Принцип антиглобулинового . Антиэритроцитные антитела неполного типа и молекулы комплемента (С), находящиеся на поверхности эритроцитов выявимы - прямой тест - их агглютинацией в контакте с животной сывороткой, содержащей антитела на человеческий антиглобулин (антиглобулиновая сыворотка). Свободные в сыворотке неполные антитела выявляются - косвенный тест - их закреплением на смеси нормальных эритроцитов группы 0, все антигены которых принадлежат известной резус-системе, далее агглютинируемые под воздействием антиглобулиновой сыворотки.
Материалы, реагенты антиглобулинового теста Кумбса : пробирки на 10/100 мл; градуированные пипетки на 1, 2 мл; пастеровские пипетки; штативы; предметные нешлифованные стекла; 8,5‰ раствор NaCl; эритроциты. Эритроциты больного, равно как и принадлежащие к группе 0 получим из свежеотобранной крови на противосвертывающем веществе (раствор ЭДТА).
Эритроциты группы 0 отобрать с таким расчетом, чтобы они исходили от лиц в норме и содержали все антигены резус-системы . Их можно сохранять до 7 дней в аутологической плазме, при температуре + 4°С. В случае отсутствия эритроцитов группы 0, известной антигенной мозаики, можно использовать смесь эритроцитов группы 0, резус-положительных и резус-отрицательных эритроцитов.
Сыворотка больного должна быть свежеотобранной.
Антиглобулиновая сыворотка производится институтом им. д-ра И. Кантакузино, выпускается в лиофилизированном виде в содержащих 1 мл ампулах. После растворения сыворотку хранить при температуре -20°С.
Техника антиглобулинового теста Кумбса
:
а) Прямой тест Кумбса
: эритроциты больного промыть 3 раза 8,5‰ раствором NaCl.
На несколько предметных стекол нанести по крупной капле из разведений антиглобулиновой сыворотки, а рядом - по маленькой капле из осадка эритроцитов больного; перемешать капли углом стекла. Приготовленный материал оставить на столе 5 мин., затем исследовать на наличие агглютинатов. В случае положительного результата определить максимальный агглютинирующий титр.
б) Косвенный тест Кумбса : эритроциты группы 0, резусположительные и резус-отрицательные промыть 3 раза 8,5‰ раствором NaCl и подвергнуть воздействию сыворотки больного из расчета 2 капли эритроцитов на 8-10 капель сыворотки, затем, в течение 60 мин., провести инкубацию при температуре 37°С. После этого снова трижды промыть эритроциты и воздействовать на них антиглобулиновой сывороткой, по указаниям для прямого теста Кумбса.
Когда речь идет о холодовых активных антителах сенсибилизацию эритроцитов группы 0 провести 60 мин. при температуре + 4°С.
Примечание : 1) Не проводить прямой тест Кумбса на эритроцитах, сохраненных один или несколько дней при температуре + 4°С или комнатной температуре, поскольку результаты могут оказаться ложноположительными за счет фиксации имеющихся в нормальной сыворотке непол ных, активных на холоде антител. 2) В случаях выраженной гиперпротеинемии промывать эритроциты 4-5 раз и проверить отсутствие сывороточных белков в последней промывной жидкости, с помощью сулфосалициловой кислоты.
Возможный остаток 2 мкг IgG/мл в эритроцитном осадке может нейтрализовать антиглобулиновую сыворотку . Тест Кумбса можно проводить и с помощью моноспецифических анти-IgG, -IgM, -IgA -С3 и -С4 сывороток в целях уточнения вида, находящихся на поверхности эритроцитов глуболин, например, у страдающих аутоиммунной гемолитической анемией.
Антиглобулиновый тест, или реакция Кумбса проводится для того, чтобы выявить определенные антитела, которые атакуют красные кровяные клетки (эритроциты).
Антитела это белки, производимые иммунной системой. Как правило, антитела связываются с посторонними веществами, такими как бактерии и вирусы, и уничтожают их.
2. Зачем нужен тест на антитела?
Тест на антитела может проводиться в следующих случаях:
Перед переливанием крови
Вы наверняка знаете, что у человека может быть одна из четырех групп крови. И антиглобулиновый тест можно проводить для определения возможности переливания крови. Если вам делают переливание, кровь донора должна соответствовать вашему типу (иметь одинаковые антигены). Если при переливании антигены отличаются, иммунная система разрушит перелитые клетки. Это может привести к серьезным заболеваниям и даже смерти. Именно поэтому поиск нужного типа крови является столь важным фактором.
Для выявления риска резус-сенсибилизации
Резус это антиген. Его полное название - резус-фактор. Тест Кумбса используется для обнаружения антител к резус-фактору в крови у беременных женщин. Если женщина с отрицательным резус-фактором крови беременна ребенком с положительным резус-фактором (он может передаваться от отца), есть риск наступления резус-сенсибилизации. Резус- сенсибилизация происходит, когда кровь ребенка смешивается с кровью матери во время беременности или родов. Если группа крови матери несовместима с группой крови ребенка, то ее иммунная система может атаковать плод, воспринимая его чужеродным объектом. При этом может развиться тяжелое заболевание, именуемое эритробластозой плода. В редких случаях, если заболевание не лечить, плод или новорожденный могут погибнуть.
Женщине с отрицательным резус-фактором крови могут провести инъекцию анти-Rh- гаммаглобулина (например, RhoGAM), используемого для предотвращения развития Rh- гемолитической болезни.
Для диагностики аутоиммунной гемолитической анемии
Аутоиммунная гемолитическая анемия является редким заболеванием, связанным с образованием антител к собственным антигенам эритроцитов.
3. Типы антиглобулиновой пробы
Существуют два типа антиглобулиновой пробы, или реакции Кумбса: прямой и непрямой.
Прямая реакция Кумбса, или прямой антиглобулиновый тест обнаруживает антитела, связанные с эритроцитами. Он используется для определения анемии. При этой болезни эритроциты разрушаются быстрее, чем производятся.
Непрямая реакция Кумбса, или непрямой антиглобулиновый тест проводится для поиска антител, не связанных с эритроцитами. Для пробы используется сыворотка крови, в которой и находятся антитела. Эта процедура достаточно редкая: в основном ее проводят для определения возможности переливания крови или как этап обследования беременных женщин.
4. Результаты реакции Кумбса
Норма:
Отрицательный результат теста - антитела не обнаружены.
- Прямой тест Кумбса . Отрицательный результат прямого антиглобулинового теста означает, что ваша кровь не имеет антител, связанных с эритроцитами.
- Непрямой тест Кумбса . Отрицательный результат непрямого антиглобулинового теста означает, что ваша кровь совместима с кровью донора. Для беременной женщины такой результат означает, что ее организм не выработал антитела против резус- положительного типа крови своего ребенка (резус-сенсибилизации не произошло).
Отклонение от нормы:
- Прямой тест Кумбса . Положительный результат прямого антиглобулинового теста означает, что ваша кровь имеет антитела, которые борются против эритроцитов. Это может быть вызвано переливанием несовместимой крови или такими заболеваниями, как гемолитическая анемия или гемолитическая болезнь новорожденных (ГБН).
- Непрямой тест Кумбса . Положительный результат непрямого антиглобулинового теста означает, что ваша кровь несовместима с кровью донора. У беременной женщины такие результаты означают присутствие антител против положительного резус-фактора крови ребенка (резус-сенсибилизация). Если ребенок имеет положительный резус-фактор крови, мать будет внимательно наблюдаться врачом на протяжении всей беременности.
Тест Кумбса
Тест Кумбса – антиглобулиновая проба, направленная на выявление в резус-отрицательной крови неполных антиэритроцитарных антител к резус-фактору – специфическому белку, который находится на поверхности эритроцитов резус-положительной крови. Существует два вида данного теста: прямой – выявление антител на поверхности эритроцитов, непрямой – выявление антител в сыворотке крови. Прямая проба осуществляется при диагностике и мониторинге лечения заболеваний крови: гемолитической анемии, гемолитической болезни новорожденных и других. Непрямая проба выполняется для оценки совместимости крови донора и реципиента при переливании, а также для определения наличия и риска резус-конфликта при планировании и ведении беременности. Материалом для теста Кумбса является венозная кровь, исследование проводится методами на основе реакции агглютинации. В норме обе пробы дают отрицательный результат. Анализ выполняется в течение одного дня.
Тест Кумбса – клиническое исследование резус-отрицательной крови, направленное на обнаружение антител к резус-фактору. Проба используется для выявления риска развития резус-конфликта и гемолитических реакций. У каждого человека поверхность эритроцитов содержит определенный набор антигенов или агглютиногенов – соединений различной природы, по наличию или отсутствию которых судят о группе крови и резус-факторе. Существует множество видов антигенов, в медицинской практике наибольшее практическое значение имеют агглютиногены A и B, определяющие группу крови, и агглютиноген D – резус-фактор. При положительном резус-факторе на внешней мембране эритроцитов определяются антигены D, при отрицательном – нет.
Тест Кумбса, который также называют антиглобулиновой пробой, направлен на выявление в крови неполных антиэритроцитарных антител к системе резус-фактора. Антитела к резус-фактору – специфические иммуноглобулины, которые вырабатываются в резус-отрицательной крови при попадании в нее эритроцитов с агглютиногенами D. Это может произойти при смешении крови плода и беременной, при гемотрансфузиях, проведенных без предварительного типирования крови. Тест Кумбса существует в двух вариантах – прямой и непрямой. При выполнении прямого теста Кумбса выявляются антитела, закрепленные на поверхности эритроцитов. Исследование используется для установления причины гемолитической реакции. Непрямой тест Кумбса направлен на выявление антиэритроцитарных антител в плазме крови. Он необходим для определения совместимости крови донора и реципиента или матери и плода, позволяет предупредить развитие резус-конфликта и последующего гемолиза эритроцитов.
Кровь для проведения обоих вариантов теста Кумбса берется из вены. Анализ выполняется методом агглютинации с использованием антиглобулиновой сыворотки. Результаты исследования находят применение в гематологии при выявлении причин гемолитических реакций, в хирургии и реаниматологии при проведении гемотрансфузий, в акушерстве и гинекологии при мониторинге беременностей у женщин с резус-отрицательной кровью.
Показания
Прямой тест Кумбса, выявляющий антитела, закрепленные на поверхности эритроцитов, назначается при гемолитических реакциях (разрушении эритроцитов) различного происхождения. Исследование показано при первичной аутоиммунной гемолитической анемии, посттрансфузионной гемолитической анемии, гемолитической болезни новорожденного, гемолизе эритроцитов, вызванном аутоиммунными, опухолевыми или инфекционными заболеваниями, а также приемом лекарственных средств, например, хинидина, метилдопы, прокаинамида. Непрямой тест Кумбса, определяющий антитела в плазме крови, используется для предупреждения развития резус-конфликта. Он показан пациентам при подготовке к гемотрансфузиям, а также беременным с отрицательным резус-фактором при условии, что будущий отец ребенка имеет положительный резус-фактор.
С целью определения резус-совместимости тест Кумбса не назначается пациентам с резус-положительной кровью. В этих случаях на поверхности эритроцитов уже имеются антигены, выработка антител не может быть спровоцирована гемотрансфузией или попаданием крови плода в кровоток беременной. Также исследование не показано беременным женщинам, если оба родителя имеют отрицательный резус-фактор – передающийся по наследству рецессивный признак. Ребенок в таких парах всегда имеет резус-отрицательную кровь, иммунологический конфликт с матерью невозможен. При гемолитических патологиях антиглобулиновая проба не используется с целью контроля успешности терапии, так как результаты не отражают активность процесса разрушения эритроцитов.
Ограничением теста Кумбса является трудоемкость процедуры исследования – для получения достоверных результатов необходимо соблюдение температурных и временных режимов, правил подготовки реагентов и биоматериала. К преимуществам теста Кумбса относится его высокая чувствительность. При гемолитической анемии результаты этого анализа остаются положительными, даже если показатели гемоглобина, билирубина и ретикулоцитов нормализуются.
Подготовка к анализу и забор материала
Материалом для выполнения теста Кумбса является венозная кровь. Специальных требований ко времени проведения процедуры забора крови и к подготовке пациента нет. Как и при любом исследовании рекомендуется выдержать перерыв после приема пищи не менее 4 часов, а в последние 30 минут отказаться от курения, физических нагрузок, избегать эмоционального напряжения. Также стоит заранее обсудить с врачом необходимость отмены принимаемых лекарств – некоторые препараты могут исказить результаты теста Кумбса. Кровь берут с помощью шприца из локтевой вены, реже из вены на тыльной стороне кисти. В течение нескольких часов материал доставляется в лабораторию.
При выполнении прямого теста Кумбса к сыворотке крови пациента добавляется антиглобулиновая сыворотка. Через некоторое время смесь исследуется на наличие агглютинатов – они образуются, если на эритроцитах есть антитела. При положительном результате определяется агглютинирующий титр. Непрямой тест Кумбса состоит из большего количества этапов. Сначала антитела, находящиеся в сыворотке, в ходе инкубации фиксируются на введенных эритроцитах. Затем к образцу добавляется антиглобулиновая сыворотка, через некоторое время определяется наличие и титр агглютинатов. Сроки выполнения анализа – 1 день.
Нормальные результаты
В норме результат прямой теста Кумбса отрицательный (-). Это означает, что в крови нет антител, связанных с эритроцитами, и они не могут быть причиной гемолиза. Нормальный результат непрямого теста Кумбса тоже отрицательный (-), то есть антитела к резус-фактору в плазме крови отсутствуют. При подготовке к гемотрансфузии для реципиента это означает совместимость с кровью донора, при мониторинге беременности – отсутствие резус-сенсибилизации матери, низкий риск развития иммунологического конфликта. Физиологические факторы, такие как особенности питания или физической активности, не могут повлиять на результат пробы. Поэтому если результат положительный, необходима консультация врача.
Диагностическое значение анализа
Положительный результат теста Кумбса выражается качественно, от (+) до (++++), либо количественно, титрами от 1:16 до 1:256. Определение концентрации антител на эритроцитах и в сыворотке крови выполняется в обоих видах пробы. При положительном результате прямого теста Кумбса на внешней мембране эритроцитов выявляются антитела, которые приводят к разрушению этих клеток крови. Причиной может стать переливание крови без предварительного типирования – посттрансфузионная гемолитическая реакция, а также эритробластоз новорожденного, гемолитическая реакция вследствие применения лекарств, первичная или вторичная аутоиммунная гемолитическая анемия. Вторичное разрушение эритроцитов может быть вызвано системной красной волчанкой, синдромом Эванса, макроглобулинемией Вальденстрема, пароксизмальной холодовой гемоглобинурией, хроническим лимфолейкозом, лимфомой, инфекционным мононуклеозом, сифилисом, микоплазменной пневмонией.
Положительный результат непрямого теста Кумбса указывает на наличие в плазме антител к резус-фактору. На практике это означает, что произошла резус-сенсибилизация, существует возможность развития резус-конфликта после вливания крови донора, во время беременности. Для предупреждения осложнений беременности женщины с положительным результатом теста Кумбса ставятся на специальный учет.
Лечение отклонений от нормы
Тест Кумбса относится к изосерологическим исследованиям. Его результаты позволяют выявить гемолитическую реакцию, а также определить совместимость крови донора и реципиента, матери и плода, чтобы предупредить развитие резус-конфликта. Если результат пробы положительный, то необходимо обратиться за консультацией к лечащему врачу – акушеру-гинекологу, гематологу, хирургу.
– исследование, которое помогает определить содержание неполных антиэритроцитарных антител в крови. Такой антиглобулиновый тест позволяет выявить антитела к у беременных женщин.
Кроме того, он позволяет на начальных стадиях диагностировать гемолитическую анемию у новорожденных детей с резус-конфликтом. Это помогает предотвратить разрушение эритроцитов, необходимых для нормального кроветворения. Данный тест был создан в 1945 году Робертом Кумбсом, из-за чего и получил такое название.
Проба Кумбса – разностороннее исследование, позволяющее своевременно диагностировать нарушения в кроветворении как у взрослых, так и детей.
Существуют следующие виды таких тестов:
- Прямая проба Кумбса – позволяет определить антитела, располагающиеся на поверхности эритроцитов. Обычно такое исследование назначается при подозрении на гемолиз, аутоиммунную гемолитическую анемию, другие аутоиммунные заболевания. Кроме того, оно проводится после медикаментозной терапии препаратами на основе хинина, пенициллина или метилдопа или же после переливания крови. Для получения более точных результатов перед исследованием необходимо полностью отказаться от приема лекарств хотя бы за 1 неделю.
- Непрямая проба Кумбса – тест, с помощью которого можно выявить антиэритроцитарные антитела в плазме. Обычно его проводят при беременности и перед переливанием крови. Антиэритроцитарные антитела появляются в крови человека при реактивной работе иммунитета или же как реакция на некоторые лекарственные средства. Для более точного изучения проводится сразу несколько заборов с интервалом в 2 часа.
Показания к проведению
Проба Кумбса проводится только при наличии серьезных показаний. Это дорогостоящее и длительное исследование, которое является специфическим тестом.
Обычно показаниями для его проведения считаются следующие ситуации:
- При переливании крови . Тест позволяет определить, приживется ли кровь реципиента в организме человека, а также возможно ли донорство. В таком случае необходимо исследовать материал как донора, так и реципиента. Важно определить характер антител, ведь в случае их несовместимости в организме на фоне резус-конфликта разрушается иммунная система. Это приводит к развитию серьезных заболеваний, а в редких случаях даже смерти.
- Перед хирургическими вмешательствами, когда существует риск кровопотери . Это делается для того, чтобы врач смог моментально ввести подходящую кровь для восстановления организма.
- Для выявления резус-сенсибилизации. Резус – специфический антиген, который возникает в организме каждой женщины во время беременности. Если же у матери положительный резус, а у отца отрицательный, или же наоборот, зависимости для ребенка нет – он может унаследовать любой. Если же ребенок получает противоположный материнскому резус, велик риск сенсибилизации. Это явление характеризуется смешением крови матери и ребенка. Это может произойти как во время вынашивания плода, так и в процессе рождения.
Если в организме беременной женщины возникает резус-конфликт, то иммунитет матери начинает воспринимать свой плод как инородное тело. Из-за этого велик риск того, что он начнет его атаковать.
В результате таких действий у малыша могут развиться серьезные патологии. Чаще всего возникает эритробластоз – явление, при котором организм ребенка не может вырабатывать достаточное количество эритроцитов.
Кроме того, из-за резус-конфликта может произойти гибель плода в утробе или сразу же после рождения. При правильном подходе к лечению таких серьезных последствий удается легко избежать.
Отклонения от нормы
При положительном результате на реакцию Кумбса врач делает вывод о том, что в сыворотке крови имеются антитела к эритроцитам. Это говорит о том, что кровь донора не может быть совместима с кровью пациента.
Если же положительный результат диагностируется в организме беременной с резус-отрицательной кровью, то в ее организме присутствуют антитела к крови плоду.
Это говорит о резус-конфликте, который требует крайне внимательного подхода к ведению беременности со стороны врача, а также выполнение всех указаний и рекомендаций от женщины.
Если же антитела присутствуют в крови ребенка, диагностируется гемолитическая болезнь новорожденных. В таком случае проводится повторное исследование, позволяющее определить, происходит ли нарастание цитра антител в кровь будущей матери или нет.
Возможные осложнения от теста Кумбса
Тест Кумбса – довольно безопасное исследование, позволяющее на начальных стадиях диагностировать ряд аутоиммунных заболеваний. Оно редко вызывает осложнения, обычно негативное последствия связаны с забором крови.
Они заключаются в:
- Кровотечениях ли кровоизлияниях под кожу
- Головокружениях и обмороках
- Инфекционном заражении
7 295
