunguzi wa ujauzito, hizi zinaweza kuwa sampuli za damu, ejaculate, au.

Kasi ya kupata matokeo inahakikishwa na ukweli kwamba seli zilizopatikana kutoka kwa nyenzo zilizochukuliwa kwa uchambuzi hazihitaji kupandwa katika vyombo vya habari vya virutubisho, kufikia mgawanyiko wao kwa idadi inayotakiwa, kama ilivyo kwa njia ya classical ya karyotyping.

Nyenzo zilizochaguliwa hupita mafunzo maalum kupata kusimamishwa kwa seli safi iliyokolea. Ifuatayo, mchakato wa kubadilisha sampuli ya DNA na DNA ya asili ya sampuli iliyo chini ya utafiti unafanywa kwa hali ya mstari mmoja na mchakato wa mseto, wakati ambapo uchunguzi wa DNA wa rangi huingizwa na DNA ya sampuli.

Kwa hivyo, chromosomes zinazohitajika (rangi) katika seli zinaonekana, idadi yao, muundo wa miundo ya maumbile, nk hupimwa. Macho ya darubini maalum ya fluorescent inakuwezesha kuchunguza minyororo ya DNA inayowaka.

Hivi sasa, njia ya SAMAKI inatumiwa sana kwa madhumuni ya utambuzi kutambua magonjwa ya kijeni, kupotoka kwa chromosomal katika dawa ya uzazi, oncology, hematology, dosimetry ya kibiolojia, nk.

Je, uchunguzi wa SAMAKI wa fetasi unatumikaje?

Katika uwanja dawa ya uzazi Njia ya SAMAKI, kama moja ya njia za utambuzi wa cytogenetic ya Masi, hutumiwa katika hatua zote.

• wanandoa.

Kuamua karyotype ya wazazi wa baadaye, inafanywa mara moja, kwani genome ya binadamu inabaki bila kubadilika katika maisha yote.

Karyotyping ya wanandoa kabla ya kupata mtoto itasaidia kutambua ikiwa wazazi ni wabebaji wa patholojia za urithi ambazo zimerithiwa, pamoja na zile zilizofichwa. Na pia hali ya jumla genome ya mama na baba ya baadaye, ambayo inaweza kuathiri mafanikio ya kumzaa mtoto na kubeba mimba kwa muda.

Utambuzi kwa kutumia njia ya SAMAKI katika kesi hii mara nyingi hufanya kama uchunguzi wa ziada kwa karyotyping ya kitambo, wakati wa kubaini. patholojia za chromosomal katika nyenzo zinazojifunza ( damu ya venous wazazi) ikiwa mosaicism inashukiwa.

Uchunguzi wa ziada kwa kutumia njia ya FISH utathibitisha au kukanusha kwa uhakika kuwepo kwa tatizo linaloshukiwa kuwa katika seli za mzazi wa baadaye.

• Utafiti wa ejaculate.

Imeonyeshwa kwa shida na uzazi kwa wanandoa kwa sababu ya "sababu ya kiume". Uchambuzi wa manii kwa kutumia njia ya SAMAKI itakuruhusu kutathmini kiwango cha manii isiyo ya kawaida katika seti ya kromosomu, na pia kuamua ikiwa mwanamume ni mtoaji wa magonjwa ya kijeni yanayohusishwa na ngono.

Iwapo wanandoa wataamua kutunga mimba kwa kutumia IVF, uchambuzi wa SAMAKI wa ejaculate utaruhusu uteuzi wa mbegu bora zaidi ili kurutubisha yai.

• Na IVF.

Kwa utambuzi wa kijeni kabla ya kupandikizwa (PGD). Kulingana na matokeo ya tafiti za karyotype ya wazazi, uwezekano wa kupotoka kwa chromosomal na maumbile ambayo inaweza kupitishwa kwa kiinitete imedhamiriwa.

Shukrani kwa uwezo wa uchunguzi wa FISH, utafiti wa afya ya maumbile ya viini vinavyotokana vinaweza kufanywa katika suala la masaa kabla ya uhamisho kwenye cavity ya uterine ili kuhakikisha mimba na fetusi inayojulikana yenye afya.

Kwa kuongeza, uwezo wa PGD hufanya iwezekanavyo kuamua jinsia viinitete, na, kwa hiyo, "agiza" jinsia ya mtoto ambaye hajazaliwa, ikiwa ni lazima.

• Wakati wa ujauzito.

Katika utambuzi wa ujauzito: uchambuzi wa seli za fetasi zilizopatikana kwa sampuli ya chorionic villus, amniocentesis au cordocentesis, kwa kutumia FISH. vituo vya matibabu kawaida hutolewa kwa kuongeza classic utafiti wa maumbile seli za fetasi (karyotyping).

Njia hii ni ya lazima wakati inahitajika kupata jibu haraka juu ya uwepo wa kasoro za kawaida za kromosomu katika fetasi: trisomy kwenye chromosomes 21, 18, 13, kupotoka kwa chromosomes X na Y, wakati mwingine pia aneuploidies kwenye kromosomu 14 (au). 17), 15, 16.

Faida za uchambuzi wa SAMAKI

Kufanya uchambuzi wa maumbile kwa kutumia njia ya SAMAKI, ingawa inabakia leo kuwa njia msaidizi ya kugundua ugonjwa wa chromosomal, uwezekano wa utekelezaji wake umedhamiriwa na faida zisizoweza kuepukika:

• kasi ya kupata matokeo kuhusu kromosomu zilizojaribiwa ni ndani ya saa chache - si zaidi ya 72.

Hii inaweza kuwa muhimu ikiwa hatima ya ujauzito inategemea uchunguzi wa wanajeni;

• unyeti wa juu na uaminifu wa njia ya SAMAKI - uchambuzi wa mafanikio unawezekana kwa kiasi kidogo cha biomaterial - seli moja ni ya kutosha, kosa la matokeo si zaidi ya 0.5%.

Hii inaweza kuwa muhimu wakati kiasi kidogo seli katika sampuli ya asili, kwa mfano, wakati zinagawanyika vibaya.

• uwezekano wa kufanya uchunguzi kwa kutumia njia ya SAMAKI katika hatua yoyote ya ujauzito (kutoka wiki ya 7) na kutumia sampuli yoyote ya kibiolojia: vipande vya chorion, maji ya amniotic, damu ya fetasi, nk.

Ninaweza kufanya utambuzi wapi kwa kutumia njia ya SAMAKI?

Huko Moscow, njia ya SAMAKI ya utambuzi wa ujauzito wa shida ya chromosomal ya fetasi hutumiwa katika vituo vya matibabu vifuatavyo:

Kama kanuni, kliniki hutoa huduma za uchunguzi wa FISH kama sehemu ya kariyotipu kamili ya fetasi kupitia uingiliaji kati kwa ada ya ziada. Na, kama sheria, wazazi wa baadaye wanakubali kulipa ziada, kwa sababu shukrani kwa njia ya SAMAKI, katika siku chache tu unaweza kujua mambo muhimu zaidi kuhusu mtoto wako.